PD-L1在肺腺癌中的表達及臨床意義

李龍萍，鄧 飛，陳 芳

（1. 貴陽市公共衛生救治中心病理科，貴州 貴陽 550004 ；2. 遵義市第一人民醫院病理科，貴州 遵義563000 ；3. 遵義醫科大學附屬醫院腫瘤研究室，貴州 遵義 563000）

肺癌在臨床上較為常見。據統計，肺癌是近50 年來全球范圍內發病率和致死率增長最快的惡性腫瘤。肺癌可分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌。其中非小細胞肺癌主要包括肺腺癌、大細胞肺癌和肺鱗狀細胞癌（鱗癌）等。肺腺癌患者占原發性肺癌患者總數的40% 以上。肺腺癌主要起源于支氣管黏膜上皮，少數起源大支氣管的黏液腺，具有高度浸潤和破壞性生長的特點。肺腺癌患者的臨床表現無典型性及特異性，因此多數患者的病情在得到確診時已發展至中晚期，導致其預后不佳。近年來的研究發現，肺腺癌細胞可對機體產生免疫抑制作用，抑制機體的抗腫瘤免疫機制，進而可促進肺腺癌細胞的浸潤和轉移[1]。程序性死亡配體-1（programmed death-ligand 1，PD-L1）是新近發現的一種重要免疫抑制分子。PD-L1 可傳導抑制性信號，抑制T 淋巴細胞的功能，在腫瘤的發生、發展過程中起到重要的作用[2]。研究證實，PD-L1 在非小細胞肺癌中的表達水平可顯著增高[3]。本文主要是探討PD-L1 在肺腺癌中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年6 月至2020 年6 月期間貴陽市肺科醫院收治的100 例肺腺癌患者作為研究對象。其納入標準是：病情經病理學檢查得到確診；病歷資料完整；自愿參與本研究。在這些患者中，有男性63 例，女性37 例；其年齡為43 ～77 歲，平均年齡為（60.2±3.5）歲。

1.2 方法

采用免疫組織化學法檢測本研究中100 例患者肺腺癌標本中PD-L1 的表達情況，具體的檢測步驟是：用4%的中性福爾馬林對標本進行固定，并用石蠟進行包埋，將其制成切片。將切片放入烤箱中烘烤（溫度為72℃）60 min，使石蠟切片脫蠟至水。將經上述處理的標本放入濕盒內，用0.01 mol/L的磷酸鹽緩沖液（PBS）進行沖洗。用酸堿度（pH）為6 的檸檬酸鹽緩沖液對標本進行抗原修復，并將其在電磁爐上加熱（溫度為2000℃）2 min，冷卻后用PBS 沖洗1 次。用3%的過氧化氫（H2O2）溶液在室溫下對標本進行孵育（時間為10 min），除去其中的內源性過氧化物酶。用PBS 沖洗玻片3 次，每次沖洗5 min。在標本中滴加一抗，放入冰箱內孵育2 h，復溫1 h 或在室溫下放置60 min 后用PBS 連續沖洗3 次，每次沖洗5 min。在標本中滴加二抗，在15 min 內用PBS 沖洗3 次，每次沖洗5 min。用二氨基聯苯胺（DAB）對標本進行顯色處理，顯色的時間為3 ～5 min，用蒸餾水終止顯色。用蘇木精對標本進行復染，將其置于蘇木精溶液中浸泡21 s，用鹽酸乙醇分化后進行流水返藍處理1 ～3 min。對標本進行梯度乙醇脫水處理，采用二甲苯對標本進行透明處理后，用中性樹膠封片。本研究中所用的試劑均購于福州邁新生物技術開發有限公司。結果判讀標準：腫瘤細胞的細胞膜中若出現棕黃色顆粒，則表示PD-L1 呈陽性；腫瘤細胞中若有超過25%的細胞染色，則出現任何強度的染色（棕褐色、棕黃色、淺黃色）均表示PD-L1 呈陽性。

1.3 觀察指標

統計本研究中100 例肺腺癌患者PD-L1 的陽性表達率。對100 例肺腺癌患者中PD-L1 呈陽性表達患者的性別、年齡、吸煙情況及腫瘤的組織學分型進行分析，總結PD-L1 的表達情況與肺腺癌組織學分型及臨床病理特征之間的關系。

