復合微生態制劑對高日齡蛋雞生產性能及糞便中微生物的影響

郝小靜，白光燁，劉開東，馮永勝

（青島市畜牧工作站，山東青島 266041）

目前我國蛋雞存欄量和雞蛋產量已穩居世界第一[1]。隨著農業機械化和現代化的推進，蛋雞養殖密度增大，引發產蛋率下降、料蛋比上升、淘汰日齡提前等問題[2]，尤其到產蛋后期時，蛋雞生理機能出現退化，生產性能下滑[3]，抗病力下降，使得其產蛋性能無法得到有效發揮[4]，主要原因是其腸道健康障礙[5]。對于蛋雞而言，腸道是預防疾病感染的重要基礎[6]，其中腸道菌群是腸道重要的組成部分，與宿主的免疫功能有著密切聯系[7-8]，腸道菌群失衡導致的蛋雞發病越來越嚴重[9]。相關研究表明，益生菌定植于腸道中可優化腸道微生態平衡，形成生物學屏障[10]，提高動物機體免疫力[11]。孫浩政等[12]通過在蛋雞飲水中添加植物乳桿菌可顯著提高平均蛋重，降低死淘率。Mountzouris 等[13]研究發現，日糧添加屎腸球菌飼喂蛋雞可顯著增加蛋雞的產蛋量和蛋殼質量，提高營養物質的駐留時間，改善蛋雞營養物質消化率，并減少糞便中大腸桿菌的數量。植物乳桿菌具有提高畜禽生產性能和抗病力的功能，其代謝產物（如有機酸等）具有抑菌能力，維持腸道健康[14]。屎腸球菌可定植腸道，可競爭性地抑制致病菌的繁殖，刺激畜禽腸道，提高黏膜免疫力[15]。蛋雞的產蛋期可分為產蛋前期、產蛋高峰期、產蛋后期，產蛋后期約占整個產蛋期的一半，產蛋后期的生產性能深刻影響著蛋雞養殖的經濟效益[16]。目前，微生態制劑畜禽養殖中研究較多，但對于高日齡蛋雞生產性能的影響報道較少。本試驗以500日齡海蘭蛋雞為研究對象，旨在研究復合微生物制劑對高日齡蛋雞的生產性能及糞便中微生物的影響，為復合微生物制劑在蛋雞產蛋后期的應用提供依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 復合微生態制劑由青島百奧安泰生物科技有限公司提供，其有效益生菌主要包括植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）和屎腸球菌（Enterococcus faecium），活菌數≥109CFU/mL。

1.2 復合微生態制劑中益生菌分離、鑒定 采用平板稀釋涂布法對樣品菌液中L.plantarum和E.faecium進行分離培養。用無菌水將樣品菌液進行稀釋，涂布于MRS 平板，37℃條件下培養48 h。挑取平板上的單菌落，送上海派森諾生物科技有限公司進行16S rDNA 序列測定，使用MEGA7.0 軟件進行系統發育樹構建，確定平板上單菌落的種屬特征。

1.3 復合微生態制劑中益生菌理化指標檢測 在含有2%CaCO2的MRS 培養基上，接種分離得到的L.plantarum和E.faecium，37℃培養24 h，觀察2 株微生物產生溶鈣圈的大小。參考《食品pH 值的測定》（GB 5009.237-2016）規定的方法，使用校準后的pH 計檢測樣品菌液的pH。

1.4 復合微生態制劑中益生菌抑菌能力鑒定 以大腸桿菌（Escherichia coli）為指示菌，采用over-lay 法[17]，將含有大腸桿菌的軟瓊脂（0.8%）傾覆于點種L.plantarum和E.faecium的MRS 平板上，37℃培養24 h，觀察2株微生物產生抑菌圈的大小。

