糙枝金絲桃間苯三酚類成分的研究

徐 雯，許 芳，高 萬，李曉秀，徐 芳，趙 軍，吉騰飛*，劉 波*

1新疆維吾爾自治區第三人民醫院，烏魯木齊 830011；2中國醫學科學院 北京協和醫學院藥物研究所天然藥物活性物質與功能國家重點實驗室，北京 100050；3沈陽醫學院藥學院，沈陽 110034；4新疆藥物研究所維吾爾藥重點實驗室，烏魯木齊830004

藤黃科(Guttiferae)金絲桃屬(Hypericum)植物在全國各地均有分布，尤以華東、華西、川北、貴州、新疆等地分布較為集中。全世界約有400余種，我國有55種8個亞種。該屬植物在民間有2 400余年的用藥歷史，主要有清熱解毒、散瘀止痛、祛風濕等功效[1]。金絲桃屬植物中主要含有萘駢二蒽酮類、黃酮類、口山酮類和間苯三酚類成分，其中間苯三酚類成分因其新穎的化學結構和多樣的藥理活性而倍受關注[2，3]。

糙枝金絲桃(Hypericumscabrum)為金絲桃屬多年生草本植物，為我國新疆特有種，且僅分布在天山、阿爾泰山、塔爾巴哈臺山前山至中山地區[4]。為了進一步明確其藥效物質基礎，同時也為尋找結構新穎并具有較好藥理活性的先導化合物，本文對糙枝金絲桃地上部分乙醇提取物的石油醚萃取部位的化學成分進行了分離純化和結構鑒定，并測試了各化合物對谷氨酸誘導的神經元損傷的保護活性。

1 材料與方法

1.1 材料

糙枝金絲桃于2013年7月采自新疆維吾爾自治區阿爾泰地區，并由新疆師范大學生命科學與化學學院李進教授鑒定為藤黃科金絲桃屬植物糙枝金絲桃Hypericumscabrum，標本現存于中國醫學科學院藥物研究所植物標本室，標本號為No.ID-S-2545。

1.2 儀器與試劑

Thermo Nicolet 5700型傅立葉變換紅外光譜儀(美國熱電公司)；Mercury-400、Inova-500和SYS-600核磁共振儀(美國Varian公司)；Agilent 1100 Series LC-MSD-Trap-SL型質譜儀(美國Agilent公司)；柱層析硅膠(200～300目和硅膠H)及薄層層析用硅膠GF254(青島海洋化工廠)；MCI CHP20/P120(日本三菱公司)；葡聚糖凝膠Sephadex LH-20(瑞典Amersham Pharmacia公司)；Agilent 1260型高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，Rp C18色譜柱(分析型：4.6 mm×250 mm，5 μm；制備型：10 mm×250 mm，10 μm，日本YMC公司)。

1.3 提取與分離

將干燥的糙枝金絲桃地上部分15.0 kg，粉碎后用5倍量的95%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h，減壓回收溶劑得浸膏2.3 kg。將浸膏分散于5倍量的水中混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得石油醚萃取部位750.0 g，乙酸乙酯萃取部位550.0 g。將石油醚萃取部位經減壓硅膠柱色譜分離，用石油醚/乙酸乙酯(100∶0→0∶100)梯度洗脫，洗脫液經薄層色譜檢測，合并相似的流分，回收溶劑得到13個流分(Fr.A～Fr.M)。

