羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞生長性能、器官指數、腸道形態及盲腸內容物菌群的影響

魏秀蓮，劉 瀅，劉雪連*，婁迎霞 ，張 樂，尹靖東

（1.北京市飼料監察所，北京 100107；2.北京大北農科技集團股份有限公司飼用微生物工程國家重點實驗室，北京 100192；3.中國農業大學動物科學技術學院，北京 100193）

飼料中禁用促生長類抗生素給養殖業帶來了前所未有的挑戰，益生菌作為一類安全、綠色的促生長類抗生素替代品具有廣闊的應用前景。國內外多項研究表明，羅伊氏乳桿菌作為益生菌制劑添加于動物飼料中具有抑制胃腸道病原菌繁殖、改善動物免疫力、減少動物發病率、提高飼料轉化率、促進動物生長、降低耗料增重比等有益效果[1-6]。育雛期是蛋雞生產周期中至關重要的時期，雛雞的生長發育直接影響其后續生產性能的發揮。雛雞具有生長迅速、代謝旺盛、消化系統發育不健全、消化能力弱和抵抗力差等生理特點，改善蛋雛雞體質對于蛋雞生產具有重要意義[7]。我國農業農村部已把羅伊氏乳桿菌列入了《飼料添加劑品種目錄》。在羅伊氏乳桿菌產品生產過程中，通常會將發酵液進行離心，留下菌體制成凍干粉，上清液做排污處理，造成資源浪費和環保壓力。羅伊氏乳桿菌在蛋雛雞上的應用研究報道較少。本試驗旨在研究添加不同羅伊氏乳桿菌發酵物對蛋雛雞生長性能、器官指數及腸道形態的影響，以期為羅伊氏乳桿菌在蛋雛雞生產上的應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器 主要試劑：羅伊氏乳桿菌DBNJP 分離自健康仔豬糞便，保藏于大北農集團飼用微生物工程國家重點實驗室；羅伊氏乳桿菌凍干粉：由羅伊氏乳桿菌DBN-JP 菌泥凍干制成（含羅伊氏乳桿菌活菌5.0×1010CFU/kg）；羅伊氏乳桿菌發酵液：由羅伊氏乳桿菌DBN-JP 菌在MRS 培養基中37℃，發酵48 h 制成（含羅伊氏乳桿菌活菌5.0×1010CFU/L）；羅伊氏乳桿菌上清液：由羅伊氏乳桿菌DBN-JP 菌在MRS 培養基中37℃，發酵48 h 后，10 000 r/min 離心10 min 后，所得上清液經121℃，滅菌15 min 制成；上述制劑均由北京大北農科技集團股份有限公司飼用微生物工程國家重點實驗室提供。試驗用海蘭褐蛋雛雞由唐山玉田大北農提供。試驗用基礎飼糧由北京大北農科技集團股份有限公司提供。

主要儀器：酶標儀（Epoch，Thermo）；實時熒光定量PCR 儀（QuantStudio，賽默飛）。

1.2 試驗設計 試驗地點在北京海華恒盛養殖場進行，試驗雞舍及配備的蛋雛雞養殖設備均由該養殖場提供。試驗選取體重（36.17±0.14）g 的1 日齡海蘭褐蛋雛雞1 200 只，隨機分為4 組，每組6 個重復，每個重復50 只。其中，凍干粉組為：基礎飼料+羅伊氏乳桿菌凍干粉1 kg/t；發酵液組為：基礎飼料+羅伊氏乳桿菌發酵液1 L/t；上清液組為：基礎飼料+羅伊氏乳桿菌上清液1 L/t；對照組：僅飼喂基礎飼料；采用3 層籠養的方式，預試期3 d，正試期39 d?；A飼糧參照NRC（1994），并結合《雞飼養標準》（NY/T 332004）配制，基礎飼糧組成及營養成分見表1。試驗期間自由采食，飲水充足，日常雞舍管理方案和相關免疫程序依照雞場育雛場規范實行。

表1 基礎飼料組成及營養成分（風干基礎）

1.3 檢測指標與方法

1.3.1 生長性能 試驗期間每天準確記錄死淘只數和腹瀉只數；于蛋雛雞日齡8、15、22、29、36、43 日齡08:00 空腹稱重。稱重前一天20:00 斷料，飲水自由，以各重復為單位統計體重、耗料量、脛長，計算體重均勻度、平均日采食量、脛長均勻度、死淘率。

