Toll樣受體4、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子水平對(duì)肝細(xì)胞癌患者切除術(shù)后預(yù)后的影響

何 清,李 陽(yáng),鄧盼盼,繆宇飛,姜里航

(1.中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第904醫(yī)院 檢驗(yàn)科,江蘇 無(wú)錫,214000;2.江蘇省無(wú)錫市中醫(yī)醫(yī)院 檢驗(yàn)科,江蘇 無(wú)錫,214000)

手術(shù)是治療早期肝細(xì)胞癌的重要手段，可較大程度地提高肝細(xì)胞癌病灶根治性清除率，提升患者術(shù)后5年生存率[1]。但由于肝細(xì)胞癌發(fā)展迅速，患者術(shù)后仍有腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，預(yù)后較差[2]。因此，分析與肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后有關(guān)的指標(biāo)并采取相應(yīng)治療措施，對(duì)于減少腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和提高患者無(wú)瘤生存率具有重要的臨床意義。Toll樣受體4(TLR4)可介導(dǎo)多種信號(hào)通路，介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞免疫逃逸的發(fā)生，進(jìn)而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲能力，增加腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[3]。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)可促進(jìn)細(xì)胞分裂，增強(qiáng)上皮細(xì)胞侵襲、遷移能力，已被研究[4]證實(shí)在多種惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。本研究觀察肝細(xì)胞癌患者術(shù)前血清TLR4、HGF水平，并分析其與肝細(xì)胞癌患者肝細(xì)胞癌切除術(shù)后預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年4月—2020年4月聯(lián)勤保障部隊(duì)第904醫(yī)院和無(wú)錫市中醫(yī)醫(yī)院收治的78例肝細(xì)胞癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):① 肝細(xì)胞癌的診斷符合《外科學(xué)》[5]中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)者;② 接受肝細(xì)胞癌切除術(shù)治療者;③ 經(jīng)術(shù)后病理檢查明確診斷，且腫瘤TNM分期[6]為Ⅱ～Ⅲ期者。排除標(biāo)準(zhǔn):① 腫瘤直徑>5 cm的大肝癌與巨大肝癌;② 術(shù)前及術(shù)后接受放化療治療者;③ 合并呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等其他惡性腫瘤者;④ 既往有其他器官移植手術(shù)史者;⑤ 術(shù)前1周內(nèi)接受過(guò)抗生素或微生態(tài)制劑治療者;⑥ 隨訪期間死亡者。78例患者中，男66例，女12例;年齡45～56歲，平均51.50(49.00,54.00)歲;合并高血壓病14例，合并糖尿病7例;有大量飲酒史者47例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批，且患者家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 手術(shù)治療:所有患者完善相關(guān)檢查后，接受肝細(xì)胞癌切除術(shù)。

1.2.2 基線資料收集:設(shè)計(jì)患者基線資料調(diào)查表，內(nèi)容包括年齡、性別、合并疾病[高血壓病(收縮壓≥140 mmHg或/和舒張壓≥90 mmHg)、糖尿病(隨機(jī)血糖≥11.1 mmol/L或空腹血糖≥7.0 mmol/L)]、大量飲酒史(男性>40 g/d,女性>20 g/d,超過(guò)5年;或2周內(nèi)飲酒量達(dá)80 g)、病灶最大徑(根據(jù)術(shù)前影像學(xué)檢查結(jié)果評(píng)估)、TNM分期(根據(jù)術(shù)后病理檢查明確分期為Ⅱ期或Ⅲ期)、手術(shù)時(shí)間和術(shù)中出血量。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè):術(shù)前采集患者空腹靜脈血5 mL,離心15 min(離心半徑10 cm,轉(zhuǎn)速3 000轉(zhuǎn)/min),留取血清待檢。① 采用生化分析儀測(cè)定血清肝功能指標(biāo)[谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)]水平;② 采用電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清腫瘤標(biāo)志物[甲胎蛋白(AFP)、α-L-巖藻糖苷酶(AFU)]水平;③ 采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血清TLR4、HGF水平，酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自卡邁舒(上海)生物科技有限公司。

1.3 預(yù)后評(píng)估及分組

所有肝細(xì)胞癌患者術(shù)后均接受為期1年的隨訪，并于術(shù)后3、6、9、12個(gè)月時(shí)到院復(fù)診。記錄患者隨訪期間復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況;每次復(fù)診時(shí)對(duì)存活患者首先行生化檢查、影像學(xué)檢查，對(duì)存在異常情況者行超聲引導(dǎo)下肝穿刺組織活檢，明確復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況;根據(jù)帶瘤生存或無(wú)瘤生存判斷預(yù)后，將患者分為預(yù)后不良組和預(yù)后良好組。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 預(yù)后情況

隨訪至術(shù)后1年時(shí),78例肝細(xì)胞癌患者中，預(yù)后不良者16例(占20.51%)。

2.2 基線資料、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較

預(yù)后不良組患者術(shù)前血清AFP、AFU、TLR4、HGF水平均高于預(yù)后良好組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2組基線資料和其他實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2組患者基線資料和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)結(jié)果比較

2.3 肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的影響因素分析

將肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后情況作為因變量(1=預(yù)后不良,0=預(yù)后良好)，將單因素Logistics回歸分析后組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)作為自變量(P值放寬至<0.10),進(jìn)行多因素Logistics回歸分析，自變量類型與賦值情況見(jiàn)表2。多因素Logistics回歸分析結(jié)果顯示，術(shù)前血清AFP、AFU、TLR4和HGF高水平是肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素(OR>1,P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.4 術(shù)前血清TLR4、HGF水平對(duì)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