Fr.A(169.2 g)，經硅膠柱色譜分離，依次用石油醚/乙酸乙酯(100∶0→0∶100)梯度洗脫得九個亞組分(Fr.Aa～Fr.Ai)。Fr.Ac(37.9 g)經二醇基硅膠柱色譜分離，石油醚/二氯甲烷(1∶1)洗脫，得四個亞組分(Fr.Ac-1～4)。Fr.Ac-1經反復硅膠H柱色譜，凝膠柱色譜(石油醚/氯仿/甲醇= 5∶5∶1)和制備液相色譜(95%甲醇/水)分離得到化合物1(12 mg，tR= 32.2 min)、5(28 mg，tR= 38.5 min)和10(5 mg，tR= 48.3 min)。Fr.Ad(12.0 g)經硅膠H柱色譜，二氯甲烷/乙酸乙酯(20∶1)洗脫，得八個亞組分(Fr.Ad-1～8)。Fr.Ad-3經制備液相色譜(90%甲醇/水)純化得化合物3(5 mg，tR= 33.1 min)。Fr.Ad-7經制備液相(90%甲醇/水)純化得化合物2(14 mg，tR= 35.6 min)、4(25 mg，tR= 42.2 min)和6(21 mg，tR= 45.7 min)。Fr.Ae(1.0 g)經硅膠H柱色譜，凝膠柱色譜(石油醚/氯仿/甲醇= 5∶5∶1)和制備液相色譜(90%甲醇/水)分離得到化合物9(34 mg，tR= 34.8 min)。Fr.Ah經硅膠H柱色譜，石油醚/乙酸乙酯(4∶1→2∶1→0∶1)洗脫，再經制備液相色譜(90%甲醇/水)純化得化合物7(38 mg，tR= 31.6 min)和8(24 mg，tR= 39.2 min)。

1.4 神經保護活性測定

應用神經母細胞瘤SK-N-SH細胞株建立谷氨酸誘導損傷的細胞篩選模型，以MTT法觀察化合物1～10對SK-N-SH細胞成活率的影響。SK-N-SH細胞在37 ℃、含5% CO2的孵箱中培養，培養基為DMEM(含10%胎牛血清，100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素，pH 7.2～7.4)。用培養基將細胞分散，使成為密度為1×105個/mL的單細胞懸液，并以每孔0.1 mL接種于96孔板。培養24 h后換含有受試化合物的培養基，并于給藥后1 h加入白藜蘆醇(終濃度為50 mmol/L)繼續培養。給藥后24 h換含MTT(0.5 mg/mL)無血清的培養基，培養4 h，吸去培養液，加入DMSO振蕩使溶解，570 nm測定各孔吸光值。

2 結果與討論

2.1 結構鑒定

化合物1無色油狀物；HR-ESI-MS：m/z567.404 5 [M+H]+(calcd for C36H55O5，567.404 4)確定化合物的分子式為C36H54O5；1H NMR譜顯示三個烯氫質子信號(δH4.92，1H，t，J= 7.0 Hz；4.97，1H，t，J= 6.2 Hz；5.08，1H，t，J= 7.0 Hz)，九個甲基信號(δH1.00、1.23、1.23、1.53、1.65、1.66、1.66、1.67、1.71)以及一個仲丁基信號(δH2.24，1H，m；1.14，3H，d，J= 6.6 Hz；1.34/1.69，2H，m；0.86，3H，t，J= 7.4 Hz)。13C NMR譜顯示36個碳信號，包含三個羰基碳信號(δC194.4、206.7、210.8)和六個烯碳信號(δC119.8、122.0、22.2、133.6、133.7、134.5)(見表1)。從HMBC譜中可觀察到H2-15(δH1.90/2.48)與C-1、C-7、C-8、C-16、C-17、C-36相關；H2-21(δH3.11/3.31)與C-2、C-3、C-4、C-22、C-23相關；H2-26(δH2.46)與C-4、C-5、C-6、C-9、C-27、C-28相關；H2-31(δH1.58/2.03)與C-6、C-7、C-8、C-32、C-33、C-36相關；H3-36(δH1.00)與C-1、C-7、C-8、C-15相關，如圖1所示，推斷化合物1是與Hyphenrone E[5]具有相同平面結構的間苯三酚

表1 化合物1的1H NMR(400 MHz)和13C NMR(100 MHz)數據(CDCl3)Table 1 1H NMR (400 MHz) and 13C NMR (100 MHz) data of compound 1(CDCl3)

