SEPT9基因甲基化、生長(zhǎng)分化因子15、糖類(lèi)抗原199與結(jié)直腸癌患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系

趙曉慧,李 爽

(北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院 檢驗(yàn)科,北京,101300)

結(jié)直腸癌是臨床最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，臨床癥狀不明顯，且呈多樣性，故早期診斷困難，多數(shù)患者就診時(shí)已發(fā)展至中晚期，導(dǎo)致5年生存率較低，病死率高[1]。因此，探尋早期特異性生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)于提高結(jié)直腸癌患者生存率和降低病死率具有重要意義。SEPT9基因甲基化(mSEPT9)在多種惡性腫瘤中過(guò)度表達(dá)，可作為結(jié)直腸癌篩查和預(yù)后判斷的有效指標(biāo)[2];生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)與結(jié)直腸癌的進(jìn)展顯著相關(guān)，是結(jié)直腸癌早期的有效診斷指標(biāo)[3];糖類(lèi)抗原199(CA199)是結(jié)直腸癌預(yù)后的影響因素，對(duì)結(jié)直腸癌相關(guān)轉(zhuǎn)移有預(yù)測(cè)價(jià)值[4]。本研究分析結(jié)直腸癌患者mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)情況及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，旨在為結(jié)直腸癌的早期診斷和預(yù)后判斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年1月—2016年3月北京中醫(yī)醫(yī)院順義醫(yī)院肛腸科收治的218例住院患者的臨床資料，將其中結(jié)直腸癌患者106例納入癌癥組，將結(jié)直腸腺瘤患者112例納入腺瘤組。癌癥組中，男60例、女46例，平均年齡(62.51±8.36)歲。腺瘤組中，男63例、女59例，平均年齡(62.29±8.61)歲。納入標(biāo)準(zhǔn):① 臨床資料保存完整，滿足研究需求者;② 依從性高且簽署入組知情同意書(shū)者;③符合結(jié)直腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]或結(jié)直腸腺瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)術(shù)后病理檢查確診者。排除標(biāo)準(zhǔn):① 合并其他系統(tǒng)惡性腫瘤者;② 合并自身免疫系統(tǒng)疾病者;③ 伴其他胃腸道疾病者;④ 有精神疾病史者。另選取同期體檢中心的100例健康體檢者納入對(duì)照組，男56例、女44例，平均年齡(62.08±8.76)歲。3組研究對(duì)象的一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)備案。

1.2 檢測(cè)方法

所有研究對(duì)象均于空腹8 h以上的次日早晨8點(diǎn)抽取2管靜脈血，一管注入EDTA抗凝管(2 mL血)，另一管注入無(wú)抗凝劑干燥試管(3 mL血)，顛倒數(shù)次混勻，靜置30 min后以3 000 轉(zhuǎn)/min速度離心10 min,分離血漿和血清。mSEPT9檢測(cè)儀器為ABI7500 Fast DxPCR儀，每個(gè)樣本重復(fù)檢測(cè)3次,3個(gè)測(cè)試結(jié)果中有2個(gè)及以上Ct值<45,結(jié)果即判定為陽(yáng)性，反之判定為陰性。GDF15采用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒由美國(guó)R&D Systems提供，超過(guò)0.5 ng/mL即判定為陽(yáng)性。CA199采用貝克曼DXI-800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，超過(guò)35 U/mL即判定為陽(yáng)性。所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，室內(nèi)質(zhì)控、陰陽(yáng)對(duì)照均在控。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)情況比較

癌癥組mSEPT9陽(yáng)性率和GDF15、CA199表達(dá)水平高于腺瘤組、對(duì)照組，且腺瘤組高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 mSEPT9、GDF15、CA199在不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)

比較不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者的mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)情況發(fā)現(xiàn),mSEPT9、GDF15、CA199在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、浸潤(rùn)深度為漿膜層以下、分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切的患者中表達(dá)更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);不同年齡、不同性別、不同腫瘤部位、不同腫瘤直徑患者的mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 3組mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)情況

2.3 mSEPT9、GDF15、CA199與結(jié)直腸癌不同病理特征中的相關(guān)性分析

納入差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的臨床病理特征進(jìn)行Pearson 相關(guān)性分析，結(jié)果顯示,mSEPT9、GDF15、CA199與TNM分期、浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的單因素回歸分析

根據(jù)結(jié)直腸癌患者的臨床病理特征進(jìn)行分組，進(jìn)行COX單因素回歸分析，結(jié)果顯示，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、浸潤(rùn)深度為漿膜層以下、分化程度為低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及mSEPT9、GDF15、CA199陽(yáng)性表達(dá)是結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的影響因素(P<0.05)。見(jiàn)表4。

2.5 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的多因素回歸分析

以COX單因素回歸分析中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量，以生存結(jié)局(其中生存=0，死亡=1)和生存時(shí)間為因變量，進(jìn)行COX多因素回歸分析。結(jié)果顯示，臨床分期高、分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及mSEPT9、GDF15、CA199陽(yáng)性表達(dá)是結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見(jiàn)表5。

3 討 論

早期結(jié)直腸癌患者的5年生存率可超過(guò)90%,但由于發(fā)病初期癥狀不明顯，加之缺乏有效的檢測(cè)手段，很多結(jié)直腸癌患者就診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)，而晚期結(jié)直腸癌患者的5年生存率不足12%[6]。目前，結(jié)直腸癌的篩查手段以糞便潛血試驗(yàn)和腸鏡檢查為主。糞便潛血試驗(yàn)雖然快速、無(wú)創(chuàng)、經(jīng)濟(jì)，但易受到其他因mSEPT9:SEPT9基因甲基化;GDF15:生長(zhǎng)分化因子15;CA199:糖類(lèi)抗原199。

