國內常用全血白細胞濾器應用性評價研究*

陳 顯，姜 健

(1.江蘇省血液中心，江蘇 南京 210042;2.無錫市中心血站，江蘇 無錫 214000)

血液制劑不濾白進行臨床輸注可引起非溶血性發熱、血小板輸注無效、免疫抑制，甚至病毒感染等一系列臨床輸血反應。目前，國內多家采供血機構已開展了血液濾白操作，尤其是江蘇省所有采供血機構已將血液濾白比例需要達到99%以上作為血站3年一度周期評審驗收標準，要求除卻制備手工濃縮血小板等特殊血液制劑外所有全血必須經濾白才可投入臨床使用，從而進一步保證用血安全。

血液濾白有多種方法，使用全血白細胞濾器進行濾白作為最便捷的方式已廣泛用于全國各大采供血機構。目前，市場上使用的全血白細胞濾器基本為第3代產品，主要是采用聚酯纖維無紡布作濾膜,并在纖維中添加了特殊的高分子聚合材料，通過攔截過濾和細胞黏附等方式，可以濾除全血中99.9%的白細胞，使過濾后殘余白細胞的數值達到國標甚至歐標的效果。本研究調研了市場上常見的幾種全血白細胞濾器，通過測試比較了不同濾器的濾白效果及濾器在血液制備流程中對部分血液制劑成分的影響，旨在為各家采供血機構選擇合適的濾器提供數據支持。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1標本來源 血液樣品采集在江蘇省血液中心流動獻血車上進行，體采科按照《GB18467-2011獻血者健康檢查要求》對獻血者健康征詢、初篩檢測后進行全方位評估，完全合格者方可獻血，采集后的400 mL全血需滿足2019版《血站技術操作規程》和《GB18469-2012全血及成分血質量要求》，采集時間需小于13 min，全血肉眼觀察無色澤異常、溶血、凝塊、氣泡及重度乳糜等情況。2020年3月共采集160份(血袋廠家：山東威高集團醫用高分子制品股份有限公司，保存液為ACD，批號：202002)。采集后全程冷鏈至成分制備科完成血液交接，將全血充分混勻，使用無菌接駁設備和全自動成分血分離機將該全血均勻分為2份，每份200 mL。對其中一份(對照組)全血不經白細胞濾器直接離心分離速凍后制備成新鮮冰凍血漿(FFP)，另一份(研究組)則使用目前國內常用的4種全血白細胞濾器(即A、B、C、D組，A、B組為國產硬殼濾器，C組為進口軟殼濾器，D組為進口硬殼濾器)進行濾白后截取少量全血，剩余部分離心分離后速凍制備成FFP。

1.1.2儀器 SEPAMTIC-SL(Ⅲ)全自動成分血分離機(德國LMB公司)，MBF-21速凍機(盧森堡多美達公司)、TSCDⅡ無菌接駁機(日本泰爾茂比司特公司)、殘余白細胞計數器Adam-rWBC(韓國NanoEnTeK公司)、ACL7000血凝儀(德國貝克曼公司)、西斯美康XP-100(日本西斯美康公司)等。

1.1.3試劑 白細胞計數試劑盒(NanoEntek公司，批號3RW16303)、游離血紅蛋白(Hb)測定試劑盒(北京瑞爾達生物科技有限公司，批號200409)、Ⅷ因子試劑盒(Hemosil公司，批號495571)等。

1.2方法

1.2.1殘余白細胞計數 4組截取的少量全血充分混勻后使用Adam-rWBC系統進行殘余白細胞計數，并同《GB18469-2012全血及成分血質量要求》中濾過后白細胞殘余量進行比對，計算合格率。按照《GB18469-2012全血及成分血質量要求》白細胞殘留量應≤2.5×106個/U，根據2019版《血站技術操作規程》，75%的抽檢結果應落在質量控制指標范圍內。

1.2.2濾器吸附量 對4種濾器濾前、濾后進行稱重，計算濾器的全血吸附量。

1.2.3儲存期末溶血率 將濾白后全血在6 h內分離制備成1 U去白細胞懸浮紅細胞和FFP，使用西斯美康XP-100測量去白細胞懸浮紅細胞中血紅蛋白(Hb)含量和血細胞比容(Hct)，應用血漿游離Hb測定試劑盒 (Trinder法) 檢測上清液游離Hb濃度，根據公式(1- Hct)×游離Hb濃度/Hb濃度×1 000×100%計算儲存期末溶血率。按照《GB18469-2012全血及成分血質量要求》儲存期末溶血率小于紅細胞總量的0.8%。