類衍生物。從ROESY譜圖中可觀察到H2-31(δH2.03/1.58)與H3-36(δH1.00)相關；H3-36(δH1.00)與H-6a(δH1.50)相關；H-31(δH2.03)與 H-15a(δH1.90)相關；H-17(δH3.84)與H-15b(δH2.50)相關；以及H2-26(δH2.46)與H-6a(δH1.50)相關，如圖1所示，說明C-8、C-5和C-7位取代基均為β構型，H-17為α構型。化合物1的CD譜與已知化合物hyperscabrone D[6]非常相似，如圖2所示，由此可確定化合物1的絕對構型為1S、5R、7S，8R和17R，將該化合物命名為hyperibrin H。化合物1的詳細結構鑒定數據原始圖譜可從本刊官網免費下載(www.trcw.ac.cn)。

圖1 化合物1的主要HMBC和ROESY相關Fig.1 Key HMBC and ROESY correlations of compound 1

圖2 化合物1和hyperscabrone D 的CD譜Fig.2 CD spectra of compound 1 and hyperscabrone D

化合物2無色油狀物;ESI-MS：m/z535.3 [M + Na]+，分子式為C32H48O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.28(1H，t，J= 13.6 Hz，H-6a)，1.92(1H，dd，J= 13.6，4.4 Hz，H-6b)，1.61(1H，m，H-7)，2.88(1H，dd，J= 14.6，10.0 Hz，H-10a)，3.06(1H，dd，J= 14.6，10.0 Hz，H-10b)，4.62(1H，t，J= 10.0 Hz，H-11)，1.24(3H，s，H-13)，1.33(3H，s，H-14)，1.22(3H，s，H-15)，1.70(1H，m，H-16a)，2.11(1H，m，H-16b)，4.92(1H，t，J= 6.4 Hz，H-17)，1.53(3H，s，H-19)，1.66(3H，s，H-20)，1.42(1H，m，H-21a)，1.81(1H，m，H-21b)，2.00(1H，m，H-22a)，2.20(1H，m，H-22b)，5.00(1H，t，J= 6.4 Hz，H-23)，1.59(3H，s，H-25)，1.66(3H，s，H-26)，1.11(3H，s，H-27)，2.16(1H，m，H-29)，1.17(3H，d，J= 6.4 Hz，H-30)，1.36(1H，m，H-31a)，1.69(1H，m，H-31b)，0.88(3H，t，J= 7.6 Hz，H-32)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：74.8(C-1)，172.0(C-2)，120.0(C-3)，191.1(C-4)，60.1(C-5)，41.8(C-6)，44.6(C-7)，47.1(C-8)，206.5(C-9)，26.9(C-10)，93.7(C-11)，71.4(C-12)，25.1(C-13)，26.5(C-14)，16.0(C-15)，28.0(C-16)，122.4(C-17)，133.6(C-18)，18.0(C-19)，25.9(C-20)，39.2(C-21)，25.4(C-22)，124.5(C-23)，132.3(C-24)，17.9(C-25)，25.8(C-26)，12.9(C-27)，208.5(C-28)，47.4(C-29)，17.2(C-30)，27.2(C-31)，11.9(C-32)。以上數據與文獻[7]報道的化合物對比一致，鑒定為hypermongone A。

