肺炎支原體肺炎患兒血清可溶性細胞間黏附分子-1、CD40配體表達及其預(yù)后相關(guān)性研究

楊穎， 劉亞昆， 董天津

肺炎支原體肺炎是肺炎支原體感染引起的一種兒童肺部炎癥性疾病，約占兒童獲得性肺炎的一半，目前肺炎支原體肺炎發(fā)病率呈逐年增長趨勢，且主要發(fā)生于兒童及年輕人[1]。肺炎支原體肺炎可引發(fā)各種肺部病變，嚴重影響兒童生命健康[2-3]，因此臨床上急需特異性較高的生物學(xué)指標用于評估患者預(yù)后。可溶性細胞間黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1，sICAM-1)是ICAM-1的可溶形式，可定量測量，且有利于炎癥反應(yīng)的激活[4]。CD40配體(CD40 ligand，CD40L)主要由活化的CD4+、CD8+T淋巴細胞產(chǎn)生，可調(diào)節(jié)機體炎癥反應(yīng)、細胞和體液免疫應(yīng)答過程[5]。然而目前關(guān)于sICAM-1、CD40L與肺炎支原體肺炎相關(guān)性的研究較少，因此，本研究通過探討sICAM-1、CD40L在肺炎支原體肺炎患兒血清中的表達及其與預(yù)后的相關(guān)性，以期為改善患兒預(yù)后提供可靠的理論依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2019年2月至2020年5月本院收治的肺炎支原體肺炎患兒146例為研究對象，根據(jù)病情嚴重程度將患兒分為輕癥組74例和重癥組72例。輕癥組中男32例，女42例；年齡3～8歲，平均年齡(5.76±2.38)歲。重癥組中男34例，女38例；年齡3～8歲，平均年齡(5.72±2.96)歲。同期選取健康體檢兒童78例為對照組，其中男30例，女48例；年齡3～9歲，平均年齡(5.82±2.89)歲。3組研究對象性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標準 參照《兒童肺炎支原體肺炎診治專家共識(2015年版)》中兒童肺炎支原體肺炎的診斷標準[6]。重癥肺炎支原體肺炎診斷標準：臨床上正規(guī)大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療1周無效、胸部影像學(xué)表現(xiàn)(胸腔積液、大片和高密度實變陰影、肺不張或濃重等)及臨床癥狀(呼吸困難、咳嗽)加重、持續(xù)高熱不退、病情較嚴重或合并嚴重肺外并發(fā)癥等情況[7]，未達到此標準的MPP患兒為輕癥。

1.3 納入標準 (1)符合兒童肺炎支原體肺炎的診斷標準；(2)年齡≤12歲；(3)1個月內(nèi)未使用抗炎、免疫抑制劑、干擾素、血液制品治療者；(4)病例資料齊全者。(5)經(jīng)本院臨床研究倫理委員會批準，符合倫理學(xué)標準，所有研究對象家屬均簽署知情同意書。

1.4 排除標準 (1)合并其他感染性疾病或慢性疾病者；(2)有支氣管哮喘、免疫性疾病史者；(3)合并病毒性肺炎、肺結(jié)核、細菌性肺炎等其他肺部疾病者；(4)有糖皮質(zhì)激素和β2受體激動劑過敏史者。

1.5 研究方法

1.5.1 樣品采集及保存 采集健康體檢兒童體檢當(dāng)天及肺炎支原體肺炎患兒入院第二天清晨空腹靜脈血，3 000 r/min離心15 min后收集血清，置于-80 ℃保存待測。

1.5.2 肺炎支原體感染的血清學(xué)檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)試驗診斷肺炎支原體感染。ELISA分別檢測IgG和IgM，單次測定肺炎支原體-IgM陽性即可提示肺炎支原體的近期感染，急性期和恢復(fù)期肺炎支原體-IgM或IgG抗體滴度呈4倍及以上增高或降低時，同樣可確診肺炎支原體感染。