1.2.4FFP中Ⅷ因子含量 將待測FFP置于37 ℃水浴箱中迅速融化，使用ACL7000血凝儀檢測2組全血6 h內分離制備的FFP中Ⅷ因子含量。

2 結 果

2.14組全血濾白后殘余白細胞合格率和濾器吸附量比較 A組全血濾白后殘余白細胞合格率未達到要求，與B、C、D組比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 4組全血濾白后殘余白細胞合格率和濾器吸附量比較

2.24組全血濾白后去白細胞懸浮紅細胞中Hb含量、Hct、35 d儲存期末溶血率比較 4組全血濾白后均達到要求。C、D組全血濾白后儲存期末溶血率略優于A、B組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 4組全血濾白后去白細胞懸浮紅細胞中Hb含量、Hc儲存期末溶血率比較

2.34組全血濾白前后對FFP中Ⅷ因子含量的影響比較 A、B、D組全血濾白前后FFP中Ⅷ因子含量比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 4組全血濾白后對FFP中Ⅷ因子含量的影響比較

3 討 論

血液中含有的白細胞是人體免疫系統中重要的組成成分,不僅是導致臨床非溶血性發熱反應的元兇,也是經血傳播病原體在血液中的主要載體，還能引起免疫抑制、同種免疫等一系列輸血反應，危及受血者生命安全。另外，全血若不濾白進行儲存，白細胞易崩解后產生白細胞介素、腫瘤壞死因子等一系列生物活性分子，同樣也會引起臨床輸血過敏等反應。自20世紀60年代開始研發全血白細胞濾器，發展至今已是第3代濾器，通過攔截過濾和細胞黏附去除全血中白細胞，可去除99.9%以上的白細胞，并使殘留白細胞≤2.5×106個/U，極大地提升了白細胞清除率，同時，血小板在過濾過程中也能黏附在濾膜上,從而促進白細胞的進一步黏附,進一步提升過濾效率，從而進一步保證臨床用血的安全性。

本研究采用4種國內常用的全血白細胞濾器驗證了其實用性。白細胞濾器關鍵指標是濾過后白細胞殘留量符合《GB18469-2012全血及成分血質量要求》。從表1可見，A組全血濾白后殘余白細胞合格率僅為60.0%，B、C、D組全血濾白后殘余白細胞合格率均在97.5%。由于本中心對冷沉淀凝血因子的需求量較大，血液采集后需及時送往本中心成分制備科開展FFP制備。所以，多數血液自采集開始到成分科交接時血液的儲存時間還不滿3 h，血液自身溫度很難達到2～6 ℃，存在熱血過濾的情況較多，不同溫度的血液過濾對白細胞的清除是有區別的[1-5]，尤其是熱血過濾，對濾器自身的質量要求較高。本研究結果顯示，B、C、D組全血經熱血過濾后白細胞可達到國家標準，而A組40%沒有達到國標，若將A組血液溫度降至2～6 ℃再進行過濾，濾白合格率可提升至80.0%。但由于全血降溫所需時間較長，會影響本中心后續FFP的制備效率，建議需要制備較大量FFP的采供血機構可以選擇B、C、D組可以承受熱血過濾的白細胞濾器，保證濾白質量。另外，本研究結果顯示，4組濾器吸附量差異不大，提示4組濾器對全血的吸附程度相當。

本研究隨后針對濾白后的去白細胞懸浮紅細胞進行了Hb、Hct及儲存期末溶血率(35 d)檢測，結果顯示，4組全血濾白后去白細胞懸浮紅細胞中Hb、Hct均達到國標要求。影響白細胞濾器實用性的另一個質量問題是溶血[6-8]。從本研究結果來看，4組35 d儲存期末溶血率在全血濾白后均達到<0.8%的標準，但C、D組全血濾白后期末溶血率略優于A、B組，差異均有統計學意義(P<0.05)。

FFP和冷沉淀凝血因子的質量一直是關注的重點，影響Ⅷ因子的因素很多，濾器的質量也是其中之一。濾器作為外源性生物材料，主要通過物理攔截和細胞黏附等方式對白細胞進行過濾清除[9]。據文獻報道，濾白同時會引起血液中部分凝血因子活性的變化，從而對后續血液制劑質量造成影響[10-13]。所以，為探討濾器對FFP中Ⅷ因子活性有無影響，本研究對4組全血濾白前后FFP中Ⅷ因子含量進行了統計分析，結果顯示，A、B、D組全血濾白后Ⅷ因子含量明顯降低，差異均有統計學意義(P<0.05)，而C組則無明顯差異。證明了不同材質濾器確實可以影響凝血因子的變化，也同時為血站選擇合適濾器從而提高成分制備產品尤其是FFP、冷沉淀凝血因子的質量提供了數據支持。