過江藤合成氧化銀在血液透析導管病菌培養中的抗菌活性

李汝芬 于風葉 任 瑞 王 琳 宋向芹 鄧方方 紀象芹

濱州醫學院附屬醫院 山東 濱州 256603

近年來，隨著各種原因引起腎功能衰竭患者的增加，血液透析已經成為一種重要的治療手段。血管通路是血液透析病人必不可少的前提條件，雖然自體動靜脈內瘺是其首選的血管通路，但由于血管條件差，無法建立內瘺或等待內瘺成熟期的病人，中心靜脈留置導管依然廣泛應用于血液透析治療。感染是中心靜脈留置導管最常見的并發癥，可導致血液透析病人住院率增高和住院時間增加，影響病人的生活質量和長期生存率；且導管相關血液源性感染是其較為常見且嚴重的并發癥，甚至可以導致患者死亡[1]。黃雨琴[2]指出：使用中心靜脈導管進行血液透析的患者，導管相關感染的發生率超過15%，且隨著透析時間的延長，感染發生率越來越高。尿毒癥血液透析患者由于腎臟排泄功能的降低，藥物特別是抗生素的應用更加控制嚴格，為防止中心靜脈導管感染，嚴格的無菌操作及導管護理用品的選擇尤為重要。楊勇勛等報道[3]植物藥過江藤具有較寬的抗炎、抗菌止痛等活性譜，可用于清熱解毒，散瘀消腫，跌打損傷；外用治癰疽疔毒，帶狀皰疹，慢性濕疹等病癥。銀化合物及其鹽類自20世紀60年代起就被用作燒傷及深度創面的治療用物及護理產品，且植物提取物合成Ag2O易獲得、安全無毒，具有植物成分化學性質，輔助減少陰離子[4]，目前仍有銀化合物合成藥物用于臨床傷口的抗感染治療，Ag2O 納米粒子作為一種有效的抗菌藥物也已被廣泛研究和證實。研究證明：草藥抗菌素和金屬的開發有巨大潛能，能成功治療傳染性疾病，同時減少與抗生素使用相關的副作用[5]。本研究團隊使用過江藤提取物綠色合成氧化銀粒子，在透析用中心靜脈置管病菌培養皿中測定其抗菌活性，旨在尋找一種天然有效，副作用小的透析用導管抗菌護理用品。

1 材料和方法

1.1 材料與設備 過江藤植物的干燥葉片,花期采摘，硝酸銀(分析級)溶液，高壓釜，FDV小型高速超細粉碎機，硅石坩堝，馬弗爐等。

1.2 過江藤植物粉末制作 選取過江藤植物的新鮮葉子，流動水清洗干凈，瀝干水分，放入高壓釜中對植物葉子進行干燥。干燥后的葉片使用FDV小型高速超細粉碎機進行粉碎，粉碎后粉末顆粒透射電鏡(TEM)分析直徑在5～10 μm之間，將粉碎粉末收集備用。

1.3 過江藤Ag2O粒子的合成 準備好硝酸銀溶液(分析級)，將硝酸銀和過江藤葉子粉末按重量1∶1比例放入硅石坩堝，使用磁攪拌器充分攪拌5～10 min，使其充分混勻。將混合物置于(600±10)℃預熱的馬弗爐中，中心部分最先出現反應，火焰先出現在表面，然后快速充滿爐體，通過吸收劑結構分離無色粉末，合成的Ag2O 通過X射線衍射和TEM分析顯示平均粒徑范圍為20 nm，符合氧化銀典型結構。隨后將合成的Ag2O 用于透析用中心靜脈導管病菌培養的抗菌活性研究。

1.4 透析用中心靜脈導管病菌培養 選擇本醫療機構使用中心靜脈導管進行血液透析患者30例，在導管護理前，用無菌棉簽蘸取0.9%無菌氯化鈉溶液擦拭導管植入口周圍皮膚，擦拭范圍直徑>15 cm，擦拭三次后待干。將浸有無菌生理鹽水采樣液的棉拭子一支在導管植入口周圍皮膚及導管距植入口1 cm處旋轉涂擦各兩次，并隨之轉動采樣棉拭子，無菌手術剪剪去手接觸部位；將棉拭子放入裝有10 mL采樣液的試管內送微生物實驗室行微生物培養[6]。30例患者中培養出6例患者3種菌，其中表皮葡萄球菌者2例，金黃色葡萄球菌者3例，黃曲霉菌者1例。