化合物3無色油狀物;ESI-MS：m/z535.3 [M + Na]+，分子式為C32H48O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.43(1H，t，J= 13.6 Hz，H-6a)，1.92(1H，dd，J= 13.6，4.4 Hz，H-6b)，1.57(1H，m，H-7)，2.88(1H，dd，J= 14.6，10.0 Hz，H-10a)，2.98(1H，dd，J= 14.6，10.0 Hz，H-10b)，4.78(1H，t，J= 10.0 Hz，H-11)，1.21(3H，s，H-13)，1.27(3H，s，H-14)，1.32(3H，s，H-15)，1.74(1H，m，H-16a)，2.11(1H，m，H-16b)，4.92(1H，t，J= 6.4 Hz，H-17)，1.53(3H，s，H-19)，1.66(3H，s，H-20)，1.39(1H，m，H-21a)，1.91(1H，m，H-21b)，1.91(1H，m，H-22a)，2.11(1H，m，H-22b)，5.05(1H，t，J= 6.4 Hz，H-23)，1.59(3H，s，H-25)，1.66(3H，s，H-26)，1.02(3H，s，H-27)，1.91(1H，m，H-29)，1.12(3H，d，J= 6.4 Hz，H-30)，1.32(1H，m，H-31a)，1.76(1H，m，H-31b)，0.80(3H，t，J= 7.2 Hz，H-32)；13C NMR(100 MHz， CDCl3)δ：83.7(C-1)，187.6(C-2)，117.7(C-3)，176.8(C-4)，50.7(C-5)，39.7(C-6)，43.7(C-7)，48.1(C-8)，206.6(C-9)，27.8(C-10)，92.7(C-11)，72.3(C-12)，23.7(C-13)，25.0(C-14)，16.0(C-15)，27.2(C-16)，122.5(C-17)，133.6(C-18)，18.0(C-19)，25.9(C-20)，36.8(C-21)，25.4(C-22)，124.5(C-23)，131.3(C-24)，17.9(C-25)，25.8(C-26)，13.7(C-27)，209.3(C-28)，48.9(C-29)，16.7(C-30)，27.2(C-31)，11.7(C-32)。 以上數據與文獻[7]報道的化合物對比一致，鑒定為hypermongone E.

化合物4無色油狀物;ESI-MS：m/z535.3 [M + Na]+，分子式為C32H48O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.41(1H，t，J= 13.6 Hz，H-6a)，1.96(1H，dd，J= 13.6，4.4 Hz，H-6b)，1.65(1H，m，H-7)，2.88(1H，dd，J= 14.6，10.0 Hz，H-10a)，3.04(1H，dd，J= 14.6，10.0 Hz，H-10b)，4.78(1H，t，J= 10.0 Hz，H-11)，1.21(3H，s，H-13)，1.30(3H，s，H-14)，1.32(3H，s，H-15)，1.78(1H，m，H-16a)，2.14(1H，m，H-16b)，4.96(1H，t，J= 6.4 Hz，H-17)，1.57(3H，s，H-19)，1.70(3H，s，H-20)，1.44(1H，m，H-21a)，1.91(1H，m，H-21b)，1.91(1H，m，H-22a)，2.11(1H，m，H-22b)，5.05(1H，t，J= 6.4 Hz，H-23)，1.59(3H，s，H-25)，1.64(3H，s，H-26)，1.02(3H，s，H-27)，1.85(1H，m，H-29)，1.12(3H，d，J= 6.4 Hz，H-30)，1.32(1H，m，H-31a)，1.74(1H，m，H-31b)，0.80(3H，t，J= 7.2 Hz，H-32)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：83.8(C-1)，187.6(C-2)，117.6(C-3)，176.9(C-4)，50.6(C-5)，39.9(C-6)，43.3(C-7)，48.0(C-8)，206.8(C-9)，27.6(C-10)，93.2(C-11)，72.3(C-12)，24.2(C-13)，25.4(C-14)，15.4(C-15)，27.5(C-16)，122.6 (C-17)，133.6(C-18)，18.0(C-19)，25.9(C-20)，36.8(C-21)，25.4(C-22)，124.9(C-23)，131.3(C-24)，17.9(C-25)，25.8(C-26)，13.9(C-27)，209.3(C-28)，48.9(C-29)，16.7(C-30)，27.2(C-31)，11.7(C-32)。以上數據與文獻[7]報道的化合物對比一致，鑒定為hypermongone F。

