老年冠心病患者T淋巴細(xì)胞亞群分析及其臨床意義*

全小慶，黃嘉寶，周洪蓮，徐 婷，張存泰

(1.廣東省深圳市龍華區(qū)中心醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，廣東 深圳 518110；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院 附屬同濟(jì)醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，湖北 武漢 430030；3.中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院全科醫(yī)學(xué)科，廣東 廣州 510630)

冠心病是嚴(yán)重威脅人類健康和生命安全的一種心血管疾病，其發(fā)病率與病死率隨年齡增長(zhǎng)而顯著增加。有研究表明，年齡每增加10歲，冠心病發(fā)病率隨之增加2倍[1]。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定性是冠心病常見(jiàn)的病理基礎(chǔ)，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的過(guò)程不僅有脂質(zhì)沉積的參與，還有全身慢性炎癥反應(yīng)的作用，持續(xù)的炎性反應(yīng)使冠狀動(dòng)脈斑塊不穩(wěn)定，容易被侵蝕或破裂，導(dǎo)致血栓形成和心肌梗死；此外，循環(huán)中的炎癥細(xì)胞(如中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等)均參與了冠心病病程中的炎性反應(yīng)及免疫過(guò)程[1-2]。有研究表明，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)T淋巴細(xì)胞占所有有核細(xì)胞總數(shù)的10%～20%[3]。不同表型的T淋巴細(xì)胞在冠心病發(fā)生、發(fā)展中具有不同的作用，如輔助性T淋巴細(xì)胞17(Th17)具有促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的作用[4]；而CD4+CD25str+CD127dim/-調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞(Treg)則因其在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中的保護(hù)作用而備受關(guān)注[5]。臨床研究表明，Treg可能在動(dòng)脈粥樣硬化的早期即參與了免疫調(diào)節(jié)[6]。故本研究探討了老年冠心病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化，旨在為研究T淋巴細(xì)胞在冠心病中的作用提供更多的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1一般資料 選取華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院2014年12月至2017年2月的老年住院患者68例，其中男43例(63.24%)，中位年齡81.42歲。按不同疾病類型分為對(duì)照組(無(wú)冠心病患者24例)、穩(wěn)定型心絞痛(SAP)組(SAP患者25例)和急性冠狀動(dòng)脈綜合征(ACS)組(ACS患者19例)。本研究已獲得華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批準(zhǔn)號(hào)TJ-C20141112)，并按照《赫爾辛基宣言》條例執(zhí)行。研究過(guò)程嚴(yán)格按照納入及排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行患者篩選并對(duì)所有研究相關(guān)數(shù)據(jù)真實(shí)記錄，確保其準(zhǔn)確、原始、完整、清晰且有效。

1.1.2納入標(biāo)準(zhǔn) (1)年齡大于或等于60歲的老年患者。(2)對(duì)照組為無(wú)冠心病史患者。(3)SAP組患者根據(jù)SAP診斷指南[7]符合SAP診斷標(biāo)準(zhǔn)：①存在胸痛癥狀，多在勞累或情緒激動(dòng)時(shí)發(fā)作，部位常在胸骨后或左前胸(范圍常不局限)，呈陣發(fā)性，持續(xù)時(shí)間短(多數(shù)不超過(guò)10 min)，口服硝酸甘油后可迅速緩解；②體格檢查常無(wú)明顯異常；③發(fā)作時(shí)心電圖可出現(xiàn)ST-T缺血性改變；④生化檢驗(yàn)顯示血清心肌標(biāo)志物(優(yōu)選肌鈣蛋白)陰性。(4)ACS組患者根據(jù)ACS診斷指南[8]符合ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)：①存在缺血性胸痛癥狀，并持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，常超過(guò)30 min，且含服硝酸甘油后癥狀無(wú)明顯緩解；②心電圖存在動(dòng)態(tài)演變或ST-T持續(xù)抬高或僅有ST段壓低/T波倒置；③生化檢驗(yàn)顯示血清心肌標(biāo)志物(優(yōu)選肌鈣蛋白)升高。

1.1.3排除標(biāo)準(zhǔn) (1)年齡小于60歲；(2)患有終末期肝病、腎功能衰竭等；(3)患有重癥感染、消化道出血、嚴(yán)重創(chuàng)傷、腦血管疾病急性期、近半個(gè)月內(nèi)曾行重大手術(shù)； (4)患有惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病等；(5)近期曾服用影響淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的藥物(如糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑等)；(6)病歷資料不完整。

1.2方法

1.2.1資料收集 從住院病歷資料中收集三組患者基線數(shù)據(jù)，即性別、年齡、吸煙史及飲酒史(既往或當(dāng)前煙草/酒精使用情況)。此外，記錄實(shí)驗(yàn)室分析結(jié)果，包括全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血小板計(jì)數(shù)、血紅蛋白)、腎功能指標(biāo)(血肌酐)、肝功能指標(biāo)(谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶)、清蛋白、血脂(總膽固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)等。

1.2.2外周血標(biāo)本采集 采集三組患者入院時(shí)或住院第2天清晨外周靜脈血用于全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、各生化指標(biāo)、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)(由同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室測(cè)定)。