1.5 試驗動物及日糧組成 試驗在青島山美生態農業有限公司開展。選取500 日齡、體重2.3 kg 左右、健康的海蘭蛋雞1 000 羽，分為2 組，每組10 個重復，每個重復50 羽。對照組飼喂基礎日糧，試驗組在基礎日糧的基礎上添加復合微生態制劑（4 mL/kg）。基礎日糧配方和營養成分見表1。每天喂料3 次，自由采食和飲水。其他飼養管理按照蛋雞場常規流程進行。預試期7 d，正試期53 d。

表1 日糧配方和營養成分（風干基礎）

1.6 生產性能測定 試驗期間每天以重復為單位記錄產蛋重量、產蛋個數、平均蛋重、每羽日均采食量、平均日產蛋量，每周按重復計算產蛋率、破蛋率、臟蛋率、畸形蛋率，試驗結束時計算總產蛋量、料蛋比、死淘率。

平均日產蛋量（g）=總產蛋量（g）/飼養天數

料蛋比=總耗料量（kg）/總產蛋量（kg）

產蛋率=總產蛋數/（飼養天數×總雞數）×100%

每羽日均采食量（g）=（上料量-剩料量）/總雞數

1.7 糞便中的微生物含量 采集菌液使用后的蛋雞新鮮糞便裝入封口袋，放入冰盒中。使用生理鹽水進行倍比稀釋，用平板稀釋涂布法計數樣品菌液中乳酸菌（Lactic Acid Bacteria，LAB）、E.coli和沙門氏菌（Salmonella）的活菌數，以未使用樣品菌液的蛋雞糞便作為對照。其中，LAB 采用MRS 平板涂布，37 ℃培養48 h，進行菌落計數。E.coli采用伊紅美藍瓊脂培養基進行涂布，Salmonella采用亞硫酸鉍瓊脂培養基進行涂布，37℃培養24 h，進行菌落計數。

1.6 統計分析 試驗數據采用Excel 工作表進行數據統計，采用SPSS 21.0 統計軟件進行獨立樣本t檢驗，試驗結果以平均值±標準差表示。P＜0.05 表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 復合微生態制劑中益生菌的分離、鑒定 對復合微生態制劑中益生菌進行測序并構建進化樹，初步確定樣品菌液中的2 株菌分別為L.plantarum（圖1 A）和E.faecium（圖1 B）。

圖1 樣品菌液中菌落的系統發育樹構建

2.2 復合微生態制劑中益生菌理化指標檢測 經檢測，樣品菌液pH 為3.9。如圖2 結果顯示，L.plantarum產生了較明顯的溶鈣圈，而E.faecium產生的溶鈣圈極不明顯，表明發酵液中的有機酸主要由L.plantarum產生。

圖2 L.plantarum 菌落的溶鈣圈驗結果

2.3 復合微生態制劑中益生菌抑菌能力鑒定 如圖3 顯示，E.faecium對E.coli可產生明顯的抑菌圈，而L.plantarum對E.coli的抑制活性不明顯。結果表明樣品菌液對E.coli的抑制作用主要由E.faecium產生。

圖3 E.faecium 菌落的抑菌結果

2.4 復合微生態制劑對動物生產性能的影響 如表2 顯示，試驗組平均日產蛋量、產蛋率在72～75 和76～79周齡較對照組均有提高（P＜0.01）；試驗組每羽日均采食量與對照組無顯著差異；兩組破蛋率、臟蛋率、畸形蛋率、平均蛋重差異不大；對照組料蛋比為2.17，試驗組料蛋比為2.09，試驗組相比于對照組下降0.08，試驗組死淘率較對照組降低0.2%。試驗組60 d 的總產蛋量較對照組提高了68.24 kg。結果表明，日糧中添加復合微生態制劑可以顯著提高高日齡海蘭蛋雞的產蛋量和產蛋率，降低料蛋比。

表2 復合微生態制劑對蛋雞產蛋后期生產性能的影響

2.3 復合微生態制劑對蛋雞糞便中微生物的影響 如表3顯示，試驗組蛋雞糞便中的LAB 達到2.5×106CFU/g，比對照組提高了6 倍，而E.coli較對照組降低了90.3%，在2 組樣品中均未檢出Salmonella。

