血清乳酸脫氫酶、鐵蛋白和血小板生成素在急性白血病與骨髓異常增生綜合征鑒別診斷中的應用

黃小華

（新余鋼鐵集團有限公司中心醫院檢驗科，江西 新余 338000）

急性白血病（Acute leukemia，AL）和骨髓異常增生綜合征（Myelodysplastic symdrome，MDS）是造血干細胞或祖細胞異常引起的血液系統惡性腫瘤，患者早期常缺乏特異性癥狀體征，容易發生漏診或誤診而延誤治療時機，因此積極探尋AL和MDS特異性血清標記物，提升早期診斷和鑒別水平對改善患者預后具有重要意義[1]。

研究顯示乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase，LDH）、鐵蛋白（Serum ferritin，SF）以及血小板生成素（Thrombopoietin，TPO）表達水平在惡性腫瘤或血液系統疾病中均存在明顯異常，但對AL和MDS鑒別診斷是否具有參考價值尚未見相關報道[2-4]。

本文通過分析血清LDH、SF及TPO表達水平對AL和MDS患者鑒別診斷價值，為促進AL和MDS診治水平不斷進步提供循證醫學證據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年9月至2018年9月我院AL患者71例和MDS患者52例進行橫斷面研究，其中AL組男女比42/29，年齡16～71歲，平均年齡45.83±8.92歲；MDS組男女比28/24例，年齡23～74歲，平均年齡46.71±9.47歲，兩組臨床基本資料比較差異無統計學意義（P>0.05）。

AL診斷標準：患者表現為急驟高熱，全身酸痛或進行性貧血等癥狀、體征；實驗室檢查顯示血象出現原始細胞或幼稚細胞，骨髓象顯示全部有核細胞中有核紅細胞占比<50%，且原始細胞占比≥20%[5]。

MDS診斷標準：患者表現為進行性貧血，可伴發熱或出血；實驗室檢查顯示1～2系或全血細胞減少，可見巨大紅細胞等病態造血現象，骨髓象顯示至少1系血細胞異常造血；同時排除其它病態造血相關病變[6]。

納入標準：符合AL與MDS相關診斷標準；經骨髓細胞形態及免疫分型等輔助檢查確診；患者及家屬知曉本研究并簽署同意書；患者臨床資料保存完整。

排除標準：合并嚴重感染或器質性疾病；合并其它惡性腫瘤；合并其它血小板減少性疾病。

1.2 方法

1.2.1 基本信息收集

患者入院后詳細詢問性別、年齡、病程和既往史等基本資料，同時完善體格檢查，測量身高、體征、心率和血壓等一般指標。

1.2.2 骨髓穿刺

囑患者取側臥位，選擇髂前上棘為穿刺部位，常規消毒鋪巾后以1%利多卡因（上海朝暉藥業有限公司，國藥準字H31021073）進行浸潤性麻醉后將穿刺針固定在適當長度，左手拇指和食指固定皮膚，右手持針垂直于骨面刺入，接觸骨質后采用左右旋轉的方法緩慢刺入，至產生突破感時吸取骨髓0.1～0.2 mL，抽出穿刺針并局部加壓包扎，觀察30 min無明顯不良反應時送回病房，將骨髓涂片、染色并于光學顯微鏡下，進行觀察和判斷。

1.2.3 血清LDH、SF檢測

取外周靜脈血3 mL，以3000 rpm離心10 min后取上清，采用羅氏Cobas c311全自動生化儀（德國羅氏公司）檢測LDH表達水平，試劑盒購自北京九強生物技術股份有限公司。

另將3 mL血液樣本以1500 rpm離心10 min后取上清，采用免疫比濁法檢測SF表達水平，所用儀器為羅氏Cobas c311全自動生化儀及配套試劑盒。

1.2.4 TPO測定

取外周靜脈血3 mL于EP管中，以1000 rpm室溫離心10 min，取上清-80℃保存備用。

檢測前根據試劑盒（美國RD公司）提供的稀釋標準圖表將原倍標準品稀釋5倍并設置樣品孔、標準孔和空白孔，向樣品孔加入待測血清10 μL+稀釋液40 μL，標準孔加入稀釋后的標準品50 μL，空白孔不添加任何試劑，覆膜后于37℃環境孵育30 min，采用洗滌液洗滌5次，每次30 s，然后向樣品孔和標準孔分別加入酶標試劑50 μL，37℃溫育30 min后采用洗滌液洗滌5次，每次30 s，拍干后樣品孔和標準孔分別加入顯色液A和B試劑各50 μL并于37℃環境避光孵育15 min，待反應完成并分別加入終止液于37℃環境孵育30 min，采用Multiskan FC酶標儀（上海賽默飛世爾儀器有限公司）測量各孔450 nm處吸光光度值（OD），根據標準曲線計算TPO濃度。