化合物5無色油狀物;ESI-MS：m/z521.3 [M + Na]+，分子式為C31H46O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.43(1H，t，J= 13.6 Hz，H-6a)，1.92(1H，m，H-6b)，1.59(1H，m，H-7)，2.87(1H，dd，J= 14.8，7.6 Hz，H-10a)，2.98(1H，dd，J= 14.8，10.4 Hz，H-10b)，4.77(1H，dd，J= 10.4，7.6 Hz，H-11)，1.21(3H，s，H-13)，1.26(3H，s，H-14)，1.32(3H，s，H-15)，1.72(1H，m，H-16a)，2.12(1H，m，H-16b)，4.92(1H，t，J= 7.2 Hz，H-17)，1.57(3H，s，H-19)，1.66(3H，s，H-20)，1.39(1H，m，H-21a)，1.91(1H，m，H-21b)，1.91(1H，m，H-22a)，2.11(1H，m，H-22b)，5.05(1H，t，J= 6.4 Hz，H-23)，1.59(3H，s，H-25)，1.64(3H，s，H-26)，1.02(3H，s，H-27)，2.17(1H，m，H-29)，1.05(3H，d，J= 6.4 Hz，H-30)，1.13(1H，m，H-31)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：83.8(C-1)，187.6(C-2)，117.6(C-3)，176.8(C-4)，50.7(C-5)，39.6(C-6)，43.6(C-7)，48.0(C-8)，206.7(C-9)，27.8(C-10)，92.7(C-11)，72.2(C-12)，23.8(C-13)，25.0(C-14)，15.5(C-15)，27.2(C-16)，122.7(C-17)，133.7(C-18)，18.0(C-19)，25.9(C-20)，36.8(C-21)，25.1(C-22)，124.9(C-23)，131.3(C-24)，17.7(C-25)，25.8(C-26)，13.7(C-27)，209.9(C-28)，42.2(C-29)，20.6(C-30)，21.6(C-31)。以上數據與文獻[7]報道的化合物對比一致，鑒定為hypermongone G。

化合物6無色油狀物;ESI-MS：m/z521.3 [M + Na]+，分子式為C31H46O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.41(1H，t，J= 13.6 Hz，H-6a)，1.96(1H，m，H-6b)，1.65(1H，m，H-7)，2.87(1H，dd，J= 14.8，8.0 Hz，H-10a)，3.03(1H，dd，J= 14.8，10.4 Hz，H-10b)，4.81(1H，dd，J= 10.4，8.0 Hz，H-11)，1.21(3H，s，H-13)，1.30(3H，s，H-14)，1.32(3H，s，H-15)，1.78(1H，m，H-16a)，2.14(1H，m，H-16b)，4.96(1H，t，J= 7.2 Hz，H-17)，1.57(3H，s，H-19)，1.70(3H，s，H-20)，1.47(1H，m，H-21a)，1.91(1H，m，H-21b)，1.91(1H，m，H-22a)，2.11(1H，m，H-22b)，5.05(1H，t，J= 6.0 Hz，H-23)，1.59(3H，s，H-25)，1.64(3H，s，H-26)，1.02(3H，s，H-27)，2.09(1H，m，H-29)，1.05(3H，d，J= 6.4 Hz，H-30)，1.13(1H，m，H-31)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：83.8(C-1)，187.6(C-2)，117.7(C-3)，177.0(C-4)，50.7(C-5)，39.6(C-6)，43.2(C-7)，48.0(C-8)，206.7(C-9)，27.6(C-10)，93.3(C-11)，72.1(C-12)，24.1(C-13)，25.5(C-14)，15.5(C-15)，27.5(C-16)，122.6(C-17)，133.6(C-18)，18.1(C-19)，26.0(C-20)，36.7(C-21)，25.1(C-22)，124.9(C-23)，131.3(C-24)，17.7(C-25)，25.8(C-26)，13.9(C-27)，209.7(C-28)，42.3(C-29)，20.6(C-30)，21.6(C-31)。以上數據與文獻[7]報道的化合物對比一致，鑒定為hypermongone H。