表3 樣品菌液使用前后蛋雞糞便中微生物數量變化 lg CFU/g

3 討 論

產蛋后期在整個產蛋周期中占比較高，因此提高蛋雞產蛋后期的生產性能具有重要的經濟價值。研究表明，隨著海蘭蛋雞產蛋時間延長，所產蛋的蛋重會逐漸增大[18～19]。蛋形指數從27～67 周齡呈顯著或極顯著增大[20]。現代商品雞在72 周齡進入淘汰期[21]。本批次蛋雞在產蛋高峰期時的平均蛋重可達56 g，產蛋率為94%，每羽雞平均日產蛋52.64 g，試驗階段（產蛋后期）平均蛋重可達63 g，試驗組飼喂添加復合微生態制劑的日糧，產蛋率上升至83.15%，每羽雞平均日產蛋可達52.38 g，該產蛋水平與高峰期蛋雞產蛋水平相持平。

高日齡蛋雞的抗病能力下降，應激敏感度增強，容易受到病原微生物的侵害進而影響生產。E.coli是蛋雞體內的一種條件致病菌，目前因高密度集約化養殖增加了雞群的發病率，同時抗生素的長期使用導致大腸桿菌耐藥日益嚴重，給我國蛋雞養殖帶來了巨大經濟損失[22]。植物乳桿菌作為動物腸道內常見益生菌[23]，通過定植于腸道進行生態占位，排斥病原菌，從而保護腸道健康[24]，其代謝產物如有機酸、細菌素等具有抑菌能力，添加至飼料中可改善畜禽生產性能[25]。屎腸球菌屬于乳酸菌中的腸球菌，定植于畜禽腸道后能競爭和抑制不耐酸致病菌的繁殖，同時參與調節動物機體的非特異性免疫，提高動物免疫力[26]。本試驗從復合微生態制劑中分離得到2 株益生菌，L.plantarum在產酸能力中表現突出，而E.faecium在抑制E.coli方面表現突出，兩者的聯合使用可能產生雙重的益生效果。復合微生態制劑飼喂雞群后，2 種益生菌可定植于雞腸道中，產生多種營養物質（如維生素、氨基酸等），既能豐富日糧的營養結構，也能提高飼料利用率[27]，同時可抑制有害菌與腸上皮細胞的黏附，阻斷病原菌的受體位置[28]，參與調控腸道黏膜免疫，其代謝產物可以降低腸道pH，拮抗病原菌生長[29]，減少疾病發生，進而提高雞群的生產性能。楊亞晉等[30]研究發現，日糧中添加植物乳桿菌后，其代謝產物能抑制大腸桿菌，減少腸道內大腸桿菌含量，從而有效恢復攻毒大腸桿菌蛋雞的產蛋率。王婷婷等[31]研究發現，屎腸球菌對腸道中致病性大腸桿菌K88、K99、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌及沙門氏菌均具有抑制作用，其中大腸桿菌K99 活性最低，說明屎腸球菌對其有較好的抑制效果。褚素喬等[32]研究發現，蛋雞飼料中添加益生菌微生態制劑可顯著提高蛋雞產蛋率和蛋雞抗病力，提升蛋品質，降低料蛋比。本試驗結果也表明，在日糧中添加復合微生態制劑飼喂高日齡蛋雞，可以提高蛋雞生產性能，提高腸道內益生菌含量，降低有害菌含量。

4 結 論

本研究結果表明，日糧添加復合微生態制劑（4 mL/kg）飼喂500 日齡海蘭蛋雞，可顯著提高平均日產蛋量和產蛋率，降低料蛋比，提高糞便中植物乳桿菌的含量，降低糞便中大腸桿菌含量，減少死淘，充分發揮高日齡蛋雞生產性能，延長蛋雞淘汰日齡。