多組織蠟塊在常規HE染色中的質控作用

孫 炎，茍繼周，李曉星，彭 程，張鴻英，周光德

HE染色是病理組織染色的基礎，覆蓋了大部分的常規病理技術工作，病理醫師可進行免疫組化、特殊染色、原位雜交等檢查。HE染色切片質量直接影響病理醫師的判斷，因此技術人員常在HE染色前進行預染色保障質量。許多醫院病理科會使用預留的組織白片或者每天切片時先切一些組織片用來預染色，較為消耗人力、浪費載玻片及染色液等資源；同時由于切片中的組織種類少，而不能全面反應染色情況。本科室為提高染色效率和質量，使用多組織蠟塊的切片染色，觀察其在HE染色中的質量控制作用。

1 材料與方法

1.1 材料選取深圳市第三人民醫院病理科取材后剩余的胎盤、乳腺、肝臟、子宮肌、結腸、扁桃體、甲狀腺、闌尾、肺組織標本。

1.2 多組織蠟塊制備把收集的組織分別切成大小0.7 cm×3 cm長條狀，取1塊胎膜組織切成大小5 cm×8 cm片狀備用，將上述8種組織排列整齊在片狀胎膜內，卷成羊膜卷后與常規標本一起行脫水、透明、浸蠟處理。包埋時用刀片把浸蠟后的羊膜卷兩端稍作修剪，切成大小0.3 cm×0.5 cm組織塊后包埋，切片厚3.5 μm[1]。

1.3 儀器與試劑染色機選用徠卡ST5020，封片劑選用徠卡CV5030，數字切片掃描儀選用麥克奧迪VM1000，Harris蘇木精、水溶性伊紅、碳酸鋰、鹽酸乙醇分化液，均購于珠海貝索公司。

1.4 方法設置染色機HE染色程序：二甲苯3次，每次5 min；無水乙醇3次，每次1 min；75%乙醇1 min，自來水洗1 min；蘇木精13 min，自來水洗1 min；0.3%鹽酸乙醇分化1 s，自來水洗1 min；碳酸鋰飽和液1 min，自來水洗2 min；伊紅5 min，自來水洗1 min；95%乙醇20 s，無水乙醇3次，每次1 min；二甲苯3次，每次3 min；中性樹膠封固[2]。本實驗分別在試劑不同條件情況下對切片進行HE染色，并比較染色結果。

2 結果

選取制作好的多組織蠟塊切片，按照上述設定的染色程序在不同條件下進行HE染色(圖1)。當使用新鮮染色試劑染色時：結腸腸黏膜藍紫色，結構清楚(圖2)，甲狀腺組織紅藍對比明顯(圖3)；肝細胞胞核、淋巴細胞胞核藍亮，染色質清晰；子宮肌纖維層次感較強，伊紅著色能力及乙醇分化效果良好，分化及藍化徹底。當鹽酸乙醇分化液調低為0.1%濃度時，淋巴細胞胞核深染不清晰；當鹽酸乙醇分化液調高為1.5%濃度時，細胞核藍色過淡。蘇木精染色超過4 000 張切片，腸黏膜上細胞核灰暗(圖4)；伊紅染色超過 4 000 張切片，肝臟細胞質紅色極淺，背景暗藍。第一缸脫水乙醇改為無水乙醇時，組織整體紅染，紅藍對比不清晰；第一缸脫水乙醇濃度調低為75%濃度時，對伊紅脫色較重，扁桃體隱窩上皮幾乎伊紅不著色。使用兩周未更換的二甲苯脫蠟部分甲狀腺膠質發白不著色(圖5)。

①②③④⑤

3 討論

影響HE染色的因素繁多，除了烤片的溫度和時間、石蠟融點和浸蠟溫度、實驗室的溫、濕度等因素外[3-5]，還應該考慮到染色過程中自來水的酸堿度等。偏酸和偏堿性的自來水沖洗切片，會導致組織pH環境發生變化，偏酸使得細胞核發暗紫色、染色淡，偏堿會讓纖維、胞質等嗜酸性組織對伊紅著色較為困難，易被低濃度乙醇脫色而著色較弱。我科室自來水pH值未到7.0，蘇木精染色效果不佳，技術組針對偏酸環境問題，設置多組織對照，改良染色程序，減短水洗時間，減少蘇木精配方里冰醋酸的量，降低鹽酸乙醇分化液濃度，細胞核染色效果明顯提升。此外，在染色機自來水槽里使用加熱鋁棒加溫，使之成微弱堿性，或依據自己實驗室環境選擇合適種類的蘇木精，均可解決染色問題[6]。所以，不能僅僅照搬其他實驗室的操作流程、試劑配方直接應用到實驗中，應根據自己實驗室環境設置質控體系來解決染色問題。還可以使用多組織蠟塊判斷染色試劑的質量及染色程序設置是否合適，如腸黏膜上皮、子宮肌纖維等組織可以觀察伊紅著色強度、乙醇分化程度、自來水pH值是否偏堿；扁桃體、肝細胞核等嗜堿性細胞能觀察胞核蘇木精染色情況，可以推算蘇木精染液的老化、鹽酸乙醇分化液濃度、藍化液和自來水的pH值是否達標；闌尾、甲狀腺組織可反應伊紅蘇木精染色紅藍對比度情況。

多組織蠟塊在特殊染色的質控中也可有較大的發揮空間。如多組織中的各種纖維成分含量豐富，對Masson染色、網狀纖維染色、彈力纖維染色等具有較好的質控效果。每種真菌對不同染料的著色親和度不同，如曲霉菌在六胺銀染色里著色時間多于其他真菌1倍時間，我們可以針對性的收集隱球菌、曲霉菌、馬爾尼菲青霉菌等陽性組織標本制作蠟塊，用作各種真菌染色如PAS染色、六胺銀染色、愛先藍染色等特殊染色方法的陽性對照[7]。部分肝病患者組織中可見多種色素及金屬沉積，可以用作膽色素、脂褐素、銅染色、鐵染色等染色的陽性對照[8]。

多組織蠟塊通常作為免疫組化陽性對照使用，但在日常工作中，我們發現多組織蠟塊切片可替代其他方法來作為HE預染色的質控。在HE染色前，只需要使用1～2張多組織蠟塊切片上機染色，便可觀察染色效果，節約成本的同時操作簡單便捷，有臨床應用價值。