1.5.3 血清sICAM-1、CD40L、炎性因子水平檢測 采用ELISA法檢測3組兒童血清sICAM-1、CD40L、C反應(yīng)蛋白(C-reactive protein，CRP)、降鈣素原(procallcitonin，PCT)水平，檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。sICAM-1 ELISA試劑盒購自武漢益普生物科技有限公司；CD40L ELISA試劑盒購自上海科敏生物科技有限公司；CRP ELISA試劑盒購自上海江萊生物科技有限公司；PCT ELISA試劑盒購自南京賽泓瑞生物科技有限公司；人肺炎支原體抗體ELISA試劑盒購自上海晶抗生物工程有限公司。

1.5.4 肺功能指標檢測 采用CHESTAC-8900型肺功能儀(北京西化儀科技有限公司)檢測3組兒童的肺功能指標第一秒用力呼氣量(forced expiratory volume in one second，F(xiàn)EV1)、用力肺活量(forced vital capacity，F(xiàn)VC)，并計算FEV1/FVC比值。

1.6 療效判定標準 患兒體溫正常、氣喘及咳嗽癥狀緩解、肺部聽診濕啰音消失或減少、影像學(xué)胸片提示肺部病灶有吸收或消失，即認為治療有效，歸為預(yù)后良好組。患兒體溫?zé)o明顯下降、肺部體征及咳嗽等癥狀無變化或加重、影像學(xué)胸片提示肺部病灶無吸收或加重、患兒需轉(zhuǎn)至上級醫(yī)院治療或死亡，即認為治療無效，歸為預(yù)后不良組[8]。

2 結(jié)果

2.1 3組血清sICAM-1、CD40L水平比較 重癥組血清sICAM-1、CD40L水平高于輕癥組和對照組，輕癥組血清sICAM-1、CD40L水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清sICAM-1、CD40L水平比較

2.2 3組血清炎性因子及肺功能指標比較 重癥組血清CRP、PCT水平高于輕癥組和對照組，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC低于輕癥組和對照組；輕癥組血清CRP、PCT水平高于對照組，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC低于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組血清炎性因子及肺功能指標比較

2.3 肺炎支原體肺炎患兒血清sICAM-1、CD40L與炎性因子及肺功能指標相關(guān)性 Pearson法分析結(jié)果顯示，肺炎支原體肺炎患兒血清sICAM-1、CD40L與CRP、PCT呈正相關(guān)，與FEV1、FEV1/FVC呈負相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 肺炎支原體肺炎患兒血清sICAM-1、CD40L與炎性因子及肺功能指標相關(guān)性

2.4 肺炎支原體肺炎患兒不同預(yù)后血清sICAM-1、CD40L、炎性因子水平及肺功能指標比較 輕癥與重癥肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后不良組血清sICAM-1、CD40L、CRP、PCT水平高于預(yù)后良好組，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC水平低于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 肺炎支原體肺炎患兒不同預(yù)后血清sICAM-1、CD40L、炎性因子水平及肺功能指標比較

2.5 影響肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后的多因素Logistic回歸分析 將肺炎支原體肺炎患兒是否發(fā)生不良預(yù)后作為因變量，以sICAM-1、CD40L、CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC為自變量進行Logistic回歸分析，結(jié)果顯示sICAM-1、CD40L是影響肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后不良的獨立危險因素(P<0.05)。見表5。

表5 影響肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后的多因素Logistic回歸分析

3 討論

肺炎支原體肺炎的發(fā)病機制尚不明確，但炎癥是促進其疾病惡化發(fā)展為惡性疾病的重要因素，且其發(fā)病機制可能與機體免疫損害也有重要聯(lián)系[9-10]。肺炎支原體肺炎患兒若不及時治療，可能會造成神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)損害等多系統(tǒng)多器官并發(fā)癥，引起患兒病情惡化，甚至?xí)鹚劳龅炔涣碱A(yù)后[11]。因此，合理、有效的早期評估肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后，對于改善治療效果、降低不良預(yù)后發(fā)生率有重要意義。

