替米沙坦氨氯地平片處方研究及溶出行為考察

徐斌，崔萍，丁逸梅,2，周衛

(1.江蘇省藥物研究所有限公司，江蘇 南京 210009；2.南京工業大學藥學院，江蘇 南京 210009;3.中國藥科大學，江蘇 南京 210009)

替米沙坦是長效、低毒的血管緊張素Ⅱ受體(AT)拮抗劑，聯合鈣離子通道阻滯劑氨氯地平使用，不僅使降壓作用增強，促進療效；減少單一用藥劑量過大引起的不良反應，同時可延緩高血壓的病理改變[1]。單用氨氯地平會出現劑量依賴型的不良反應如外周水腫的增多，而替米沙坦可擴張靜脈容量血管，恢復毛細血管內正常壓力，因而減少液體從毛細血管滲出，從而減少氨氯地平導致的水腫[2]。替米沙坦氨氯地平片由德國勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)制藥公司研制，商品名為Twynsta，2009年10月獲得美國食品藥品監督管理局(FDA)批準上市[3]。

雙層片是一種具有雙層結構的釋藥系統，單方可制成速緩釋兩層，既可快速釋放藥物減輕癥狀，又可緩慢維持有效劑量；復方是將兩種不同的藥物組合在一個雙層片中，可以提高有配伍反應藥物的穩定性；臨床上根據需要還可以制成口腔黏附雙層片或胃內漂浮雙層片，實現定位、定時和定量釋放藥物。本文中替米沙坦難溶于水，在氫氧化鈉溶液中可與葡甲胺形成絡鹽，改善水溶性，增加其溶出度[4-5]。氨氯地平在堿性環境下酯鍵容易水解[6]，所以勃林格殷格翰公司將Twynsta制成了上下雙層片。我們以Twynsta為原研參比制劑，采用正交設計試驗法對替米沙坦層進行了優化，并對其在不同介質中的溶出行為進行考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 ZRS-8G智能溶出試驗儀(天津市天大天發科技有限公司)；電子天平(Sartorius公司)；ZP37A型旋轉式壓片機(聊城萬合工業制造有限公司)；GL5-50干法制粒機(張家港市開創機械制造有限公司)；2010A 型高效液相色譜(日本島津)；SD-05噴霧干燥儀(英國Labplant公司)。

1.2 試藥 原研藥Twynsta(德國勃林格殷格翰制藥公司，批號：100971)；替米沙坦對照品(常州亞邦制藥股份有限公司，批號：M110505)；苯磺酸氨氯地平對照品(浙江新賽科藥業，批號：110606)；氫氧化鈉(湖南爾康制藥股份有限公司)；葡甲胺(西安立邦制藥有限公司)；聚維酮K30(安徽山河藥用輔料有限公司)；山梨醇(南寧化學制藥有限公司)；微晶纖維素(安徽山河藥用輔料有限公司)；聚醚砜(水系PES，德國Membrana公司)。

2 方法與結果

2.1 方法學研究

2.1.1 色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-0.075 mol·L-1乙酸銨溶液(pH 5.5)(660∶340)為流動相；檢測波長為237 nm，流速1.0 mL·min-1，柱溫40 ℃，進樣量為20 μL。理論板數分別按替米沙坦、氨氯地平峰計算應不低于2×103，兩個峰的分離度應大于1.5(見圖1)。

A.樣品；B.對照品 1.氨氯地平；2.替米沙坦

2.1.2 空白輔料干擾試驗 按處方制備空白輔料樣品，置溶出介質pH 7.5緩沖溶液中，按時取樣，濾過，注入液相色譜儀。結果表明，空白輔料對樣品測定無干擾(見圖1)。