1.3 統計學方法

所有數據分析采用統計學軟件SPSS19.0，計量資料以均數±標準差（SSD）作表示，進行獨立樣本t檢驗；采用多因素Logistics回歸分析研究LDH、SF和TPO與AL和MDS的關系，作受試者工作特征（Rceiver operating characteristic，ROC）曲線并計算曲線下面積（Area under curve，AUC）分析血清LDH、SF和TPO單獨及聯合應用對AL和MDS鑒別診斷價值，以P<0.05為有顯著性差異。

2 結果

2.1 AL和MDS患者血清LDH、SF及TPO水平比較

AL組血清LDH及TPO水平均明顯高于MDS組，血清SF水平明顯低于MDS組（P<0.05），見表1。

表1 患者血清LDH、SF及TPO水平較（±SD）

表1 患者血清LDH、SF及TPO水平較（±SD）

注：與AL組相比，*P<0.05。

分組 n LDH（U·L-1） SF（ng·mL-1） TPO（pg·mL-1） AL組 71 647.32±231.49 713.54±209.86 976.35±354.28 MDS組 52 526.87±194.06* 1035.82±368.41* 481.27±162.43*

2.2 血清LDH、SF及TPO水平與AL和MDS的關系分析

以疾病分類為因變量（AL=1，MDS=0），納入LDH、SF和TPO進行多因素logistics回歸分析。

結果顯示血清LDH、SF和TPO水平與AL均存在密切聯系（P<0.05），相關參數見表2。

表2 血清LDH、SF及TPO水平與AL和MDS的關系分析

2.3 LDH、SF和TPO對AL和MDS鑒別診斷價值分析

ROC曲線分析顯示，LDH、SF及TPO對AL和MDS鑒別診斷AUC分別為0.684、0.814、0.922和0.963，Youden指數分別為0.308、0.530、0.777和0.877，且LDH、SF及TPO聯合進行鑒別診斷的AUC高于三項指標單獨診斷，見圖1。

圖1 LDH、SF及TPO單獨及聯合鑒別AL和MDS的ROC曲線

3 討論

LDH是參與無氧糖酵解和糖異生的酶系，由PI3K/Akt/TORC1信號通路調控，在AL及MDS等血液系統惡性腫瘤中可出現不同程度升高[2]。本研究結果顯示AL患者明顯高于MDS，且ROC曲線分析顯示LDH鑒別AL和MDS的AUC為0.684，提示LDH對兩種疾病鑒別診斷具有重要參考價值。SF是由去鐵蛋白和Fe3+組成的可溶性蛋白質復合物，當機體缺鐵時表達水平可明顯升高，對貧血性疾病的診斷具有重要意義[3]。 本研究中AL和MDS患者血清SF表達水平均高于正常人群（SF正常值參考范圍男性<322 ng?mL-1，女性<219 ng?mL-1）且二者之間存在明顯差異；ROC曲線分析結果顯示，SF用于AL和MDS鑒別診斷的AUC為0.814。

目前臨床對TPO表達的調控機制尚未完全明確，推測與血小板及巨核細胞（骨髓中一種從造血干細胞分化而來的細胞）膜表面TPO受體數量的負反饋調節有關，當血小板及巨核細胞減少時TPO表達水平可明顯升高，因此血清TPO在各種血小板減少性疾病中可出現不同程度表達異常[4]。

本研究結果顯示AL和MDS患者血清TPO水平明顯升高且AL明顯高于MDS患者，用于AL和MDS鑒別診斷的AUC達0.922。此外本研究采用血清LDH、SF和TPO水平進行聯合診斷顯示靈敏度為95.77%，特異度為92.31%，準確率為94.31%，Kappa值為0.883，較三項指標單獨鑒別時準確性均明顯提升，因此聯合應用血清LDH、SF和TPO可為準確鑒別AL和MDS提供參考，有利于減少骨髓穿刺等有創操作。

Structure, function and pharmacology of human itch GPCRs

Can Cao, et al.

The MRGPRX family of receptors (MRGPRX1-4) is a family of mas-related G-protein-coupled receptors that have evolved relatively recently1. Of these, MRGPRX2and MRGPRX4 are key physiological and pathological mediators of itch and related mast cell-mediated hypersensitivity reactions2-5. MRGPRX2 couples to both Giand Gqin mast cells6. Here we describe agoniststabilized structures of MRGPRX2 coupled to Gi1and Gqin ternary complexes with the endogenous peptide cortistatin-14 and with a synthetic agonist probe, respectively, and the development of potent antagonist probes for MRGPRX2. We also describe a specific MRGPRX4 agonist and the structure of this agonist in a complex with MRGPRX4 and Gq. Together, these findings should accelerate the structure-guided discovery of therapeutic agents for pain, itch and mast cell-mediated hypersensitivity.

Nature. 2021 Nov 17. doi: 10.1038/s41586-021-04126-6.