表2 mSEPT9、GDF15、CA199在不同臨床病理特征結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)

表3 mSEPT9、GDF15、CA199與結(jié)直腸癌不同病理特征的相關(guān)性分析

表4 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的單因素回歸分析[n(%)]

表5 影響結(jié)直腸癌患者預(yù)后的多因素回歸分析

素影響，假陽(yáng)性率高[7]。腸鏡是結(jié)直腸癌確診的金標(biāo)準(zhǔn)，但部分患者存在行動(dòng)不便或依從性差的情況，高危人群的篩查率不足20%[8]。腫瘤標(biāo)志物具有快速、安全、無(wú)創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，已被越來(lái)越多地應(yīng)用于腫瘤的篩查、診斷及預(yù)后判斷中。

SEPT9是septin基因家族的成員之一，位于染色體17q25.3上，在細(xì)胞分裂末期起重要作用。SEPT9能夠編碼SEPT9蛋白從而防止細(xì)胞過(guò)快分裂或不受控制，當(dāng)SEPT9啟動(dòng)區(qū)域甲基化時(shí)，可阻止SEPT9蛋白表達(dá)，誘發(fā)結(jié)直腸癌的發(fā)展，此時(shí)mSEPT9則會(huì)從壞死性和凋亡性癌細(xì)胞中脫落釋放入血，導(dǎo)致含量升高[9]。冷霞等[10]研究表明，隨著結(jié)直腸癌病情進(jìn)展,mSEPT9明顯升高，故可作為結(jié)直腸癌的敏感腫瘤標(biāo)志物。GDF15是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族成員，在健康人體內(nèi)低表達(dá)。機(jī)體缺氧、炎癥、腫瘤等病理過(guò)程中,GDF15不僅能發(fā)揮早期抑癌、晚期促癌的作用，還能通過(guò)多種途徑干擾細(xì)胞參與免疫應(yīng)答，影響腫瘤免疫調(diào)節(jié)[11]。CA199是一種唾液酸衍生物，在血清中以唾液黏蛋白形式存在，于膽囊、胰腺、胃腸道黏膜等正常組織中可檢測(cè)到，其血液濃度升高往往預(yù)示疾病惡化，可用于胰腺癌、結(jié)直腸癌的檢測(cè)[12]。本研究結(jié)果顯示,mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)在結(jié)直腸癌患者中顯著升高，表明這些指標(biāo)可能與疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。曹亞萍等[13]報(bào)道,mSEPT9與CEA、CA199等腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)適用于結(jié)直腸癌的非侵入性診斷。邱智宇[14]也指出，GDF15等可溶性蛋白檢測(cè)可以建立準(zhǔn)確的腫瘤篩查預(yù)測(cè)模型，進(jìn)一步提高結(jié)直腸癌的早診率。

本研究發(fā)現(xiàn),mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)在TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、浸潤(rùn)深度為漿膜層以下、分化程度為低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切的患者中顯著升高，進(jìn)一步行Pearson 相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn),mSEPT9、GDF15、CA199與TNM分期、浸潤(rùn)深度、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)(P<0.05)。TNM是惡性腫瘤的分期系統(tǒng)，與疾病進(jìn)展相關(guān)，分期越高則腫瘤惡性程度越高，血清腫瘤標(biāo)志物水平也越高[15];結(jié)直腸癌患者的病死率和生存率與浸潤(rùn)深度密切相關(guān)，浸潤(rùn)越深，惡性程度越高，病死率越高，可根據(jù)浸潤(rùn)深度進(jìn)行病情診斷[16];腫瘤分化程度越低，腫瘤惡性程度越高，相應(yīng)腫瘤標(biāo)志物水平也越高[17];當(dāng)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)到黏膜下層時(shí)就可能進(jìn)入淋巴管而發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，浸潤(rùn)深度越深，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)越大[18]。侵襲性轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者一般已進(jìn)展至中晚期，病情嚴(yán)重，預(yù)后也較差。因此，臨床醫(yī)生可通過(guò)檢測(cè)mSEPT9、GDF15、CA199來(lái)了解患者的臨床病理特征和轉(zhuǎn)移情況，并對(duì)患者的病情進(jìn)展和預(yù)后進(jìn)行評(píng)估。

本研究發(fā)現(xiàn)，臨床分期高、分化程度低、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及mSEPT9、GDF15、CA199陽(yáng)性表達(dá)是結(jié)直腸癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05),與張煌等[19]研究結(jié)論相符，證實(shí)mSEPT9、GDF15、CA199陽(yáng)性表達(dá)與結(jié)直腸癌的發(fā)生、進(jìn)展及預(yù)后密切相關(guān)。

綜上所述，結(jié)直腸癌患者mSEPT9、GDF15、CA199表達(dá)顯著升高，且與不同臨床病理特征密切相關(guān),mSEPT9、GDF15、CA199陽(yáng)性表達(dá)是患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，臨床應(yīng)加強(qiáng)干預(yù)，以改善患者預(yù)后，提高其生存率。但本研究樣本量較小，且病例均來(lái)自一家醫(yī)院，可能存在一定選擇偏倚，有待日后進(jìn)行大樣本量、多中心研究來(lái)驗(yàn)證結(jié)論的準(zhǔn)確性，從而為結(jié)直腸癌的早期診斷及預(yù)后判斷提供參考依據(jù)。