1.5 抗菌活性篩選方法 采用擴散法測定抗菌活性[7]。將培養出的菌株分別接種于培養基中進行培養，其中表皮球菌和金黃色葡萄球菌菌株接種于血瓊脂平板培養基，黃曲霉菌菌株接種于沙保羅培養基。接種方法：用無菌棉拭蘸取菌液，在管內壁液面上方旋轉緊壓，將多余菌液擠去，然后在培養基表面均勻涂布接種3次，每次旋轉平板60度以確保接種菌的均勻分布，最后沿平板內緣涂抹一周，接種好的平板可敞開蓋子在室溫下干燥5 min。 采用二甲基亞砜(DMSO)溶解法分別制備過江藤粉末(0.1 mg/mL)和過江藤氧化銀(0.1 mg/mL)萃取物，然后將過江藤粉末、過江藤氧化銀、四環素、氟康唑及DMSO制備成直徑為0.5 cm的抗菌紙片，然后用浸滿藥液的紙片分別明確標識后放入菌株培養基表面并輕壓，使紙片與培養基表面完全接觸。其中四環素(0.1 mg/mL)作為抗表皮球菌和金黃色葡萄球菌的標準對照，氟康唑(0.1 mg/mL)作為抗黃曲霉菌抗菌的標準對照，DMSO溶劑為空白對照。表皮球菌、金黃色葡萄球菌在35 ℃下培養24 h，黃曲霉菌培養皿在37 ℃條件下培養48 h。每種菌株培養皿針對同種藥劑做30個培養皿，每皿測量抑菌區域直徑，以毫米計。培養結果聘請微生物實驗室專業檢驗師判定，抑菌圈直徑15 mm以上為高度敏感，10～14 mm為中度敏感，10 mm以下為低度敏感，0為不敏感[8]。

2 結果

通過分析培養皿抑菌圈表明：表皮球菌對四環素、過江藤、過江藤Ag2O均敏感，但對四環素敏感性更高；金黃色葡萄球菌對過江藤、過江藤合成Ag2O粒子敏感，對四環素不敏感；黃曲霉菌對氟康唑、過江藤合成Ag2O粒子、過江藤均敏感，前兩者抑菌結果無顯著差異，過江藤粉效果較前兩種藥劑效果略差。本實驗將病菌對藥物敏感性作為藥物抗菌活性的判斷指標。病菌對藥劑的敏感性結果見表1、表2。

表1 不同病菌對不同藥劑的敏感性對照表

表2 不同抗菌藥物的抗菌活性(抑菌區域直徑)/mm

3 討論

中藥過江藤有較好的抗菌活性，合成Ag2O抗菌活性明顯提高。通過抗菌活性實驗得出，過江藤粉末對表皮球菌、金黃色葡萄球菌及黃曲霉菌均有抗菌活性。在合成Ag2O后，抗金黃色葡萄球菌和黃曲霉菌活性明顯提高，可能與銀離子協同作用有關。表皮球菌在無禁忌的情況下，首選四環素，過江藤和過江藤Ag2O顆粒可作為次選。在抗黃曲霉菌作用方面，氟康唑與過江藤Ag2O顆粒均可作為首選，過江藤粉末次選。

尿毒癥患者由于貧血、營養不良、機體免疫力低下等原因，極易發生各種感染。而腎小球濾過率的下降，影響了抗生素的代謝和清除。如果抗生素使用時間或用量不當，極易出現抗生素腦病[9]。深靜脈置管作為急癥透析和動靜脈內瘺準備期間必不可少的血管通路，同時也是最易發生感染的血管通路。導管相關血液源性感染是其較為常見且嚴重的并發癥，甚至導致患者死亡[1]。國外學者研究報道：金黃色葡萄球菌主要通過皮膚表面傳播，由于靜脈留置導管破壞正常皮膚保護屏障，同時處于患者普遍處在較為危重的疾病進程中，免疫功能相對低下，所以極易導致金黃色葡萄球侵入繁殖引發感染[10]。

在預防透析用中心靜脈置管感染的措施中，導管護理起到十分重要的作用。除嚴格執行手衛生和無菌操作之外，導管護理敷料選擇和抗生素軟膏的使用[11]也十分重要。由于抗生素使用的局限性，選擇安全、實用、副作用小、抗菌效果好的導管護理用材料成為本團隊研究目標。

草藥中含有的抗生素具有巨大的開發潛力，越來越多的中草藥抗生素成為醫藥人員的研究目標。過江藤植物提取物合成的Ag2O 粒子能更有效地對抗對細菌性和真菌性病原體，且容易獲取、安全、副作用小。既可以有效防止細菌及真菌感染，又減少了抗生素使用相關副作用，適宜尿毒癥血液透析患者使用，因此在開發透析用中心靜脈置管護理用敷料方面具巨大的潛能。

本研究的不足之處是沒有將氧化銀單獨作為觀察藥劑進行對比分析，此部分內容將在下一步研究中進行。