1.4 統計學方法

用SPSS 22.0 軟件處理本研究中的數據，計數資料用% 表示，用χ2 或確切概率法檢驗，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 100 例肺腺癌患者PD-L1 的陽性表達率

在100 例肺腺癌患者中，PD-L1 呈陽性表達的患者有22 例，其PD-L1 的陽性表達率為22.0%（22/100）。

2.2 PD-L1 的表達情況與肺腺癌組織學分型及臨床病理特征之間的關系

在22 例PD-L1 呈陽性表達的患者中，男性患者PD-L1 的陽性表達率高于女性患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；吸煙患者PD-L1 的陽性表達率高于不吸煙患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；年齡≥60 歲的患者PD-L1 的陽性表達率高于年齡＜60 歲的患者，差異有統計學意義（P＜0.05）；貼壁型肺腺癌患者與腺泡型肺腺癌患者PD-L1 的陽性表達率均高于實性肺腺癌患者和黏液性肺腺癌患者，差異有統計學意義（P＜0.05）。詳見表1。

表1 PD-L1 的表達情況與肺腺癌組織學分型及臨床病理特征之間的關系[ 例（%）]

3 討論

肺癌是一種發病率較高的呼吸系統惡性腫瘤。在所有男性罹患的惡性腫瘤中，肺癌的發病率和致死率均居第一位；在所有女性罹患的惡性腫瘤中，肺癌的發病率和致死率均居第二位。肺腺癌是肺癌常見的一種病理類型。與肺鱗癌好發于男性及吸煙群體不同，肺腺癌在女性和不吸煙群體中具有較高的發病率。多數肺腺癌均起源于較小的支氣管，為周圍型肺癌。PD-L1 由CD274 基因編碼，是免疫球蛋白超家族中的Ⅰ型跨膜蛋白。正常情況下，人體的免疫系統會對外來的抗原產生免疫反應，激活抗原特異性細胞毒性T 淋巴細胞，使T 淋巴細胞分化出多種T 細胞（包括抑制性T 細胞、殺傷性T 細胞、調節性T 細胞等），從而起到殺傷靶細胞的作用。免疫監視、免疫相持和免疫逃逸是惡性腫瘤發生、發展必經的三個階段。其中免疫逃逸是三者中的重中之重。研究發現，在免疫逃逸階段，若T 淋巴細胞的功能受限或失調，會導致機體抵抗腫瘤細胞的能力減弱，使腫瘤細胞大量生成[4]。PD-L1 在多種細胞中均有表達，包括胎盤干細胞、胰島細胞、B 淋巴細胞、T淋巴細胞、樹突狀細胞、巨噬細胞、肥大細胞等。研究表明，惡性腫瘤組織中PD-L1 的表達水平明顯高于正常組織，PD-L1 的表達水平與惡性腫瘤的分期、轉移、侵襲程度及患者的預后密切相關。相關的前瞻性研究顯示，PD-L1 的表達水平與惡性腫瘤患者的預后密切相關，因此可將PD-L1作為評估惡性腫瘤患者療效及預后的重要參考指標[5-6]。現階段，臨床上對肺腺癌患者主要是進行手術治療、化療或放療，但療效均不理想。近年來，PD-L1 免疫療法在肺腺癌的治療中逐漸得到應用，并取得了較好的效果。采用該療法治療肺腺癌的機制是：程序性細胞死亡蛋白-1（PD-1）/PD-L1 抑制劑可通過與PD-1、PD-L1 結合阻止PD1 與PD-L1 之間的識別，激活蛋白酪氨酸磷酸酶1（SHP-1）和蛋白酪氨酸磷酸酶2（SHP-2），促進下游通路中磷脂酰肌醇3 激酶/ 蛋白激酶B（PI3K/Akt）的磷酸化及哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的活化，促使CD4+Foxp3 陰性T 淋巴細胞向陽性調節性T 細胞轉化，恢復或增強T 淋巴細胞的功能，進而發揮抗腫瘤的作用[7]。

本研究的結果證實，PD-L1 在肺腺癌中存在陽性表達的情況。肺腺癌患者PD-L1 的陽性表達與其性別、年齡、吸煙與否及肺腺癌的組織學分型有關，男性、吸煙、年齡≥60 歲及組織學分型為貼壁型、腺泡型的肺腺癌患者PD-L1 的陽性表達率較高。