超高效液相色譜-串聯質譜法測定 豬肉和雞蛋中氟苯尼考獸藥殘留量

◎ 譚敏捷

（清遠市食品檢驗中心，廣東 清遠 511500）

氟苯尼考是動物體內專用的抗生素類藥物，一種半合成的廣譜抗菌藥，氟苯尼考屬于氯霉素類藥物的其中一種，其毒副作用明顯低于氯霉素，因此在畜禽及水產品養殖中使用日益頻繁。隨著氟苯尼考的廣泛使用，動物源性食品中氟苯尼考殘留問題越來越受關注。目前氯霉素類藥物殘留量的檢測方法主要有酶聯免疫吸附法、氣相色譜-質譜法、液相色譜法、液相色譜-質譜法。由于液相色譜-串聯質譜法定性準確、特異性高、靈敏度強，本研究建立了超高效液相色譜-串聯質譜法測定豬肉和雞蛋中氟苯尼考殘留量的方法[1-3]。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

甲醇、乙腈、正己烷（HPLC級，德國Merck）， 甲酸（Aladdin）、氯化鈉（廣試）、氟苯尼考標準品純度為99.9%（德國Dr.Ehrenstorfer公司）、大連中食國實檢測技術有限公司蛋粉中氟苯尼考質控樣（CFAPA-QC1060B-2）。樣品均為抽檢 樣品。

1.2 儀器與設備

液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀HPLC-MS/MS（Thermo Scientific TSQ Quantis）、組織搗碎勻漿機（崢嶸）、振蕩機（Heidolph）、臺式高速離心機（赫西）、超聲機（EMERSON）、全自動平行濃縮儀（Reeko AUTO EVA）、超純水機（Milli-Q Integral 5）和電子分析天平（艾安得）。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品提取與凈化

稱取5.00 g已勻質的試樣（精確至0.01 g）至50 mL離心管中，加入11 mL乙腈和2 g氯化鈉，旋渦30 s，2000 r·min-1振蕩提取10 min，然后轉移至超聲機超聲10 min，7500 r·min-1離心5 min，上清液轉移至另一50 mL離心管中，殘渣再加入11 mL乙腈，重復上述操作再提取一次，合并兩次上清液，用乙腈定容至25 mL，加入15 mL乙腈飽和的正己烷，振蕩2 min，7500 r·min-1離心5 min，棄去上層液，取5 mL下層乙腈提取液于15 mL氮吹管中，45 ℃氮吹至干。殘渣用1.0 mL乙腈水（1+1）復溶，旋渦混勻，過0.22 μm尼龍濾膜，待測定[4-5]。

1.3.2 標準溶液配制

（1）標準儲備液。精密稱取氟苯尼考10.0 mg，至于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，配置成1 mg·mL-1的標準儲備液。

（2）標準工作曲線繪制。分別吸取適量1 mg·mL-1氟苯尼考標準儲備液，用經過1.3.1樣品提取與凈化制備的空白基質溶液稀釋，配成0.5 μg·L-1、1 μg·L-1、 2 μg·L-1、2.5 μg·L-1、3 μg·L-1、4 μg·L-1和5 μg·L-1標準工作液，進行液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀測定，以基質標液濃度為橫坐標（X），定量離子色譜峰面積為縱坐標（Y）繪制標準工作曲線，計算出回歸線性方程和相關系數。

1.3.3 儀器分析

（1）液相色譜條件。色譜柱：Accucore C18(2.1 mm×150 mm，2.6 μm)；柱溫：40 ℃；流動相：A相：0.1%甲酸水，B相：乙腈；流速：0.3 mL·mL-1；進樣量：20 μL。采用梯度洗脫，洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序表

（2）質譜條件。離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應監測MRM；電噴霧電壓：-2500 V；離子傳輸溫度：325 ℃；離子源溫度350 ℃[6]。氟苯尼考定性離子對355.912/184.917、355.912/335.988；定量離子對355.912/335.988；采集時間42.699 ms；去簇電壓定性離子和定量離子分別為18.61 V和10.23 V；碰撞能125.99 V。

1.3.4 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）

分別在豬肉和雞蛋空白樣品中加入適量目標物，按照1.3.1前處理步驟操作，上機，測得目標物信噪比S/N≥3時的濃度為檢出限，信噪比S/N≥10時的標液濃度為定量限。

1.3.5 精密度的測定

分別稱取5.00 g（精確至0.01 g）均質的空白豬肉樣品和空白雞蛋樣品，準確加入25 μg·L-1標準溶液 0.5 mL，使目標物在不同基質中的濃度為2.5 μg·kg-1，按照1.3.1前處理步驟操作，上機，同一天內重復測定 7次，求出平均值，計算相對標準偏差。

1.3.6 回收率的測定

稱取5.00 g（精確至0.01 g）均質的空白豬肉樣品和空白雞蛋樣品，分別添加3個不同濃度的目標物，每個濃度3個平行，經過1.3.1前處理步驟操作，上機，求出回收率[7-8]。

2 結果與分析

2.1 基質標準曲線

不同基質的氟苯尼考在0.5～5 μg·L-1范圍內呈現良好的線性關系，r2≥0.99，結果見表2。

表2 標準曲線和相關系數表

2.2 檢出限（LOD）和定量限（LOQ）

以信噪比S/N≥3時所對應的濃度為檢出限，得到本方法的檢出限濃度為0.05 μg·kg-1，見圖1。

圖1 檢出限色譜圖

以信噪比S/N≥10時所對應的濃度為定量限，得到本方法的定量限濃度為0.1 μg·kg-1，見圖2。

圖2 定量限色譜圖

2.3 加標回收率

在空白豬肉樣品和空白雞蛋樣品，分別添加 0.6 μg·kg-1、1 μg·kg-1、3 μg·kg-13個水平5平行加標回收率的測定，結果見表3。

表3 豬肉和雞蛋中氟苯尼考的加標回收率表

2.4 精密度

分別于陰性豬肉和雞蛋中添加氟苯尼考濃度為 7.0 μg·kg-1，雞蛋同一個樣品一天內重復測定7次，相對標準偏差為2.1%，一周內重復測定7次，相對標準偏差為4.3%；豬肉同一個樣品一天內重復測定7次，相對標準偏差為1.1%，一周內重復測定7次，相對標準偏差為2.0%，結果見表4。

表4 豬肉和雞蛋中氟苯尼考精密度的測定表

2.5 方法驗證

為了驗證本方法的準確性和科學性，采用大連中食國實檢測有限公司蛋粉中氟苯尼考質控樣對該方法進行驗證測定，結果均符合｜Z｜評分≤2，見表5。

表5 雞蛋凍干粉質控樣品測定結果表

3 結論

本方法結果表明，豬肉和雞蛋基質曲線線性良好，3個加標水平回收率良好以及精密度較好，均符合《獸藥殘留實驗室質量控制規范》（NY/T 1896—2010）。 本方法采用超高效液相色譜-串聯三重四極桿質譜法檢測，數據重現性良好，靈敏度高，定量準確，不需要經過固相萃取柱凈化，前處理操作簡單，提取溶劑消耗少，分析測定時間短，檢出限和定量限均滿足食品安全國家標準氟苯尼考殘留量的測定 要求。