化合物7無色油狀物;ESI-MS：m/z541.2 [M + Na]+，分子式為C33H42O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.64(1H，m，H-6a)，2.12(1H，dd，J= 12.4，4.0 Hz，H-6b)，1.75(1H，m，H-7)，7.44(2H，d，J= 8.4 Hz，H-12，16)，7.22(2H，t，J= 8.0 Hz，H-13，15)，7.38(1H，t，J= 8.0 Hz，H-14)，3.04(1H，dd，J= 14.4，6.8 Hz，H-17a)， 3.14(1H，dd，J= 14.4，6.8 Hz，H-17b)，5.05(1H，t，J= 7.2 Hz，H-18)，1.66(3H，s，H-20)，1.66(3H，s，H-21)，1.88(1H，dd，J= 12.8，6.0 Hz，H-22a)，2.71(1H，dd，J= 12.8，10.0 Hz，H-22b)，4.63(1H，dd，J= 10.0，6.0 Hz，H-23)，1.40(3H，s，H-25)，1.24(3H，s，H-26)，1.74(1H，m，H-27a)，2.20(2H，m，H-27b)，4.98(1H，m，H-28)，1.72(3H，s，H-30)，1.60(3H，s，H-31)，1.21(3H，s，H-32)，1.40(3H，s，H-33)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：77.1(C-1)，194.0(C-2)，115.6(C-3)，172.4(C-4)，59.8(C-5)，36.4(C-6)，47.7(C-7)，49.2(C-8)，205.4(C-9)，193.5(C-10)，136.9(C-11)，127.8(C-12)，128.0(C-13)，131.8(C-14)，128.0(C-15)，127.8(C-16)，22.2(C-17)，119.7(C-18)，132.5(C-19)，25.7(C-20)，17.6(C-21)，30.9(C-22)，90.0(C-23)，70.8(C-24)，23.9(C-25)，26.5(C-26)，29.1(C-27)，124.4(C-28)，132.5(C-29)，25.9(C-30)，17.9(C-31)，22.4(C-32)，26.9(C-33)。以上數據與文獻[8]報道的化合物對比一致，鑒定為sampsonione L。

化合物8無色油狀物;ESI-MS：m/z519.3 [M + H]+，分子式為C33H42O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.52(1H，t，J= 12.8 Hz，H-6a)，2.00(1H，dd，J= 12.8，4.0 Hz， H-6b)，1.67(1H，m，H-7)，7.54(2H，d，J= 7.2 Hz，H-12，16)，7.27(2H，t，J= 7.2 Hz，H-13，15)，7.40(1H，t，J= 7.2 Hz，H-14)，2.93(1H，dd，J= 14.8，7.2 Hz，H-17a)，2.99(1H，dd，J= 10.4，7.2 Hz，H-17b)，4.83(1H，dd，J= 10.4，7.2 Hz，H-18)，1.24(3H，s，H-20)，1.30(3H，s，H-21)，2.45(1H，dd，J= 14.4，7.6 Hz，H-22a)，2.60(1H，dd，J= 14.4，7.6 Hz，H-22b)，5.10(1H，t，J= 7.6 Hz，H-23)，1.67(3H，s，H-25)，1.67(3H，s，H-26)，2.18(2H，m，H-27)，4.98(1H，t，J= 7.2 Hz，H-28)，1.72(3H，s，H-30)，1.58(3H，s，H-31)，1.13(3H，s，H-32)，1.40(3H，s，H-33)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：79.0(C-1)，187.9(C-2)，117.4(C-3)，176.1(C-4)，55.8(C-5)，39.3(C-6)，43.7(C-7)，48.0(C-8)，206.3(C-9)，193.3(C-10)，136.6(C-11)，127.9(C-12)，128.3(C-13)，132.1(C-14)，127.9(C-15)，128.3(C-16)，27.5(C-17)，92.5(C-18)，72.0(C-19)，23.7(C-20)，25.0(C-21)，28.9(C-22)，118.3(C-23)，135.4(C-24)，25.8(C-25)，18.1(C-26)，26.8(C-27)，122.5(C-28)，133.8(C-29)，26.1(C-30)，19.2(C-31)，15.8(C-32)，23.7(C-33)。以上數據與文獻[9]報道的化合物對比一致，鑒定為garcinielliptone I。

