p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險關系的系統評價與Meta分析

徐文斌，龔乘丙，李 堯，鐘廣鑫，沈 翔，徐 斌，蔣文龍，劉江波

1. 河南科技大學第一附屬醫院甲狀腺乳腺腫瘤外科（河南洛陽 471000）

2. 河南科技大學醫學部臨床醫學院（河南洛陽 471000）

3. 河南科技大學醫學部基礎醫學院（河南洛陽 471000）

4. 廈門大學附屬第一醫院（福建廈門 361000）

5. 南京大學醫學院附屬鼓樓醫院（南京 210008）

乳腺癌是全球女性最常見的腫瘤之一。美國乳腺癌發病率占女性癌癥的30%，位居女性惡性腫瘤之首[1]。據我國國家癌癥中心統計，2020年中國女性乳腺癌新發病例數為416 371例，居女性癌癥新發病例數首位[2]。乳腺癌多呈散發性發病，部分為遺傳性發病，其發病機制尚不完全清楚[3]。多種基因改變產生異常基因產物或產物功能發生改變，均可導致乳腺癌發生，因此尋找乳腺癌易感基因至關重要[4]。

抑癌基因p53是人類癌癥中最常見的突變基因之一，乳腺癌病例中p53突變率達25%～30%[5]。p53突變后，修復損傷DNA和誘導凋亡等抑癌功能喪失，進而產生促癌作用[6]。因此，p53基因突變等狀態改變可能與乳腺癌發生風險有關[7]。已有研究探討了p53基因多個位點的多態性與乳腺癌發生風險的關系，但尚無明確結論[8-11]。p53基因第4號外顯子第72密碼子（codon 72）是p53基因多態性與癌癥發生風險研究的熱點，研究表明p53表達差異多與codon 72多態性有關，而這種表達差異可能與腫瘤發生有關[12]。現有研究對攜帶codon 72基因多態性與女性乳腺癌發生風險關系的結論尚未達成共識[13-14]。多項系統評價證據顯示p53 codon 72基因多態性與乳腺癌發生風險存在相關性[15-16]，但部分針對中國女性的研究則顯示p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險尚不明確。目前，尚無針對p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌罹患風險關系的系統證據，因此本研究系統檢索了國內外已發表的相關研究，對p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險之間的關系進行系統評價和Meta分析，以期獲得p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險的最佳證據。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標準

納入標準：①研究對象為確診的中國女性乳腺癌病例，對照組為社區健康人群或醫院的非癌患者；②提供了乳腺癌患者和對照組人群的p53 codon 72基因多態性數據；③研究設計類型為病例對照研究或隊列研究；④提供了可計算出效應量比值比（odds ratio，OR）和95%置信區間（confidence interval，CI）的數據；⑤發表在國內外期刊的英文或中文原始研究。

排除標準：①非英文或中文文獻；②未經過同行評議或無法獲得完整遺傳信息的研究，如病例系列、會議報告、信函、綜述等；③數據重復或明顯錯誤的研究。

1.2 文獻檢索策略

計算機檢索 PubMed、Embase、Web of Science、中國知網和萬方數據庫，收集p53 codon 72基因多態性與乳腺癌發生風險的相關研究，檢索時限為建庫至2021年3月31日。中文檢索詞包括p53、多態性和乳腺癌；英文檢索詞包括p53、TP53、polymorphism和breast cancer。并對已發表的相關綜述、Meta分析、原始文獻手工檢索追溯相關文獻。以PubMed為例，具體檢索策略見框1。

框1 PubMed檢索策略Box 1. PubMed search strategy

1.3 文獻篩選、資料提取與納入研究的偏倚風險評價

由 2 名研究者根據納入與排除標準獨立篩選文獻與提取資料，并進行交叉核對，若遇分歧則通過討論或與第3名研究者協商解決。提取內容包括第一作者、發表年份、基因位點、樣本量、病例組和對照組基因型分布等。2 名研究者采用紐卡斯爾-渥太華量表（NOS）評價納入研究的偏倚風險，并交叉核對結果。

