江蘇地區雞志賀氏菌病的血清流行病學調查

安東 王成麗 曹斌 盧煒 葛夢婷 楊將輝

（江蘇農牧科技職業學院 225300）

雞志賀氏菌病是志賀氏菌引發的一種細菌性痢疾病[1]，病原菌有鮑氏志賀菌、痢疾志賀氏菌等。雞志賀氏菌病具有較強的傳染性，且發病突然，病程短，主要通過消化道途徑感染，幼齡雛雞感染率和致死率最高[2]。病雞感染后出現精神不振，采食量下降，水樣腹瀉，嚴重者夾雜血液，日齡越小雛雞死亡率越高，整個病程可持續3～7d[3]。由于雞志賀氏菌病對常用的鏈霉素有一定的耐藥性，若用藥不當會加重病情擴散，引發更多雞只感染。由于該病原體可感染人類，對食用者腸道菌群健康具有破壞作用，必須做好雞志賀氏菌病防治管理。本試驗對江蘇地區5 個規模化養殖場和散養農戶進行隨機抽樣調查，通過平板凝集試驗了解該地區志賀氏菌流行情況，為開展雞志賀氏菌病的凈化提供參考。

1 材料與方法

1.1 抗原和血清

雞志賀氏菌平板凝集染色抗原、陽性血清和陰性血清由本實驗室自行制備。

1.2 稀釋液

0.15%的石炭酸生理鹽水（pH7.2）由本實驗室自行配制。

1.3 培養基

ss 瓊脂平板培養基采購于浙江天杭生物科技股份有限公司。1%葡萄糖肉湯培養基為本實驗室自行配制。

1.4 受檢雞群

檢測血清來自于江蘇地區的5 個規模養殖場、35 戶農家散養XXX 雞只，血清采集數量共700 份，其中規模養殖場500份，農家散養200 只。采血部位為雞翅靜脈，血清由血液高速離心獲得，血清樣本置于-20℃保存，每只雞采血量為500uL。

1.5 制備抗原

（1）培養種菌：將純化好的菌株接種到滅菌好的牛肉湯蛋白胨內，培養溫度為37℃，培養時間為24h。

（2）細菌接種：將鮑氏志賀菌液均勻地涂抹在ss 瓊脂平板培養基內，培養溫度為37℃，培養時間為24h，促進病原菌大量繁殖。同樣方法接種痢疾志賀氏菌。

（3）采集培養的細菌：培養過后可發現不同平板內均長滿病原菌，兩種病原菌培養基表面分別加入適量的稀釋液至表面濕潤，然后刮取表面病原菌，全部移入無菌瓶中。

（4）細菌滅活：鮑氏志賀菌液和痢疾志賀氏菌液分別置于121℃高壓滅活，滅菌時間為2h30min。

（5）濃縮抗原：將抗原進一步濃縮，根據離心法將不同質量的物質進行離心，得到所需要物質，離心轉速為每分鐘4000r，離心時間為20min，用無菌吸管緩慢吸棄上清，該步驟充分多處直至上清液無雜質且清涼，最后棄掉全部上清液，保留管底菌體。

（6）調整濃度：最終抗原濃度為40 億/ml，用無菌吸管將細菌分散開來。

（7）抗原染色：提取一部分溶液，將這部分溶液進行抗原染色。加入適量的堿性亞甲藍染色液進行染色，充分混勻。

（8）保存方法：制備好的2 種不同的抗原菌放入冰箱冷藏保存，以備后續使用。

1.6 被檢血清處理

采集的雞只血清在檢測前放置于56℃水浴鍋內孵育30min進行滅活處理。

1.7 檢測方法

采用平板凝集試驗進行檢測，試驗開始前將所有血清（含待檢測、陽性、陰性）及制備的抗原放置于室溫條件下1h，讓試劑溫度較為均一，實驗溫度為25～30℃。用蠟筆將玻璃板平均分成6 格，將制備的鮑氏志賀菌凝集反應抗原滴加在前3 個格，第1 格內加入待檢血清，第2 格加入雞志賀氏菌病陽性血清（陽性對照），第3 格加入等量生理鹽水（引性對照），將制備的痢疾志賀氏菌凝集反應抗原滴加在后3 個格，第4 格內加入待檢血清，第5 格加入雞志賀氏菌病陽性血清（陽性對照），第6 格加入等量生理鹽水（引性對照）。每個反應時間為5min。

