血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原聯合檢測在深部真菌感染診斷中的價值

張增美，張文瑜 (天津市靜海區醫院重癥醫學科，天津 301600)

近年來，隨著化療、免疫抑制劑及HIV感染患者的增加，深部真菌感染病例呈現出明顯上升趨勢。同時ICU入住患者各種導管的體內介入和留置，和呼吸機氣管插管等的廣泛臨床應用也增加了患者深部真菌感染風險。深部真菌感染病死率較高，同時缺乏早期快速、可靠的診斷參考指標[1]。目前對于深部真菌感染仍然以體液標本或血液標本的鏡檢和培養作為診斷金標準，但該方法取材繁瑣且容易受到污染，培養周期長，診斷的敏感性較差。目前，有文獻報道血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原在深部真菌感染患者血清中呈現明顯升高[2]。因此，本研究探討血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原聯合檢測在深部真菌感染診斷中的價值。現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2015年2月～2020年6月我院送檢真菌培養的患者62例為研究對象，其中確診的深部真菌感染患者21例(病例組)，真菌培養陰性者41例(對照組)。病例組平均年齡(56.6±12.1)歲，男12例(57.1%)，女9例(42.9%)；對照組平均年齡(54.9±11.4)歲，男23例(56.1%)，女28例(43.9%)。兩組患者的臨床資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，有可比性。本次研究經過本院醫學倫理委員會同意。

1.2方法

1.2.1標本的采集：患者空腹取靜脈血2 ml，置入無菌抗凝采血管中，送實驗室待檢。

表1 兩組患者的臨床資料比較

1.2.2儀器與試劑:MB-80微生物動態快速檢測系統，冰浴槽，T01智能恒溫儀，GKT-5M Set 動態真菌檢測試劑盒，購自北京金山川科技發展公司；。

1.2.3血清1-3-β-D葡聚糖檢測[3]：所有操作按試劑盒步驟進行，第一，樣品的制備：將采集好的靜脈血2 ml 3 000 r/min離心5 min，取上層血清0.1 ml，加入0.9 ml的樣品處理液D中，振蕩10 s充分混勻，置于恒溫水浴箱中70℃孵育10 min，取出后立刻置入冰水浴中，待檢。第二，樣品檢測：取制備好的樣品0.2 ml加入到酶反應主試劑A中，充分溶解混勻并移至標準玻璃反應管中，并插入置MB-80微生物快速動態檢測系統中進行反應。1 h后儀器自動讀出待測血清中1-3-β-D葡聚糖濃度。第三步，結果判斷：根據試劑盒提供的對照血清中血清中1-3-β-D葡聚糖值<10 ng/L為正常值。

1.2.4血清降鈣素原檢測：PCT檢測采用雙抗體免疫夾心法，試劑盒由梅里埃生物公司提供。

2 結果

2.1血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原水平：病例組血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原分別為(27.33±9.41)pg/ml和(0.78±0.27)pg/ml，顯著高于對照組的(14.72±7.36)pg/ml和(0.36±0.21)pg/ml，差異有統計學意義 (P<0.05)。見表2。

表2 兩組血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原水平比較

2.1診斷敏感性和特異性:以血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原為參考指標診斷深部真菌感染的敏感性分別為82.93%和76.87%，特異性分別為76.87%和71.43%。

2.2ROC曲線評估診斷價值：GraphPad5.0統計軟件繪制ROC曲線并計算曲線下面積(AUC)，血清1-3-β-D葡聚糖和鈣素原診斷深部真菌感染的ROC曲線下面積分別為0.90和0.84。見圖1。

