SLC7A11蛋白在肝內膽管細胞癌組織中的表達及臨床意義

王建國 陶耀業 陳成 徐驍*

肝內膽管細胞癌的發病率逐年上升，侵襲性與耐藥性均較強，復發率較高。目前，手術切除是肝內膽管細胞癌的主要治療方式［1］，化療、局部治療的療效仍不夠理想［2］。近年來，肝內膽管細胞癌發生、發展過程中的關鍵生物標志物為其臨床診療開辟了更為有效的研究靶點［3］。研究表明，溶質載體家族7 成員11（Recombinant Solute Carrier Family 7，Member 11，SLC7A11）蛋白在膠質瘤、胰腺癌等多種惡性腫瘤中過表達與腫瘤的發生、發展及預后密切相關［4-6］。SLC7A11和SLC3A2 共同組成胱氨酸轉運蛋白系統 Xc-，轉運細胞外的胱氨酸至細胞內，并將其轉化為半胱氨酸，促進谷胱甘肽的合成，在應激條件下促使細胞維持氧化還原平衡，抑制脂質過氧化誘導的鐵死亡［7-8］。鐵死亡作為一種新的細胞死亡機制，已成為腫瘤領域的研究熱點，但鐵死亡在膽管癌中的作用尚不明確。本研究采用免疫組化法檢測SLC7A11 蛋白在肝內膽管細胞癌組織中的表達情況，并分析其表達與臨床病理特征及預后的相關性，初步探索SLC7A11 蛋白與膽管癌發生發展的關系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2013 年1 月至2019 年6 月浙江大學

醫學院附屬第一醫院的膽管癌手術切除標本113 例，所有標本均獲得病理明確診斷。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 腫瘤組織標本離體后采用10%中性甲醛溶液固定，常規脫水、石蠟包埋保存。制作4 μm 厚的石蠟切片，之后進行烤片、二甲苯脫蠟，梯度乙醇溶液脫水。0.1 mmol/L 枸櫞酸鹽緩沖液高壓抗原修復，山羊血清封閉30 min，一抗4 ℃冰箱過夜，二抗孵育30 min，顯微鏡下觀察，采用DAB 顯色，中性樹膠封片。使用已知陽性片作為陽性對照，陰性對照采用PBS 溶液。

1.3 結果判定 SLC7A11 均以細胞內出現淡黃色至棕褐色為陽性信號。每個組織標本在高倍鏡下隨機選取5個視野，根據陽性細胞比例和染色強度計算分值。陽性細胞數（%），≤10%為1 分，＞10%～50%為2 分，＞50%～80%為3 分，＞80%為4 分。染色程度評分，陰性為0 分，淡黃色為1 分，棕黃色為2 分，棕褐色為3分。上述兩項評分的乘積為最終評分，分值＜6 分為低表達，≥6 分為高表達。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0 統計軟件。計數資料以n表示，組間比較采用χ2檢驗；預后分析應用Kaplan-Meier 生存曲線。以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 肝內膽管細胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達情況 見圖1。

圖1 SLC7A11蛋白 在肝內膽管細胞癌組織中表達陰性及陽性的免疫組化染色（×20）

2.2 SLC7A11 蛋白表達與肝內膽管細胞癌臨床病理特征的關系 SLC7A11 蛋白的表達與性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤數目、分化程度、CA-199、CEA 等均不相關（P＞0.05），與淋巴結轉移有關（P＜0.05）。見表1。

表1 膽管癌組織中SLC7A11蛋白表達與臨床病理特征的關系

2.3 SLC7A11 蛋白表達與膽管癌患者預后的相關性 SLC7A11 蛋白低表達組與高表達組無瘤生存期比較，差異有統計學意義（P=0.004），SLC7A11 蛋白低表達組和高表達組肝內膽管細胞癌患者的總體生存時間比較，差異有統計學意義（P=0.034）。見圖2。

圖2 SLC7A11蛋白低表達與高表達的生存分析

3 討論

膽管癌在臨床上缺乏有效治療策略且極易產生耐藥，是一種具有高致死率的惡性腫瘤［9］。近年來，鐵死亡研究為膽管癌的治療提供了新思路。鐵死亡是一種具有鐵離子依賴性的細胞氧化性死亡，而谷胱甘肽是細胞內最重要的抗氧化劑，可抑制鐵死亡發生［10］。SLC7A11 蛋白介導的胱氨酸攝取，是細胞內谷胱甘肽合成的重要途徑，腫瘤細胞中SLC7A11 蛋白高表達可抑制活性氧誘導的鐵死亡，而下調SLC7A11 蛋白的表達會減弱細胞的抗氧化能力，提高細胞對鐵死亡的敏感性［11-12］。SLC7A11 可通過調控鐵死亡促進腫瘤發展［13］，通過調節β-catenin 通路，減弱腫瘤細胞與細胞外基質的黏附，進而促進食管癌細胞轉移［14］。SLC7A11 高表達可激活PI3K/Akt 通路，進而促進胰腺癌細胞的遷移侵襲能力［15］。由此可見，SLC7A11 蛋白的表達水平與腫瘤轉移密切相關。本研究發現，肝內膽管細胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達與腫瘤淋巴結轉移有關，說明 SLC7A11 在肝內膽管細胞癌的轉移過程中發揮重要作用。

治療抵抗是膽管癌總體生存率低的重要因素。研究證實，SLC7A11 能夠促進癌細胞的治療抵抗。YANG等［16］研究報道，SLC7A11 的過表達可增強胰腺癌細胞對順鉑、吉西他濱等化療藥物的耐藥性，而靶向SLC7A11 的鐵死亡誘導劑erastin 可以逆轉ABCB1 介導的卵巢癌多西紫杉醇耐藥［17］。本研究肝內膽管細胞癌標本中SLC7A11 蛋白低表達組的總體生存時間和無瘤生存期均顯著高于高表達組，表明肝內膽管細胞癌中的SLC7A11 蛋白可能介導了肝內膽管細胞癌的化療耐藥。另外，還發現SLC7A11 在肝內膽管癌組織中的表達與患者不良預后密切相關，說明SLC7A11 介導的鐵死亡可能是膽管癌進展的關鍵分子。

綜上所述，肝內膽管細胞癌組織中SLC7A11 蛋白的表達與淋巴結轉移及患者預后密切相關，提示SLC7A11 異常表達可能在肝內膽管細胞癌的侵襲、轉移、化療耐藥過程中起著關鍵作用，有望為膽管癌治療提供新的靶點。