體重均勻度=[平均體重×（1±10%）的樣本數量/總抽測樣本數量]×100%

平均日采食量=試驗期總采食量/試驗期

平均日增重=（末重-初重）/天數

耗料增重比=平均日采食量/平均日增重

脛長均勻度=[ 平均脛長×（1±5%）的樣本數量/總抽測樣本數量]×100%

死淘率=死亡只數/總只數×100%

1.3.2 器官指數 于蛋雛雞43 日齡，每個重復挑選4 只接近平均體重的蛋雛雞進行屠宰，屠宰前一天20:00 斷料，飲水自由。屠宰后，完整摘取試驗雞的內臟器官稱重，計算蛋雛雞器官指數。

器官指數=器官鮮重/活體重×100%

1.3.3 腸道形態 于蛋雛雞43 日齡，每個重復挑選10只接近平均體重的蛋雛雞進行屠宰，屠宰前一天20:00斷料，飲水自由。分離十二指腸、空腸和回腸，分別取中段1.5～2 cm；用生理鹽水沖洗干凈后置于10%福爾馬林溶液中固定、密封，在4℃冰箱放置24 h，制作石蠟切片，H.E.染色，用光學顯微鏡及圖像處理系統測定腸道絨毛高度和隱窩深度，計算絨毛高度和隱窩深度比值（絨隱比）。

1.3.4 盲腸內容物菌群 將含有大腸桿菌、乳酸桿菌和沙門氏菌目的片段的質粒作為標準質粒分別建立各菌群的標準曲線，采用實時熒光定量方法對所有樣本拷貝數進行測定，通過標準曲線計算不同微生物的數量。

1.4 統計分析 采用IBM SPASS Statistics 24 統計軟件進行單因素方差分析（One-Way ANOVA），運用Duncan's 法進行多重比較，結果用平均值±標準誤差表示，以P＜0.05 判斷差異顯著性。

2 結果

2.1 羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞生長性能的影響 由表2 可知，與對照組相比，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液可以降低1～7 日齡以及29～35 日齡的蛋雛雞死淘率，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉和發酵液可顯著降低36～42 日齡蛋雛雞的死淘率；飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液可顯著提高15～21、29～35、1～42 日齡蛋雛雞的平均日增重；飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液可顯著降低1～42 日齡蛋雛雞的耗料增重比。

表2 羅伊氏乳桿菌對1～42 日齡蛋雛雞生長性能的影響

2.2 羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞器官指數的影響 由表3 可知，與對照組相比，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液可顯著提高腺胃指數；飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉可顯著提高盲腸指數，其他器官指數無顯著變化。

表3 羅伊氏乳桿菌對1～42 日齡蛋雛雞器官指數的影響 %

2.3 羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞腸道形態的影響 由表4 可知，與對照組相比，飼糧中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液對十二指腸、空腸絨毛高度和絨隱比沒有顯著影響。

表4 羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞小腸形態的影響

2.4 羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞盲腸內容物菌群的影響 由表5 可知，與對照組相比，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、上清液、發酵液盲腸內容物中的大腸桿菌數量顯著降低；添加羅伊氏乳桿菌發酵液和上清液，盲腸內容物中的沙門氏菌數量顯著降低，添加羅伊氏乳桿菌凍干粉對沙門氏菌數量影響不顯著；飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液，盲腸內容物中乳桿菌數量顯著提高，添加上清液對盲腸內容物中乳酸桿菌數量影響不顯著。

表5 羅伊氏乳桿菌對蛋雛雞盲腸內容物菌群的影響 Lg（CFU/g）

3 討 論

3.1 羅伊氏乳桿菌對雛雞生長性能的影響 羅伊氏乳桿菌是一種專性異型發酵菌株，對動物胃腸道酸堿環境具有較好的適應能力。羅伊氏乳桿菌具有多種生物學功能，尤其在動物營養調節和促進機體生長發育方面發揮重要作用[8-9]。羅伊氏乳桿菌可產生多種酶、氨基酸和維生素等對動物有益的物質，能夠促進畜禽對營養物質的消化吸收，改善動物生長性能[10-11]。本研究發現，與對照組相比，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉可顯著提高15～21、29～35 日齡蛋雛雞的平均日增重，且可顯著提高1～42 日齡的平均日增重，降低料重比，降低蛋雛雞1～7、29～42 日齡的死淘率，這與邵洪偉等[12]、何穎等[13]、王晶等[14]、李文立等[15]、袁華根[16]的研究結果相似，說明在飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉具有提高蛋雛雞生長性能的作用。本研究還發現，與凍干粉組相比，發酵液組和上清液組對相同時期蛋雛雞的平均日增重、料重比、死淘率的影響差異不顯著，這說明在蛋雛雞飼糧中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、上清液、發酵液均具有提高蛋雛雞平均日增重，降低耗料增重比和死淘率的作用。在實際生產中，常將羅伊氏乳桿菌發酵上清液作為廢棄物排污，根據本研究結果，可探討是否可將羅伊氏乳桿菌發酵上清液作為提高蛋雛雞生長性能的產品進行開發，合理利用資源，避免資源浪費及環境污染。