2.1.3 線性關系的考察 精密稱取苯磺酸氨氯地平對照品適量(約含苯磺酸氨氯地平11 mg)，替米沙坦對照品約88.9 mg，置同一100 mL量瓶中，先加0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液5 mL，充分振搖后加甲醇適量，并超聲10 min，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。分別精密量取上述對照品儲備溶液2.5、3.5、5.0、6.5、7.5、10.0、13.0 mL，置100 mL量瓶中，加pH 7.5緩沖溶液稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各20 μL，依法進樣測定，以濃度C(μg·mL-1)為橫坐標，峰面積A為縱坐標，進行線性回歸。計算的回歸方程分別為：苯磺酸氨氯地平A=5.510×104C-6.889×103(r=0.999 9)；替米沙坦A=9.836×104C+2.902×104(r=0.999 9)。結果表明苯磺酸氨氯地平在2.805～14.59 μg·mL-1，替米沙坦在22.31～116.0 μg·mL-1范圍內呈良好線性。

2.1.4 進樣精密度試驗 取同一份溶出度測定液，重復進樣5次，結果表明進樣精密度良好，RSD為0.41%。

2.1.5 重復性試驗 分別取6個杯中溶出度測定液，測定30 min時的釋放量，結果，平均釋放量的RSD=1.89%，表明該方法重現性好。

2.1.6 回收率試驗 照處方比例制備空白片，在溶出杯中精密加入對照品適量，約相當于標示量的50%、70%、100%、130%，以pH 7.5磷酸鹽緩沖溶液900 mL為溶劑、轉速為75 r·min-1、溫度(37±0.5)℃的條件下，分別于30 min時取樣經0.45 μm水系PES濾膜過濾依法測定回收率分別為：苯磺酸氨氯地平99.60%(RSD=1.6%，n=12)，替米沙坦100.1%(RSD=0.6%，n=12)。

2.1.7 穩定性試驗 取“2.3”項下同一份溶出度測定液，分別于0、2、4、8、12、24 h測定樣品溶液濃度，結果表明在水、0.01 mol·L-1鹽酸溶液、pH 4.0、pH 7.5介質中溶出度測定液24 h內穩定(RSD為0.85%)。

表1 苯磺酸氨氯地平回收率試驗(n=12)

2.2 處方及制備工藝研究

2.2.1 替米沙坦氨氯地平片的制備工藝 取處方量的氫氧化鈉、葡甲胺與聚維酮K30溶于適量純水中，再取規定量的替米沙坦加入并攪拌至溶液澄清透明。通過蠕動泵將上述溶液逐批泵入噴霧設備，所制得含替米沙坦鈉鹽的物料與山梨醇混合均勻，進行干法制粒，尾料依次循環投料，最終所得顆粒與適量硬脂酸鎂混合均勻，備用。

在本品單方經驗基礎上，取處方量苯磺酸氨氯地平先與預交化淀粉、氧化鐵黑混合，再與淀粉及微晶纖維素混合均勻，加適量純水濕法制粒，置通風恒溫箱中干燥，定時翻動顆粒，整粒，最后與適量硬脂酸鎂、微粉硅膠總混，備用。

將上述顆粒分別測定主藥含量并計算各自的理論片重，壓制成上下雙層片，采用雙層鍍鋁膜袋密封保存，片劑硬度與脆碎度均符合《中國藥典》要求。

2.2.2 替米沙坦氨氯地平片工藝參數 替米沙坦在堿化成鹽過程中維持溶液溫度50～70 ℃，溶液澄清后以流速10 mL·min-1，霧化壓力0.2～0.4 MPa，進風溫度150 ℃，出風溫度100 ℃進行噴霧干燥；所得物料與山梨醇混合均勻后以滾軸12～18 r·min-1、物料輸送6～12 r·min-1、制粒10～20 r·min-1的速度進行干法制粒，取上層10目與下層24目之間顆粒，壓力6～7 kg。苯磺酸氨氯地平用24目篩濕法制粒后，置60 ℃環境下干燥，20目篩整粒。采用多層壓片機壓制上下雙層片，模具為16×8 mm橢圓形，替米沙坦層片重約0.48 g，氨氯地平層約0.2 g，片劑硬度11～13 kg。替米沙坦成鹽后易吸濕，制作環境相對濕度控制在30%～50%。