1.2.3外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè) 使用以下單克隆抗體CD3 APC-H7-A、CD4 Pacific Blue-A、CD8 APC-A、CD 19 BV711-A、CD25 PE-Cy7-A、CD 28 FITC-A、CD45 Pacific Orange-A、CD56 ECD-A、CD127 PE-A等。使用未經(jīng)稀釋的抗體，采用FACSCanto流式細(xì)胞儀(BD Biosciences,San Jose,CA)測(cè)定淋巴細(xì)胞亞群，并使用Diva軟件(BD Biosciences)計(jì)算淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)值和百分比。

2 結(jié) 果

2.1三組患者一般資料比較 三組患者年齡、吸煙及飲酒史、肝功能、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)、低密度脂蛋白、總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；SAP組和ACS組患者肌酐水平均較對(duì)照組高，ACS組患者中性粒細(xì)胞、低密度脂蛋白更高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 三組患者一般資料比較

2.2三組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 SAP組患者各淋巴細(xì)胞亞群百分比與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與對(duì)照組比較，ACS組患者Treg亞群百分比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與SAP組比較，ACS組患者CD3+CD45+、CD3+CD4+、Treg 3個(gè)T淋巴細(xì)胞亞群水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 三組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

續(xù)表2 三組患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

2.3Treg比例與各項(xiàng)臨床指標(biāo)的相關(guān)性 年齡、甘油三酯與Treg比例均呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；其他臨床指標(biāo)與Treg比例無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 Treg比例與各項(xiàng)臨床指標(biāo)的相關(guān)性

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化引起的冠狀動(dòng)脈疾病是導(dǎo)致老年人死亡的常見(jiàn)疾病之一。目前，我國(guó)心血管疾病患者約有3億人，每年因心臟病致死的患者中有10%～20%是由冠心病引起的[9-10]。冠心病發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制較為復(fù)雜，其中已得到證實(shí)的主要有三方面，即脂質(zhì)浸潤(rùn)、血栓形成及內(nèi)皮細(xì)胞損傷。有研究表明，冠心病患者冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊中存在免疫細(xì)胞浸潤(rùn)及免疫復(fù)合物沉積[11]。冠心病患者病程中伴隨的局部或全身炎癥反應(yīng)說(shuō)明了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的病變過(guò)程與免疫應(yīng)答(體液免疫與細(xì)胞免疫)密切相關(guān)[9-12]。因此，本研究分析并比較了老年冠心病患者T淋巴細(xì)胞亞群比例，以期為冠心病的機(jī)制研究提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。

T淋巴細(xì)胞是來(lái)源于骨髓的多能干細(xì)胞，經(jīng)誘導(dǎo)分化成熟后可發(fā)揮細(xì)胞免疫及免疫調(diào)節(jié)等功能。T淋巴細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)不斷更新、循環(huán)，在同一時(shí)間可存在不同發(fā)育階段或功能的亞群。Treg主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，維持自身免疫耐受和避免免疫損傷，Treg是目前研究關(guān)注的熱點(diǎn)。Treg占健康者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞的5%～10%，由SAKAGUEHI在1995年首次報(bào)道，是一類可高表達(dá)白細(xì)胞介素-2受體的α鏈(CD25)分子的具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)作用的CD4+T淋巴細(xì)胞[11,13]。目前，關(guān)于ACS患者外周血Treg變化的文獻(xiàn)報(bào)道較少見(jiàn)。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，SAP組和ACS組患者Treg比例均下降，并且ACS組患者外周血Treg明顯低于SAP組。推測(cè)其原因可能是ACS患者病程中存在細(xì)胞免疫激活，各淋巴細(xì)胞表面特性改變，Treg數(shù)量下降，Th1顯著激活，免疫平衡破壞，進(jìn)而導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定性增加和冠狀動(dòng)脈自身免疫損傷加重。程翔等[14]發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定型心絞痛患者外周血Treg比例下降，并且明顯低于對(duì)照組。有臨床試驗(yàn)對(duì)不同類型冠心病患者冠狀動(dòng)脈斑塊進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)，結(jié)果顯示，隨著斑塊不穩(wěn)定性增加，Treg比例隨之下降[15]。

本研究結(jié)果顯示，老年冠心病患者Treg比例與年齡呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05)，表明隨年齡增大Treg比例隨之下降。江敏等[16]報(bào)道，50～60歲健康者Treg明顯低于30～40歲者。越來(lái)越多證據(jù)表明，Treg活性、數(shù)量、功能均可能與脂蛋白分?jǐn)?shù)有關(guān)。動(dòng)脈粥樣硬化患者血清氧化低密度脂蛋白水平與Treg比例呈負(fù)相關(guān)，氧化低密度脂蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡信號(hào)通路可能導(dǎo)致了Treg凋亡增加，引起Th17/Treg失衡，加劇了動(dòng)脈硬化斑塊的形成和失穩(wěn)[17]。本研究結(jié)果顯示，冠心病患者Treg比例與甘油三酯呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，提示Treg或在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展中具有保護(hù)作用。目前，這種表現(xiàn)的原因尚未闡明，加之本研究樣本量有限，故尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。

綜上所述，老年ACS患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群比例發(fā)生異常改變，可能與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變程度密切相關(guān)。通過(guò)改善Treg亞群的細(xì)胞免疫功能可能有助于改善冠心病患者的療效或成為冠心病治療的新靶點(diǎn)。