化合物9無色油狀物;ESI-MS：m/z519.3 [M + H]+，分子式為C33H42O5。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：1.46(1H，m，H-6a)，2.00(1H，dd，J= 13.6，4.4 Hz，H-6b)，1.67(1H，m，H-7)，7.58(2H，d，J= 8.0 Hz，H-12，16)，7.35(2H，t，J= 8.0 Hz，H-13，15)，7.48(1H，t，J= 7.6 Hz，H-14)，2.96(2H，d，J= 10.0 Hz，H-17)，4.65(1H，m，H-18)，0.90(3H，s，H-20)，0.90(3H，s，H-21)，2.48(1H，m，H-22a)，2.57(1H，m，H-22b)，5.06(1H，m，H-23)，1.70(3H，s，H-25)，1.67(3H，s，H-26)，1.65(1H，m，H-27a)，2.13(1H，m，H-27b)，4.96(1H，m，H-28)，1.56(3H，s，H-30)，1.67(3H，s，H-31)，1.24(3H，s，H-32)，1.34(3H，s，H-33)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：70.6(C-1)，171.9(C-2)，118.3(C-3)，188.1(C-4)，65.3(C-5)，41.8(C-6)，43.2(C-7)，47.0(C-8)，206.9(C-9)，193.2(C-10)，137.2(C-11)，128.5(C-12)，128.2(C-13)，132.8(C-14)，128.2(C-15)，128.5(C-16)，26.5(C-17)，93.5(C-18)，70.6(C-19)，23.7(C-20)，26.4(C-21)，29.3(C-22)，119.5(C-23)，134.7(C-24)，18.1(C-25)，26.0(C-26)，27.7(C-27)，122.3(C-28)，133.5(C-29)，17.9(C-30)，25.9(C-31)，15.7(C-32)，24.1(C-33)。以上數據與文獻[10]報道的化合物對比一致，鑒定為propolone C。

化合物10無色油狀物;ESI-MS：m/z333.3 [M + H]+，分子式為C22H37O2。1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ：3.62(1H，s，H-2)，2.35(1H，m，H-4)，1.16(1H，m，H-5a)，2.09(1H，m，H-5b)，2.35(1H，m，H-6)，2.40(1H，m，H-8)，0.99(3H，d，J= 6.4 Hz，H-9)，1.00(1H，d，J= 6.4 Hz，H-10)，1.03(3H，s，H-11)，1.00(3H，s，H-12)，2.16(1H，m，H-13a)，2.35(1H，m，H-13b)，5.10(1H，t，J= 8.0 Hz，H-14)，1.67(3H，s，H-16)，1.66(1H，s，H-17)，1.67(1H，m，H-18a)，1.91(1H，m，H-18b)，5.05(1H，m，H-19)，1.57(3H，s，H-21)，1.57(3H，s，H-22)；13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ：208.8(C-1)，70.6(C-2)，43.4(C-3)，48.2(C-4)，34.8(C-5)，50.9(C-6)，208.8(C-7)，42.9(C-8)，17.8(C-9)，17.2(C-10)，25.7(C-11)，25.8(C-12)，27.4(C-13)，123.2(C-14)，132.7(C-15)，25.8(C-16)，25.7(C-17)，27.5(C-18)，121.4(C-19)，133.1(C-20)，25.7(C-21)，17.7(C-22)。以上數據與文獻[11]報道的化合物對比一致，鑒定為garcinielliptone N。

2.2 神經保護活性評價

應用神經母細胞瘤SK-N-SH細胞株建立谷氨酸誘導損傷的細胞篩選模型，以MTT法觀察化合物1～10對SK-N-SH細胞成活率的影響。結果表明，化合物5和6具有一定的神經保護活性(見表2)。

表2 化合物5和6對谷氨酸誘導的神經元損傷的保護作用Table 2 Neuroprotective effects of compounds 5 and 6against glutamate-induced toxicity in SK-N-SH cell

3 討論與結論

本文對糙枝金絲桃地上部分的乙醇提取物進行了化學成分研究，共分離鑒定了10個間苯三酚類成分，其中化合物1為新化合物。并對各化合物的神經保護活性進行了測試，發現化合物5和6在10 μM濃度下對谷氨酸誘導的神經元損傷具有一定保護作用，化合物5與陽性對照白藜蘆醇的活性相當。此外，間苯三酚類化合物多為無色油狀物且具有多個手性中心，很難用經典的X-Ray單晶衍射實驗來確定其絕對構型，但可以通過比較實驗和計算ECD譜來進行確定。