2.2.3 替米沙坦層處方的正交試驗優化 原研處方中氨氯地平在不同pH介質中15 min內藥物釋放均超過90%，所以參考原研處方選擇微晶纖維素、淀粉和預膠化淀粉為主要輔料按常規制作顆粒。本試驗主要對替米沙坦層處方進行優化，由于替米沙坦鈉鹽易溶解于水和具有較強的引濕性需采用干法制粒，這樣對填充的輔料就有了較高要求。我們先后采用了乳糖、山梨醇、微晶纖維素等分別作主要填充劑進行單因素篩選，結果經平行比較以山梨醇作填充劑片重差異較小，流動性最好，所以將山梨醇的用量作為考察因素A；在預試驗中黏合劑用量和添加方式對主藥溶出均存在影響，將聚維酮K30以固體粉末與主藥及其他輔料直接混合后干法制粒和在主藥堿化成鹽時將聚維酮K30同時溶解后噴霧干燥，經對兩種工藝比較發現后者主藥溶出效果更佳，故在確定工藝后將聚維酮K30用量作為考察因素B；片劑的硬度通常對主藥溶出也有一定影響，故將雙層片硬度大小作為考察因素C。綜合以上分析取3個水平(見表2)，采用L9(34)正交設計表安排試驗，以pH 7.5磷酸鹽緩沖液為介質作溶出曲線試驗并與原研片進行擬合，將相似因子(f2)作為考察指標。

表2 替米沙坦回收率試驗(n=12)

表3 正交設計試驗因素與水平

由表4可知，各因素對替米沙坦溶出行為影響程度大小為：B>C>A，較優處方工藝條件是A3B2C2。由表5可知，黏合劑聚維酮用量和片劑硬度對主藥溶出度有顯著影響。故綜合考慮確定本品替米沙坦層最優處方組成為：替米沙坦80 g、氫氧化鈉6 g、葡甲胺25 g、山梨醇360 g、聚維酮24 g，硬度約12 kg，共制成1 000片。

表4 正交設計試驗和結果

注：F0.05(2,2)=19.00

2.3 自制制劑和與進口制劑的體外溶出行為比較 根據《已有國家標準化學藥品研究技術指導原則》，需對自制樣品與進口產品在不同溶出介質中的溶出行為進行比較。參照《中國藥典》2010年版(二部)附錄C 第二法項下規定進行試驗，采用4種不同的溶出介質：蒸餾水、0.01 mol·L-1鹽酸溶液、pH 4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液和pH 7.5磷酸鹽緩沖液，溶出杯中加入900 mL介質，轉速為75 r·min-1，比較自制樣品與進口產品的體外溶出行為，分別于5、10、15、30、45、60 min時取樣經0.45 μm微孔濾膜過濾依法測定，以取樣時間為橫坐標，累積溶出度為縱坐標繪制體外溶出曲線(見圖2～5)。

圖2 自制片和市售制劑在水中的溶出曲線

圖3 自制片和市售片在0.01 mol·L-1鹽酸溶液中的溶出曲線

圖4 自制片和參比制劑在pH 4.0枸櫞酸磷酸二氫鈉緩沖液中的溶出曲線

圖5 自制片和參比制劑在pH 7.5緩沖液中的溶出曲線

將自制樣品與市售片中的替米沙坦在純水、0.01 mol·L-1鹽酸溶液、pH 4.0枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液和pH 7.5磷酸鹽緩沖液介質中的溶出數據采用相似因子法(f2)進行擬合，f2= 50×lg{[1+(1/n)Σt=1n(Rt-Tt)2]-0.5×100}，Rt和Tt分別代表自制樣品和市售片第t點的平均累積釋放度，n為測試點數。f2的變化范圍是0～100，當兩條釋放曲線間的f2值大于50時則可認為兩者相似。f2的數值越大，兩條釋放曲線的相似性越高[7]。

