Livin、STAT3 基因在海南地區(qū)甲狀腺癌組織中的表達(dá)情況

潘在興 潘健華 夏歡 葉芳麗 楊瑤

甲狀腺癌是臨床最為常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。近年來(lái)影像學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步，甲狀腺癌的檢出率也越來(lái)越高。隨著對(duì)甲狀腺癌的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞增殖和凋亡失衡是甲狀腺癌發(fā)生和發(fā)展的重要基礎(chǔ)［1］。Livin是凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族中的重要一員，在人類多種腫瘤中表現(xiàn)為高表達(dá)，并可作為腫瘤患者的獨(dú)立預(yù)后因素［2］。同時(shí)Livin過(guò)度表達(dá)與腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)也有明顯關(guān)系，使得Livin 成為目前腫瘤研究的熱點(diǎn)之一［3］。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)轉(zhuǎn)錄活化因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）是一種DNA 結(jié)合蛋白，廣泛存在于機(jī)體組織和細(xì)胞中，對(duì)細(xì)胞功能具有一定調(diào)節(jié)作用［4］。有研究顯示［5］，STAT3在炎癥反應(yīng)中起到積極作用，且能被Hauns 激酶磷酸化激活，進(jìn)入細(xì)胞核后結(jié)合基因啟動(dòng)子上調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄。且還有研究證實(shí)［6］，STAT3可誘導(dǎo)MMP-1 水平升高，使腫瘤更具有侵襲性。因此STAT3基因表達(dá)與腫瘤的關(guān)系也成為當(dāng)下研究的熱點(diǎn)。本文對(duì)本院甲狀腺癌患者進(jìn)行研究，分析癌組織和癌旁組織中Livin和STAT3的基因表達(dá)水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2020 年10 月至2021 年12 月期間海口市人民醫(yī)院收治的48 例甲狀腺癌患者作為研究對(duì)象。本研究經(jīng)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理檢查確診為甲狀腺癌的患者；②進(jìn)行手術(shù)治療的患者；③就診前未進(jìn)行過(guò)放化療等相關(guān)治療的患者；④簽署知情同意書(shū)的患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①?gòu)?fù)發(fā)性甲狀腺癌患者；②有手術(shù)禁忌癥的患者；③妊娠或哺乳期女性；④有精神障礙無(wú)法配合研究者；⑤同時(shí)參與其他研究者。其中男性患者26 例，女性患者22 例，平均年齡（43.1±4.4）歲。甲狀腺癌病理分型：甲狀腺乳頭狀癌患者31 例，甲狀腺濾泡樣癌17 例。TNM 分期：其中Ⅰ、Ⅱ期患者33 例，Ⅲ、Ⅳ期患者15 例。所有患者均進(jìn)行手術(shù)治療，術(shù)中取甲狀腺癌組織和癌旁組織（病灶邊緣3 cm）做標(biāo)本進(jìn)行研究。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器與試劑

儀器：德國(guó)Leica 2245 石蠟切片機(jī)；福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司生產(chǎn)的免疫組織化學(xué)筆；日本Olympus BX40 光學(xué)顯微鏡；上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)的電熱恒溫培養(yǎng)箱；上海躍進(jìn)醫(yī)療器械一廠生產(chǎn)的電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。

試劑：武漢博士德公司提供的兔抗人Livin 多克隆抗體（批號(hào)：2019684）以及兔抗人STAT3 多克隆抗體（批號(hào)：2019013），稀釋濃度1∶50；北京中杉金橋公司提供的DAB 顯色劑和免疫組化染色有關(guān)試劑。

1.2.2Livin、STAT3基因表達(dá)的檢測(cè)方法

采用免疫組化法檢測(cè)Livin和STAT3表達(dá)水平。所有癌組織和癌旁組織通過(guò)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，之后取4 μm 厚連續(xù)切片。對(duì)組織切片進(jìn)行脫蠟水化，高溫高壓法進(jìn)行抗原修復(fù)。再滴入一抗置于4℃孵育箱內(nèi)過(guò)夜。隨后嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)滴加試劑，行DAB 顯色，再行蘇木素復(fù)染、脫水、封片，最后在高倍顯微鏡下進(jìn)行觀察。將已知的陽(yáng)性標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS 代替一抗用于陰性對(duì)照。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察癌組織和癌旁組織中Livin、STAT3基因的表達(dá)情況，分析Livin和STAT3基因表達(dá)情況與甲狀腺癌臨床病理學(xué)的關(guān)系。評(píng)價(jià)方法［7］：所有組織切片均由病理科兩名醫(yī)師進(jìn)行讀片，Livin和STAT3染色陽(yáng)性信號(hào)呈棕黃色或棕色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜。每張切片隨機(jī)取10 個(gè)高倍鏡視野，根據(jù)染色程度及陽(yáng)性細(xì)胞比例進(jìn)行結(jié)果判定。0 分：不著色；1 分：染色強(qiáng)度較差；2 分：染色強(qiáng)度中等；3 分：染色強(qiáng)度較深。0 分：陽(yáng)性細(xì)胞占比＜5%；1 分：陽(yáng)性細(xì)胞占比為5%～25%；2 分：陽(yáng)性細(xì)胞占比26%～50%；3 分：陽(yáng)性細(xì)胞占比＞50%。兩項(xiàng)積分乘積為最終所得結(jié)果。陰性：0～1 分；弱陽(yáng)性：2～3 分；中度陽(yáng)性：4～6 分；強(qiáng)陽(yáng)性：＞6 分。陽(yáng)性率=（弱陽(yáng)性+中度陽(yáng)性+強(qiáng)陽(yáng)性）/總數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 癌組織和癌旁組織中Livin 和STAT3 基因的表達(dá)情況比較

