廣藿香加入陳皮后提取工藝及測定條件的優化研究*

齊樂輝，龍丹丹，田 園，許樹軍

（黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱150040）

廣藿香味辛，微溫，尤其在治療胃腸道系統疾病方面有很好的療效。因為廣藿香的揮發油性成分不易溶于水，非揮發性成分溶于水，且人們服用藥物時基本是用水進行送服，因此，對于廣藿香中的非揮發性成分即水溶性成分的研究有很重要的實際意義。根據現代藥理學研究，廣藿香具有抗氧化、抗癌、抗炎、抗病原微生物、胃腸系統保護、抗呼吸道感染[1-3]等作用。

陳皮對于改善心血管系統、消化系統、內分泌系統的功能[13,14]等方面具有很好的藥效活性。中醫臨床上經常使用廣藿香和陳皮兩種藥材，陳皮和廣藿香都可用于治療惡心嘔吐，并且中醫臨床中二者的配伍應用廣泛，對于加入陳皮后對廣藿香中某種化學成分的提取效率的影響的研究是有據可循的。藥物的藥理效應基礎在于其化學成分，尤其是有效活性成分[4,5]。可以結合運用“藥對”的相關知識，探討陳皮對廣藿香中某些成分的提取效率是否有積極的影響，可對將來增強廣藿香的有效藥理活性或者降低廣藿香的某些不良反應的相關研究提供切實可行的研究方法。

1 實驗部分

1.1 儀器及材料

LT502型電子天平（常熟市天量儀器有限責任公司）；KQ-500DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HR-20 1000g多功能粉碎機（上海哈瑞斯電器有限公司）；Ultimate 3000超快速液相色譜儀（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）。

廣藿香藥材產于廣東肇慶；姜厚樸產于浙江；香草酸和原兒茶酸對照品購于上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純天津星馬克科技發展有限公司）；乙腈、H3PO4均為色譜純，天津科密歐化學試劑有限公司；純凈水為娃哈哈集團生產。

1.2 藥材的粉碎

使用LT502E電子天平分別稱取廣藿香藥材500g，陳皮藥材200g。使用HR-20多功能粉碎機粉碎廣藿香和陳皮藥材。粉碎結束后將藥材粉末密封，置于常溫干燥的地方保存。

1.3 提取方法的優化

1.3.1 提取正交試驗設計 為了使本實驗最終提取所得到的非揮發性成分（原兒茶酸、香草酸）含量較高，使HPLC測定得到的色譜圖效果更佳，總結分析相關知識，最終討論決定了可行性較高的正交實驗方法。使用L4（23）正交作用表，用每次提取時間（min），廣藿香-陳皮配料比和蒸餾水用量（mL）作為考察因素，用香草酸的峰面積（mAu·min）作為評價指標，進行試驗得出提取效率最高的廣藿香提取條件。

表1 因素水平Tab.1 Factor levels

1.3.2 提取方法的選擇 電子天平稱取粉碎過后的廣藿香藥材粉末2.5g，用250mL具塞錐形瓶或圓底燒瓶盛裝。按表2中的實驗過程進行提取，到時間后停止加熱，減壓抽濾，留濾渣，放入原儀器中。再按照原實驗流程重復提取2次，合并3次濾液。

1.4 色譜條件的優化

為了在短時間內實現快速分離并得到最佳峰形，在正式試驗開始之前，對流動相、檢測波長和洗脫程序等色譜條件進行了優化，使最終經HPLC測定得到的色譜峰能夠更好的分離開來。

對于流動相的選擇，現用于HPLC檢測廣藿香水溶性成分的流動相乙腈-0.1%磷酸水對廣藿香水提取液進行過檢測。本實驗分別使用了254nm作為檢測波長對廣藿香水提取物進行了測定。采用的色譜條件及洗脫程序見表2。

表2 洗脫程序Tab.2 Elution procedure

2 結果與討論

2.1 提取方法的選擇

圖1為廣藿香及廣藿香－陳皮藥對的HPLC色譜圖。

圖1 廣藿香及廣藿香-陳皮藥對的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram of Patchouli and Patchouli-Tangerine peel

由圖1可知，S2中的色譜峰數目比S1中的多，S2中的色譜峰較高，峰型比較對稱。因此，選用加熱回流提取作為本實驗的提取方法。流動相為乙腈-0.1%磷酸水時，廣藿香提取液經HPLC測定，10min內色譜峰數目最多，色譜峰的峰形與其他的色譜圖比較起來最好。并且H3PO4不僅可以作為色譜修飾劑，而且對某些化合物也有電離作用，因此，在流動相中加入0.1%的H3PO4溶液有助于使提取溶劑中的化學成分快速分離并顯示出最佳峰形。

2.2 正交實驗結果

從表3中可以發現，影響峰面積大小的因素主次順序為B＞A＞C，廣藿香提取效率最優的組合為A1B1C1。因此，可以確定A1B1C1為水加熱回流提取的最佳工藝，即：每次提取時間為30min，廣藿香-陳皮藥材配料比為1∶1，蒸餾水每次用量為50mL。

表3 正交實驗結果Tab.3 Orthogonal experiment results

3 結論

采用蒸餾水為提取溶劑，加熱回流提取廣藿香中的水溶性成分效果最佳。正交實驗結果顯示，影響香草酸的峰面積大小的因素主次順序為B＞A＞C，即廣藿香-陳皮配料比＞每次提取時間＞蒸餾水用量；廣藿香提取效率最優的組合為A1B1C1。因此，可以確定A1B1C1為水加熱回流提取的最佳工藝，即：每次提取時間為30min，廣藿香-陳皮藥材配料比為1∶1，蒸餾水每次用量為50mL。色譜條件優化結果顯示，采用乙腈-0.1%磷酸為流動相，254nm為檢測波長進行梯度洗脫效果最佳。