1.4 統計學分析

采用RevMan 5.4進行Meta分析，Stata 16.0進行Egger's檢驗。使用擬合優度卡方檢驗評估納入文獻的對照組基因型頻率是否符合哈迪-溫伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE），P＞0.05 時，符合 HWE，表示樣本具有群體代表性。計算納入研究的合并OR值和95%CI，評估PR和PP基因型與野生型RR純合子的乳腺癌發生風險。通過 χ2檢驗和I2進行異質性評價，若P＞0.1，I2＜50%，表示研究間異質性較小，采用固定效應模型進行合并分析，反之采用隨機效應模型。采用亞組分析探討潛在的異質性來源。通過逐一去除納入的研究，觀察剔除某研究后合并效應量的變化行敏感性分析。應用漏斗圖和Egger's檢驗[17]評價納入研究的偏倚。

2 結果

2.1 文獻篩選流程及結果

初檢共獲得相關文獻2 602篇，通過逐層篩選，最終納入13項研究，其中英文9篇[18-26]、中文4篇[27-30]。文獻篩選過程及結果見圖1。

圖1 文獻篩選流程圖Figure 1. Flow chart of study selection

2.2 納入研究的基本特征及偏倚風險結果

13項研究共包括5 411例乳腺癌患者和5 758例醫院非癌患者或社區健康人群，其中1項研究對照組來自醫院[19]，其余均來自社區健康人群[18,20-30]。除2項研究外[19,28]，其余研究對照組基因型分布均符合HEW。納入研究的基本特征和偏倚風險評價結果見表1。

表1 納入研究的基本特征Table 1. Basic characteristics of included studies

2.3 Meta分析

Meta分析結果顯示，純合子模型[PP vs. RR：OR=1.16，95%CI（0.93，1.46），P=0.200]、隱性模型 [PP vs. RR+PR：OR=1.09，95%CI（0.91，1.32），P=0.340]、顯性模型 [PP+PR vs. RR：OR=1.13，95%CI（0.97，1.30），P=0.120]均未顯示 codon 72 基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險相關，但雜合子模型 [PR vs. RR：OR=1.15，95%CI（1.05，1.26），P=0.002]提示p53codon 72基因多態性可能與中國女性乳腺癌發生風險有關（圖2）。

圖2 p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險森林圖Figure 2. Forest plot of p53 codon 72 gene polymorphism and breast cancer risk in Chinese women

2.4 亞組分析

對照組來源方面，12項研究對照組為社區健康人群，1項對照組為醫院非癌患者，亞組分析顯示，當對照組為社區健康人群時，雜合子模型[PR vs. RR：OR=1.16，95%CI（1.05，1.27），P=0.002]顯示p53codon 72基因多態性與乳腺癌發生風險有關。樣本量方面，11項研究樣本量≥ 100，2項研究＜100，亞組分析顯示，樣本量≥100的研究，雜合子模型[PR vs. RR：OR=1.16，95%CI（1.06，1.27），P=0.001]和顯性模型 [PP+PR vs. RR：OR=1.17，95%CI（1.02，1.35），P=0.020]顯示p53codon 72基因多態性與乳腺癌發生風險相關。HWE方面，11項研究符合HWE，2項不符合HWE，亞組分析顯示，當對照組基因型頻率符合HWE，僅雜合子模型[PR vs. RR：OR=1.16，95%CI（1.06，1.27），P=0.002]顯示p53codon 72基因多態性與乳腺癌發生風險有關，詳見表2。

表2 亞組分析Table2. Subgroup analysis

2.5 敏感性分析與發表偏倚

分別剔除每項研究行敏感性分析，結果顯示隱性模型、純合子模型Meta分析結果不受單個研究的影響。但在顯性模型中，剔除Ma[23]的研究后合并效應量為1.18[95%CI（1.02，1.35），I2=49%]，反映顯性模型Meta分析的結果可能受到Ma[23]的研究影響。