1.8 結果判斷

陽性檢查結果：整個液體血滴凝集成白色花斑狀，凝集片或成片狀凝集大小的顆粒，分布在液體血滴的各個邊緣，肉眼觀察較明顯。

陰性試驗結果：白色混合液仍然能保持原來的白色狀態，或逐漸變成白色中心部分較濃的白色圓點狀。

2 結果與分析

2.1 不同雞場雞志賀氏菌病感染調查結果

如表1 所示，在700 份待檢血清中共檢測出82 份雞志賀氏菌病陽性血清，其中規模養殖場檢測樣本數量為500 份，陽性血清樣本42 份，陽性率8.6%；農戶散養檢測樣本數量為200份，陽性血清樣本40 份，陽性率20.0%。從感染情況來看，規模養殖場鮑氏志賀菌感染數量為22 份（占比51.16%），痢疾志賀氏菌感染數量為15 份（占比34.88%），混合感染數量為6 份（占比13.95%）；農戶散養鮑氏志賀菌感染數量為19 份（占比47.50%），痢疾志賀氏菌感染數量為12 份（占比30.00%），混合感染數量為9 份（占比22.50%）。

表1 不同養殖方式雞志賀氏菌病感染情況調查

2.2 不同群體雞志賀氏菌病感染調查結果

如表2 所示，商品雞陽性率最高，383 份樣本中檢測陽性血清57 份，陽性率為14.88%，其次為后備母雞，陽性率為8.98%，而種母雞陽性率為7.14，種公雞未檢測出陽性雞志賀氏菌病。從感染情況看，商品雞鮑氏志賀菌感染數量為29 份（占比50.88%），而痢疾志賀氏菌感染數量為17 份（占比29.8 2%），混合感染數量為11 份（占比19.30%）；后備母雞鮑氏志賀菌感染數量為11 份（占比50.0%），痢疾志賀氏菌感染數量為8 份（占比36.36%），混合感染數量為3 份（占比13.64%）。

表2 不同群體雞志賀氏菌病感染情況調查

3 結論與討論

試驗自制的雞志賀氏菌平板凝集染色抗原可用于檢測雞志賀氏菌，試驗結果發現，不同養殖方式和飼養群體的雞志賀氏菌病感染情況不同。從養殖方式看，規模化養殖場由于飼養方式較為科學，調查的5 個養殖場均采用分群飼養管理，且每周進行1～2 個雞舍消毒工作，養殖人員進出雞舍要更換衣物和清潔消毒，在養殖方式較為科學的條件下，規模化養殖場雞志賀氏菌病陽性率明顯低于農戶散養模式。表明在管理粗放、衛生條件不良的條件下，雞志賀氏菌病具有較高的發病率。若散養戶不采用科學的飼養模式，缺乏定期消毒觀念，會進一步加重雞志賀氏菌病感染情況，增加雞志賀氏菌病防治難度。

從養殖群體看，商品雞感染雞志賀氏菌病最嚴重，陽性率高達14.88%，而后備母雞和種母雞也存在感染情況。商品雞發病率高的原因也和養殖方式有關，由于散養戶主要養殖商品雞，且養殖觀念較為落后，疫苗接種不當會增加感染幾率，甚至有散養戶存在“不發病不接種”的錯誤思想，造成雞群存在隱性感染雞只。江蘇地區應進一步加大科學養殖宣傳工作，鼓勵養殖戶每年進行至少2 次雞群檢疫，及時淘汰病雞和可疑雞只，每周對雞舍進行消毒，尤其是雛雞要與不同日齡雞分群飼養，這樣可減少雛雞雞志賀氏菌病發病率和死亡率。