甲狀腺癌組織中Livin和STAT3基因的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織中Livin和STAT3基因，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

圖1 甲狀腺癌組織和癌旁組織STAT3、Livin 免疫組化染色（×200）Figure 1 Immunohistochemical staining of STAT3 and Livin in thyroid cancer tissue and adjacent tissue（×200）

表1 癌組織和癌旁組織中Livin 和STAT3 基因的表達(dá)情況比較［n（%）］Table 1 Comparison of Livin and STAT3 gene expression in cancer tissues and adjacent tissues［n（%）］

2.2 Livin、STAT3 基因表達(dá)與甲狀腺癌組織臨床病理因素的關(guān)系

Livin、STAT3基因在甲狀腺癌中的表達(dá)與患者臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移以及包膜浸潤(rùn)有關(guān)（P＜0.05），與性別、年齡、腫瘤直徑、病理類型等無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 Livin、STAT3 基因表達(dá)與甲狀腺癌組織臨床病理因素的關(guān)系［n（%）］Table 2 Relationship between Livin and STAT3 gene expression and clinicopathological factors in thyroid cancer tissues［n（%）］

2.3 甲狀腺癌組織中Livin 與STAT3 基因表達(dá)的關(guān)系

Pearson相關(guān)性分析顯示兩者在甲狀腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.412，P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 甲狀腺癌組織中Livin 與STAT3 基因表達(dá)的關(guān)系Table 3 elationship between Livin and STAT3 gene expression in thyroid cancer tissues

3 討論

細(xì)胞增殖和凋亡失衡是腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要因素，而細(xì)胞的凋亡又是調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞水平平衡的重要機(jī)制，因此細(xì)胞的凋亡與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系［8］。影響細(xì)胞的凋亡基因分為促凋亡基因和抗凋亡基因［9］。Livin是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的IAP 家族中的抗凋亡基因之一，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為L(zhǎng)ivin抑制凋亡的主要機(jī)制是通過(guò)IAPs 成員特有的BIR 區(qū)結(jié)合Caspase 家族，抑制Capase 家族成員活性，從而達(dá)到阻斷凋亡受體和線粒體的凋亡途徑，抑制細(xì)胞的凋亡［10-12］。還有研究顯示［13］，胎兒發(fā)育過(guò)程中Livin在多種組織中高表達(dá)，可能與生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)。正常成人組織中Livin低表達(dá)或不表達(dá)，而在惡性腫瘤組織中Livin的表達(dá)水平明顯升高。因此目前臨床認(rèn)為L(zhǎng)ivin與惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有密切關(guān)系［14］。STAT3也是近年來(lái)研究的重點(diǎn)基因之一，目前認(rèn)為STAT3參與了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程［15-16］。有學(xué)者提出［17-18］，STAT3通過(guò)影響下游生長(zhǎng)、凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。因此認(rèn)為L(zhǎng)ivin和STAT3基因的表達(dá)均與惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

本文分析了甲狀腺癌組織與癌旁組織中Livin和STAT3基因的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，甲狀腺癌組織中Livin和STAT3基因的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于癌旁組織中Livin和STAT3基因的陽(yáng)性表達(dá)率，結(jié)果表明Livin和STAT3基因高表達(dá)與甲狀腺癌的發(fā)生具有一定關(guān)系。本文還對(duì)比了Livin、STAT3基因表達(dá)與甲狀腺癌組織臨床病理因素的關(guān)系，結(jié)果顯示，Livin、STAT3基因在甲狀腺癌中的表達(dá)水平與患者臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移以及包膜浸潤(rùn)有關(guān)，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜浸潤(rùn)以及臨床分期Ⅲ、Ⅳ期的患者，Livin和STAT3基因表達(dá)陽(yáng)性率更高，結(jié)果提示，Livin和STAT3基因表達(dá)升高可能是導(dǎo)致甲狀腺癌細(xì)胞侵襲性強(qiáng)，發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要原因。在觀察甲狀腺癌組織中Livin與STAT3基因表達(dá)的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，Livin與STAT3在甲狀腺癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，即Livin表達(dá)水平升高，STAT3表達(dá)水平也升高。在Wang H［19］等人的研究中發(fā)現(xiàn)，乳腺癌和胃癌中的STAT3能調(diào)控Livin基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。STAT3能進(jìn)一步調(diào)控Livin基因轉(zhuǎn)錄，使Livin基因高表達(dá)，抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡；同時(shí)還能促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤組織新生血管生成，便于腫瘤的增殖和轉(zhuǎn)移。因此認(rèn)為STAT3表達(dá)升高會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)Livin基因表達(dá)的升高，促進(jìn)甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展［20］。

綜上所述，甲狀腺癌組織中Livin和STAT3基因表達(dá)明顯升高，兩者的表達(dá)呈正相關(guān)，Livin和STAT3基因表達(dá)異常升高參與了甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。