漏斗圖（圖3）與Egger's檢驗（顯性模型：P=0.211；隱性模型：P=0.914；純合子模型：P=0.504；雜合子模型：P=0.165）均未顯示Meta分析存在發表偏倚。

圖3 各模型漏斗圖Figure 3. Funnel plot of each model

3 討論

p53作為重要的抑癌基因，在癌癥的發生與進展中發揮著重要作用，其遺傳變異已在多種癌癥的病因學中得到了廣泛和深入研究[31-33]。劍橋大學乳腺癌協會聯盟（Breast Cancer Association Consortium）對p53 codon 72和乳腺癌發生風險進行了匯總分析，涉及8 743例乳腺癌患者和10 618例健康對照人群，結果顯示p53 codon 72與乳腺癌的發生風險并無關聯[34]，但該證據是否適用于中國人群乳腺癌風險評估尚不明確。本研究Meta分析結果顯示，p53 codon 72雜合子基因多態性與中國女性乳腺癌的發生風險存在顯著相關；亞組分析進一步發現，樣本量較大的研究更易得出p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險相關的結論。此外，在雜合子模型中，對照組為社區健康人群或對照組基因型頻率符合HWE平衡時，也易于得出p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險相關的結論。

codon 72參與鳥嘌呤到胞嘧啶的轉換，即CGC（編碼Arg殘基）到CCC（編碼Pro殘基）[35-36]。多態性的差異導致了編碼蛋白質的不同，從而產生了結構與功能的差異[37]。研究表明，p53 codon 72編碼的氨基酸位于一段富含脯氨酸的結構域，該結構域對轉錄激活尤其重要，此外富含脯氨酸的結構域還參與了體內p53依賴性腫瘤的抑制[38]。由于PUMA、PERP與AIP1的轉錄升高，它們是細胞凋亡和轉錄調控的靶點，且p53 codon 72 Pro與iASPP的親和力更高，誘導凋亡的能力降低，所以與codon 72上的Pro殘基（P）相比，帶有Arg殘基（R）的基因產物則具有更高的凋亡活性[39]，因此p53-p72變體可以提高轉錄激活能力，促進細胞增殖[12]。基于p53的生化特性，推斷帶有Pro殘基的基因型（PP、PR）可能會增加患癌的風險。

另外，雜合子模型提示p53 codon 72基因多態性與中國女性乳腺癌發生風險有關，PR基因型乳腺癌發生風險比野生純合子基因型RR增加1.15倍。根據p53有修復DNA損傷、誘導凋亡的作用，認為p53基因多態性可能與乳腺癌發生風險有關。與野生純合子RR相比，變異純合子基因型PP未發現與中國女性乳腺癌發生風險存在相關性，在顯性模型與隱性模型中亦得出相似結論，可能與納入種群、樣本量的大小有關。Zhang等研究顯示在歐洲與非洲人群中發現p53 codon 72基因多態性與乳腺癌發生風險有關，但在亞洲人群中未發現[15]。同時聶偉偉等研究顯示帶有Arg殘基的基因型比帶有Pro殘基的基因型更易增加乳腺癌的發生風險，由此判斷基因-基因、基因-環境可能存在相互作用，從而導致不同人群基因發生的作用不同[40]。

本研究存在一定局限性。首先，由于基因-基因、基因-環境之間的相互作用可能會影響乳腺癌的發生風險，而本研究難以評估基因型多態性與乳腺癌發生心理、環境等潛在因素的相互作用，僅可預估同等乳腺癌發生風險條件下異常基因型的風險倍數。其次，本研究僅納入了中英文研究，可能會存在語言偏倚。未來需納入更多高質量、大樣本的國內外研究。