sICAM-1是一種單鏈跨膜糖蛋白和免疫球蛋白，在成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等細胞表面廣泛表達[12]。sICAM-1能通過釋放炎性介質(zhì)參與炎癥反應(yīng)，且能黏附分子參與機體免疫應(yīng)答，并可協(xié)同激活細胞免疫[13]。本研究結(jié)果顯示，隨著肺炎支原體肺炎發(fā)生及患兒病情加重，血清sICAM-1水平呈上升趨勢，與杜莉等[14]研究結(jié)果一致。提示sICAM-1可能通過高表達參與疾病的發(fā)生、發(fā)展，推測sICAM-1表達上調(diào)后可介導(dǎo)炎癥細胞在支氣管腔中聚集，進而釋放炎癥介質(zhì)，參與炎癥反應(yīng)，加速患者病情發(fā)展。且本研究中輕癥與重癥預(yù)后不良患兒血清sICAM-1水平高于預(yù)后良好患兒，且sICAM-1是影響肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后不良的獨立危險因素。提示sICAM-1不僅與病情進展有關(guān)，還與預(yù)后有密切聯(lián)系，sICAM-1高表達不利于其預(yù)后。

CD40L又稱腫瘤壞死因子相關(guān)激活蛋白，可與其相應(yīng)受體CD40共同激活T細胞，調(diào)節(jié)T細胞與B細胞的相互作用，參與機體免疫應(yīng)答[15]。CD40-CD40L同時調(diào)節(jié)多種炎癥反應(yīng)，促進炎癥因子釋放，誘發(fā)炎癥疾病[16]。本研究結(jié)果中，重癥肺炎支原體肺炎患兒血清CD40L水平高于輕癥患兒和健康兒童，輕癥患兒CD40L水平高于健康兒童，輕癥與重癥預(yù)后不良患兒CD40L水平高于預(yù)后良好患兒，且CD40L是影響肺炎支原體肺炎患兒預(yù)后不良的獨立危險因素。與卞相麗等[17]研究結(jié)果基本一致，提示CD40L的高表達可能與肺炎支原體肺炎的發(fā)生、發(fā)展有密切聯(lián)系，其可能的作用機制為：肺炎支原體感染后，CD40L與其相應(yīng)受體CD40結(jié)合增加，參與T細胞與B細胞的調(diào)節(jié)，進而通過影響機體免疫應(yīng)答參與肺炎支原體肺炎的發(fā)病，加速病情進展，進而影響患兒預(yù)后；或者通過促進炎癥介質(zhì)的釋放，誘導(dǎo)肺炎支原體肺炎的發(fā)生。研究表明，CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC對于肺炎支原體肺炎病情、肺功能改變的判斷有重要意義[18-19]。而本研究中隨著患兒病情由輕癥到重癥，血清CRP、PCT水平升高，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC降低。提示與輕癥患兒相比，重癥患兒肺部炎癥加深、肺功能損害加重，臨床中CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC指標的改變對肺炎支原體肺炎病情程度的判定具有重要意義。此外，預(yù)后不良患兒血清CRP、PCT水平高于預(yù)后良好患兒，F(xiàn)EV1、FEV1/FVC低于預(yù)后良好患兒。提示治療無效的患兒更易發(fā)生混合感染，出現(xiàn)壞死性肺炎，可遺留肺結(jié)構(gòu)和功能損害，使得炎癥指標CRP、PCT水平升高，肺功能指標FEV1、FEV1/FVC降低。且本研究中血清sICAM-1、CD40L與CRP、PCT、FEV1、FEV1/FVC均有一定的相關(guān)性。進一步提示sICAM-1、CD40L與肺炎支原體肺炎病情密切聯(lián)系，可能對預(yù)后評估有重要指導(dǎo)意義。

綜上所述，血清sICAM-1、CD40L表達水平隨肺炎支原體肺炎發(fā)生及患兒病情加重而呈上升趨勢，且與炎癥因子及肺功能指標均呈一定的相關(guān)性，并與患兒預(yù)后密切相關(guān)，表明sICAM-1、CD40L與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可用于評估預(yù)后。但本研究中sICAM-1、CD40L在肺炎支原體肺炎中的病理、生理機制仍不十分明確，需進一步深入研究。且因收集患者數(shù)量有限，結(jié)果可能存在一定的局限性，有待進一步加大樣本量進行驗證。