一種基于神經細胞膜電位熒光探針的河豚毒素毒性檢測細胞模型*

戴小宇 張吉芊竹 李勁鋒 任麗君 賈 睿 朱玉平 朱江波 陳基快△

（海軍軍醫大學，1 海軍醫學系衛生毒理學教研室，2 基礎醫學院實驗教學中心，上海 200433；3 上海海洋大學海洋生態與環境學院，上海 201306）

河豚毒素（tetrodotoxin，TTX）[1-2]是迄今發現毒性最強的海洋神經毒素之一，為一種電壓門控鈉通道（VGSCs）[3]的阻滯劑，能選擇性地與肌細胞、神經細胞膜表面的鈉離子通道受體結合，通過對鈉離子通道的阻斷而導致神經沖動的傳導障礙，進而引起一系列神經麻痹反應，最終導致生物因呼吸抑制至衰竭而死亡[4]。TTX 毒性極強，引起動物死亡的最小劑量為8 μg/kg[5]，中毒潛伏期短，短至10～30 min 發病，若不急救最快10 min 內發生死亡[6]。TTX 中毒目前尚無特效解毒藥[7]，因此，開展TTX 的新型定性定量檢測技術和毒性評價平臺研究具有重要意義。目前海洋毒素的常用檢測法有小鼠生物法、酶聯免疫（ELISA）檢測法和高效液相色譜法等，均存在一些不足之處[8]。體外細胞檢測法是一種新型海洋毒素的檢測方法，具有成本低、操作方便、符合動物福利等優點，值得進一步探索。大部分海洋毒素通過與可興奮膜中的電壓敏感鈉通道相互作用而發揮作用[9]。SH-SY5Y 人神經母細胞瘤細胞可以穩定表達一系列電壓門控的Ca2+和Na+通道，常被用于評價生物毒素的毒性作用[10]。膜電位熒光探針是用于研究離子通道的重要工具。本研究擬采用SH-SY5Y 細胞和膜電位熒光探針建立一種可以快速評價河豚毒素功能的細胞模型，用于后續的毒性評價和解毒劑篩選。……