體重均勻度和脛長均勻度是蛋雞育雛期的重要指標，根據海蘭褐商品蛋雞飼養標準，42 日齡體重均勻度、脛長均勻度達標率對后期蛋雞的產蛋性能有重要影響[17]。本研究發現，與對照組相比，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液對1～42 日齡蛋雛雞的體重均勻度和脛長影響不顯著。

3.2 羅伊氏乳桿菌對雛雞器官指數的影響 蛋雛雞1～42日齡是內臟器官發育的重要時期[18]，本研究結果表明，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉可以顯著提高蛋雛雞腺胃指數和盲腸指數，對其他器官指數如法氏囊指數、脾臟指數等影響不明顯；本研究結果還表明，僅凍干粉組顯示盲腸指數顯著提高，添加發酵液組的盲腸指數凍干粉組和對照組相比變化不顯著，添加上清液組與對照組相比變化不顯著。盲腸是微生物的主要活動場所，凍干粉組和發酵液組中更高的活菌數可能對盲腸指數提高起到重要作用；而凍干粉組比發酵液組盲腸器官指數更高，可能與凍干粉組的凍干保護劑對菌體具有保護作用，到達盲腸的活菌數更高而引起的；但因乳酸菌對器官指數影響的報道不多，具體原因還需更進一步探討。

3.3 羅伊氏乳桿菌對雛雞腸道形態的影響 益生菌可通過促進腸道發育，維護腸黏膜形態健康來提高蛋雛雞的生長性能[19]，小腸是家禽消化、吸收食物營養的主要場所，腸道結構的完整性關系到動物生長速度，小腸的腸絨毛高度、隱窩深度及其比值是衡量腸道發育的重要指標[20-22]。Yihb 等[23]、Olsonjk 等[24]研究表明，給新生仔豬灌服羅伊氏乳桿菌具有促進腸絨毛發育的作用。本研究結果表明，與對照組相比，在1～42 日齡蛋雛雞飼糧中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、發酵液、上清液對十二指腸、空腸絨毛高度、隱窩深度和絨隱比均沒有顯著影響，這可能與動物品種和菌株差異性有關。

3.4 羅伊氏乳桿菌對盲腸內容物菌群的影響 益生菌進入消化道后，具有維持腸道菌群平衡，促進有益菌生長的有益效果[25]。乳酸桿菌作為畜禽腸道主要的有益菌群，具有改善腸道功能，提高飼料消化率和生物效價作用，同時可以抑制腸道致病菌生長，提高機體免疫力[26-27]。本研究結果表明，與對照組相比，飼料中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉具有降低盲腸內容物中大腸桿菌、沙門氏菌數量，提高乳桿菌數量的有益效果，這與張亞蘭等[28]、張雷等[29]的研究結果類似，說明飼料中添加羅伊氏乳桿菌可通過調節腸道菌群來改善家禽的生產性能。本研究還發現，在飼料中添加羅伊氏乳桿菌發酵液和上清液也具有降低雛雞盲腸內容物中大腸桿菌和沙門氏菌的作用，且與凍干粉組差異不顯著，這說明在抑制病原菌方面，羅伊氏乳桿菌發酵液、上清液具有類似效果。但相比于對照組，凍干粉組對盲腸內容物中乳酸桿菌數量的影響更顯著，發酵液組次之，上清液乳酸桿菌數量也有上升趨勢，但差異不顯著，這可能與凍干粉和發酵液中羅伊氏乳桿菌活菌數更高有關。

4 結 論

本試驗結果證明，在飼糧中添加羅伊氏乳桿菌凍干粉、上清液或發酵液具有提高蛋雛雞生產性能、降低死淘率、促進雛雞腺胃、盲腸器官發育、調節盲腸內容物腸道菌群的有益效果，綜合比較，凍干粉組效果最好。