結果表明，除pH 4.0介質中的藥物溶出未能達到80%以上，其他介質中市售片與自制品溶出曲線相似因子均>50，兩者在統計學意義上具有一致性。

2.4 溶出模型的擬合 市售片與自制片氨氯地平層在4種介質中15 min內藥物釋放均超過90%，表明體外藥物釋放迅速且現象相似，沒有必要對其溶出行為進行比較。替米沙坦層在pH 4.0介質中的藥物溶出未能達到80%以上，因此不適采用相似因子法對其相似性進行評價。根據累積溶出度和時間數據，選用不同方程對自制制劑中的替米沙坦層溶出行為進行擬合,相關系數(r)越接近1擬合效果越好。由表6可知，在3種溶出介質中，替米沙坦層的溶出動力學特征以一級方程及Peppas方程擬合較好。根據Peppas方程可以判斷藥物釋放規律和藥物釋放機制，當n≤0.45時，藥物主要以Fick擴散機制釋放，當0.450.89時藥物主要以溶蝕方式釋放；因此可以判斷本品替米沙坦層藥物以擴散和溶蝕并存的方式釋放[8]。根據對累積溶出度相似因子擬合及體外溶出現象比較，表明自制片處方工藝合理且與市售片的體外釋藥行為一致。

表6 自制片與市售片替米沙坦在不同pH介質中的釋放比較(n=6)

表7 替米沙坦層在不同介質中溶出方程的擬合

3 討論

處方設計初期資料顯示由于替米沙坦水溶性差，影響了替米沙坦在體內的生物利用度，因此加入氫氧化鈉，使主藥和葡甲胺形成內絡鹽，改善其水溶性，提高體內生物利用度，減少不良反應。苯磺酸氨氯地平在堿性環境下酯鍵容易水解，如果直接將替米沙坦鈉鹽和氨氯地平混合后制粒壓片，有關物質明顯增加，處方穩定性差。因此將替米沙坦和氨氯地平壓制成上下雙層片，增加穩定性。

雙層片的制備工藝技術要求高，工藝復雜，壓片前需要二次制粒，填料時需要兩次連貫操作，先預壓再總壓，所以對預先填料的顆粒流動性要求非常高。在生產實踐中通常占比大的一項先填料預壓，所以本品中替米沙坦層顆粒的優劣會直接影響氨氯地平層顆粒填料的準確度，如果影響過大會直接導致片重差異不合格。在交替填料清潔時，因為多層壓片機性能的差異，使得預先填料的替米沙坦層顆粒可能清潔不充分，這樣不但會導致與氨氯地平層顆粒發生交叉污染，還會使顆粒物料損耗過大，影響產品得率。所以在對本品的預試驗中不僅要對替米沙坦層主要輔料進行篩選，而且對處方工藝和生產設備都要進行嚴格控制。

考慮本品外購鈉鹽原料會有一定的差異性，同時替米沙坦鈉鹽容易吸濕，使得濕法制粒過篩時異常困難。所以我們在自制鈉鹽時將黏合劑聚維酮K30與主藥一起溶解，不但有助于主藥溶出，而且增加了工藝的穩定性和可操作性。鈉鹽的吸濕性使得在顆粒制備過程中，對工藝及輔料要求比較高，經過單因素平行篩選，最終選用山梨醇與鈉鹽直接混合后進行干法制粒，制得顆粒可壓性強，不易吸濕，流動性良好。樣品經檢測片劑硬度、脆碎度及重量差異均符合《中國藥典》要求，外觀亦色澤均一，光潔美觀。為避免儲存和患者使用時樣品受環境濕度的影響，并考慮到在運輸過程中片劑間相互碰撞可能會導致雙層片裂片和交叉污染，我們采用了雙層鍍鋁膜袋單片密封保存的包裝。

替米沙坦的釋放快慢主要受填充劑、黏合劑以及硬度影響較大，我們采用正交設計試驗，將自制片和參比制劑在pH 7.5緩沖溶液中溶出度的相似因子(f2)作為主要考察指標，根據試驗結果得到了最優處方和工藝，方差分析亦表明黏合劑的用量和片劑硬度對片劑溶出有顯著影響。按照優選處方和工藝制得的樣品經在不同溶出介質與參比制劑進行溶出度比較，相似因子f2值均大于50。替米沙坦除在pH 4.0介質中外，其他介質中的溶出動力學特征以一級方程及Peppas方程擬合較好。不同介質中Peppas方程擬合的n均在0.45～0.89之間，因此判斷溶出行為以擴散和溶蝕兩種方式并存為主。根據對累積溶出度相似因子擬合及體外溶出現象比較，表明自制片替米沙坦溶出行為與原研藥基本一致，替米沙坦氨氯地平片處方合理，工藝可行。