圖1 血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原診斷深部診斷的ROC曲線

3 討論

深部真菌感染(invasive fungal infection) 是指致病性真菌通過相關途徑侵犯皮下組織、黏膜和內臟，感染器官所引起的真菌感染性疾病。臨床感染流行病學資料顯示，深部真菌感染中以白色念珠菌為主，念珠菌屬占主要致病菌的80%以上，其中主要為白色念珠菌。但近年來的真菌感染調查研究顯示[4]，非白色念珠菌所致的深部真菌感染出現了明顯的上升趨勢，如熱帶念珠菌、光滑念珠菌等。同時，其他常見的致病菌還包括隱球菌、孢子絲菌、曲霉菌、副球孢子菌、毛霉菌等。

近些年來，隨著化療、免疫抑制劑及HIV感染患者的增加，深部真菌感染病例呈現出明顯上升趨勢。同時ICU入住患者各種導管的體內介入和留置，和呼吸機氣管插管等的廣泛臨床應用也增加了患者深部真菌感染風險。深部真菌感染病死率較高，同時缺乏早期快速、可靠的診斷參考指標[5]。既往大多通過鏡檢和體液標本包括痰液、血液及體液分泌物的培養進行診斷，上述診斷方法的特異性很高，可作為深部真菌感染的診斷金標準，但上述診斷方法敏感性不高，且標本取材的過程中容易受到污染，從而出現假陽性的情況。同時，真菌培養周期長，無法對患者做出迅速診斷，而深部真菌感染患者大多危重，如等待檢驗結果后進行抗真菌治療往往延誤了病情，增加了患者的死亡風險。而如果在真菌培養前應用抗真菌藥物，由于抗真菌藥物不良反應較大，對患者肝腎功能損傷較為嚴重，且抗真菌藥物大多十分昂貴。在深部真菌感染診斷不明確前用藥增加患者的醫療負擔的同時可能并不能使患者受益。因此，急需一種快速且敏感性和特異性均較高的診斷深部真菌感染的方法。

近年來出現了一些新的診斷技術包括影像學入高分辨CT(HRCT)，檢測真菌抗原和核酸等的非真菌培養診斷技術，如血清1-3-β-D葡聚糖檢測、血清半乳降鈣素原檢測等[6]。血清1-3-β-D葡聚糖檢測是通過檢測體液中真菌代謝物來間接判斷深部真菌感染。1-3-β-D葡聚糖是一種多糖，普遍存在于真菌的細胞壁中，其含量約占真菌細胞壁干重的50%左右，而且1-3-β-D葡聚糖在酵母樣真菌中含量最高，而其他病原微生物如病毒、細菌、支原體等細胞中不存在該成分，因此理論上檢測該成分可以對真菌感染進行診斷或鑒別診斷。降鈣素原(PCT)為降鈣素的前體，一般情況下在正常人群體內降鈣素原水平很低，而在感染患者血清中降鈣素水平明顯升高且和感染嚴重程度存在相關性。目前眾多研究均顯示[7-8]，嚴重細菌感染患者血液中降鈣素原水平明顯升高，且與患者的感染轉歸有關。當患者感染控制后血清降鈣素原水平開始下降。同時近年來也有文獻報道[8]，血清降鈣素原在深部真菌感染患者也明顯升高。

但關于血清1-3-β-D葡聚糖與降鈣素原聯合檢查用于診斷深部真菌感染的研究報道較少，其診斷效能有待進一步評估。因此，在本研究中，筆者采用病例-對照研究的方法，探討上述兩個指標聯合診斷深部真菌感染的價值。在本研究中，筆者發現深部真菌感染患者血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原分別為顯著高于對照組(P<0.05)；以血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原為參考指標診斷深部真菌感染的敏感性分別為82.93%和76.87%，特異性分別為76.87%和71.43%，診斷的ROC曲線下面積分別為0.90和0.84。因此，筆者認為血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原顯著升高，并可作為深部真菌感染的血清學標志物。

但本研究所有納入患者來自單一醫療單位，存在病例選擇偏倚；同時納入患者例數相對較少，統計效能較低。因此，應進一步加大樣本量進行多中心的聯合研究，明確血清1-3-β-D葡聚糖和降鈣素原檢查在深部真菌感染診斷中價值。