將術(shù)前血清TLR4、HGF水平單獨(dú)及聯(lián)合檢測(cè)作為檢驗(yàn)變量，將肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后情況作為狀態(tài)變量(1=預(yù)后不良,0=預(yù)后良好)，繪制ROC曲線，見(jiàn)圖1。結(jié)果顯示，術(shù)前血清TLR4、HGF水平單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的AUC均>0.70,具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。見(jiàn)表4。

表2 自變量類型與賦值情況

表3 前血清TLR4、HGF水平對(duì)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后影響的回歸分析

表4 術(shù)前血清TLR4、HGF單獨(dú)及聯(lián)合對(duì)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值

3 討 論

肝切除術(shù)雖能解決肝硬化、肝癌等肝實(shí)質(zhì)病變問(wèn)題，但由于腫瘤細(xì)胞術(shù)前或術(shù)中發(fā)生微小轉(zhuǎn)移、病灶殘留、新生腫瘤及免疫狀態(tài)異常等，肝細(xì)胞癌患者術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移情況較為常見(jiàn)，不利于預(yù)后[7-8]。本研究78例肝細(xì)胞癌患者中，術(shù)后預(yù)后不良者16例，占20.51%,說(shuō)明肝細(xì)胞癌患者術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高。因此，分析肝細(xì)胞癌患者預(yù)后不良的影響因素并采取有效的治療方案，對(duì)于改善患者預(yù)后意義重大。

AFP水平持續(xù)升高可抑制樹(shù)突細(xì)胞成熟，導(dǎo)致樹(shù)突細(xì)胞抗原遞呈能力下降，進(jìn)而引起腫瘤細(xì)胞免疫逃逸，有研究[9]稱AFP與肝細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。AFU為溶酶體酸性水解酶，在肝癌患者中呈異常升高，已被臨床應(yīng)用于低水平AFP的原發(fā)性肝癌診斷中[10]。但AFP、AFU在肝硬化、急慢性肝炎及其他惡性腫瘤患者體內(nèi)均可呈異常升高，影響了對(duì)肝細(xì)胞癌患者肝細(xì)胞癌術(shù)后預(yù)后的評(píng)估準(zhǔn)確性。

TLR4為Ⅰ型跨膜糖蛋白，可激活細(xì)胞內(nèi)級(jí)聯(lián)分子信號(hào)通路，并激活多種與腫瘤相關(guān)的信號(hào)分子，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞抵抗淋巴細(xì)胞的能力，造成免疫逃逸[11]。相關(guān)研究[12]指出,HGF可促進(jìn)癌細(xì)胞向周圍組織及血管內(nèi)遷移，是評(píng)估肝細(xì)胞癌患者預(yù)后的重要指標(biāo)。基于此，作者推測(cè)術(shù)前血清TLR4、HGF水平可能與肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，預(yù)后不良組患者術(shù)前血清TLR4、HGF水平顯著高于預(yù)后良好組，初步推測(cè)血清TLR4、HGF水平與肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后不良有關(guān)，進(jìn)一步行回歸分析發(fā)現(xiàn)，術(shù)前血清TLR4、HGF高水平可能是肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素。分析可能原因,TLR4水平升高可激活活化蛋白1、核因子-κB等轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖，導(dǎo)致術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移[13]。此外,TLR4異常表達(dá)可通過(guò)識(shí)別病原相關(guān)分子模式，導(dǎo)致信號(hào)傳導(dǎo)被激活，引起肝臟中趨化因子、炎性因子水平升高，進(jìn)而加重肝纖維化程度，增加肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[14-16]。HGF水平升高可刺激肝癌細(xì)胞DNA的合成，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞數(shù)量增加，并誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)周圍組織，增加患者肝細(xì)胞癌術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)[17]。同時(shí),HGF異常升高后與HGF受體結(jié)合可導(dǎo)致組織內(nèi)基質(zhì)金屬蛋白酶水平升高，促使細(xì)胞外基質(zhì)降解，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞增殖、侵襲及抑制凋亡的能力增強(qiáng)，進(jìn)而增加術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)[18]。此外,HGF還能通過(guò)自分泌途徑增強(qiáng)肝臟血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促使惡性腫瘤新生血管形成，引起術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，增高患者術(shù)后帶瘤生存率[19-21]。

本研究ROC曲線結(jié)果顯示，術(shù)前血清TLR4、HGF水平單獨(dú)及聯(lián)合預(yù)測(cè)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后的AUC均>0.70,具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值;當(dāng)TLR4、HGF的cut-off值分別取13.629、0.608 ng/mL時(shí)，可獲得最佳預(yù)測(cè)價(jià)值。由此說(shuō)明，術(shù)前血清TLR4、HGF水平不僅與肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后有關(guān)，還可能是肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后不良的風(fēng)險(xiǎn)因子。因此，臨床可考慮在肝細(xì)胞癌早期對(duì)患者血清TLR4、HGF水平進(jìn)行檢測(cè)，水平異常升高的患者可采用靶向藥物、免疫制劑等治療或聯(lián)用中藥制劑，降低血清TLR4、HGF水平，從而有利于抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，減少術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，延長(zhǎng)患者無(wú)瘤生存期，改善患者預(yù)后。

綜上所述，肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后不良可能與術(shù)前血清TLR4、HGF水平高有關(guān)。術(shù)前血清TLR4、HGF水平對(duì)肝細(xì)胞癌患者術(shù)后預(yù)后具有一定預(yù)測(cè)價(jià)值，臨床應(yīng)早期檢測(cè)并采取相應(yīng)治療措施，從而改善患者預(yù)后。