耐藥蛋白NDM-1的雙抗體夾心ELISA檢測方法研究

賈良曦，楊柳，丁亞芳，邢維維，馬立才

(北京維德維康生物技術有限公司，北京 100095)

隨著微生物與人類的不斷斗爭，在抗菌藥物的使用過程中無可避免的會有“超級細菌”的出現(xiàn)[1]。所謂的“超級細菌”并不僅僅單指一種細菌的名稱，而是一類幾乎對所有抗生素都有強勁耐藥性的細菌統(tǒng)稱。新德里金屬β-內酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase, NDM) 是一種新型的碳青霉烯酶，于2009年首次從印度新德里一名患者體內的肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌中分離得到[2]。由于該類細菌對包括碳青霉烯類藥物在內的所有β-內酰胺類抗菌藥物均耐藥，且攜帶耐氨基糖苷類和喹諾酮類抗生素基因，導致其感染治療十分困難，因此也被稱為“超級細菌”，以其發(fā)現(xiàn)地新德里命名[3]。

Kumarasamy等[4]報道了NDM-1腸桿菌在印度、巴基斯坦以及英國等國家開始流行，引起國際性的關注。隨后，美國、德國、日本、中國香港等地不斷檢出攜帶NDM-1的菌株，多為大腸埃希菌、肺炎克雷伯氏菌和鮑曼不動桿菌等臨床常見的致病菌[5]。2012年中國農業(yè)大學研究人員在北京周邊養(yǎng)殖場和屠宰場樣品中檢測到一株攜帶NDM-1的魯氏不動桿菌，這也是中國首次在動物養(yǎng)殖場中發(fā)現(xiàn)。隨后攜帶NDM-4、NDM-5、NDM-9等的菌株陸續(xù)在中國被檢出[6-7]。由此表明NDM基因在動物中傳播具有潛在危險，動物性食品安全向人們敲響警鐘[8]。

目前檢測NDM-1的方法主要有紙片擴散法[9]、Etest檢測法[10]、儀器方法[11]、PCR檢測法[12-13]、TaqMan熒光定量PCR[14-16]、環(huán)介導等溫擴增技術(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)[17]、基因芯片技術[18]等。其中，紙片擴散法、Etest檢測法、微量稀釋法靈敏度低，缺乏特異性，僅適合初篩試驗，而PCR可通過特異性引物對NDM-1陽性細菌進行確證，但對儀器設備的要求較高，且操作復雜，易發(fā)生污染。……