免疫膠體金診斷技術在獸醫臨床上的應用

孫博 葉陽 任德強

（哈爾濱元亨生物藥業有限公司 150025）

膠體金屬于標記技術，而且是臨床生產中比較常用的，應用時具有其獨特的優勢。近這些年，該項技術已被大范圍的應用于多種生物學研究領域。臨床生產中所使用的免疫印跡技術幾乎全部都是膠體金標記技術。此外，在其他不少的生物學領域都有所應用。

免疫膠體金診斷技術類似于ELISA 檢測法，主要是運用在血清及尿液檢測過程中。對于整個樣品的檢測一般需要5～10min 的時間。膠體金技術最初主要就是由國外的醫學研究人員以酶標免疫法作為基礎，然后采用膠體金替代酶作標志物，抗原抗體結合的一種免疫學檢測法，同時也將此項技術成功的應用在檢測人艾滋病病毒抗體的試劑盒研究中[1]，在有效檢測艾滋病病毒的研究方面貢獻非常大。但隨著醫學技術的研究不斷深入，越來越多的領域都在應用免疫膠體金技術，而當前此項技術同樣也被廣泛地應用在獸醫臨床診斷中。

1 技術的基本原理

免疫膠體金技術在我國免疫學領域相對較新[2]。我國的納米技術不斷發展，相關研究人員發現膠體金，并且將其廣泛應用在醫學、分子學及生物學和免疫學等學科。膠體金主要指受到VC 和鞣酸等還原劑的作用，聚合氯金酸（HAuCl4）成為顆粒狀，而且大小也是特定的，而這些顆粒受到靜電作用會形成比較穩定的物質，呈現膠體狀。而膠體金技術的基本原理就是將微孔濾膜當作載體，被已知的抗原或抗體包被，再將待測樣品滴入，經過微孔膜的滲濾作用或者是毛細管的虹吸功能，樣品中的抗原或抗體會與被微孔濾膜包被的抗體或抗原發生相應的結合，最后再通過膠體金標記物的反應形成紅色的線或點[3]，一般可呈現出陽性，如果沒有此種反應現象則判定為陰性。

2 優勢分析

（1）在獸醫臨床生產中使用免疫膠體金診斷技術在操作方面相對簡單，進行檢測工作時一般僅需要試劑盒或者是試紙條，并不需要其他設備和試劑，對于樣品的前處理也比較簡單，或者干脆不需要采取前處理，而且樣品通常呈現出多樣化的特點，臨床中可以是血清、組織液、糞便和尿液等。

（2）獸醫臨床生產中采用免疫膠體金診斷技術相對會更加方便、快捷，一般反應僅5～10min 就可以出結果，而ELISSA試驗通常需要1～2h，PCR 檢測需要更長的時間。該項技術因為方便快速的特點而不會受到檢測場地的制約，所以更適合在獸醫生產基層和現場運用。膠體金診斷技術具有快速特異性，同時又不會對檢驗靈敏度產生影響，結合多年的工作經驗發現，靈敏度能達到1ng/ml 或達到更低水平[4]。

（3）臨床生產中使用免疫膠體金診斷技術的成本相對比較低，在實際檢測時也不需要準備特殊的設備和試劑。在判定結果方面更加直觀，陰性、陽性結果會有明顯的顯色，應用過程中只需要通過肉眼就比較容易加以判斷。

（4）免疫膠體金診斷技術具有一定的特異性，實際應用范圍相對比較廣闊，在不同的檢測條件都可以正常運用。而且可以同時針對多個項目內容進行相應檢測，在很大程度上提高了樣品利用率，對難以獲得的樣品表現出更加明顯的優勢。

（5）膠體金標記方式具有相對穩定的理化性質，試劑盒或試紙條都可以保存比較長的時間，通常將其置于4℃的條件下以冷藏可以存放長達超過2 年，而且并不會出現信號衰減問題。

（6）因為膠體金呈現紅色，所以不需要添加任何著色試劑，省去了酶標致癌底物，在很大程度上降低了試驗人員在工作中受到的危害，而且能避免工作環境受到不必要的污染，相比其他診斷技術更加安全、環保，也更加符合環保型社會的要求。

3 免疫膠體金技術在獸醫臨床上的應用

免疫膠體金技術在臨床上應用具有諸多優點，所以陸續被廣泛應用在獸醫臨床中，即在動物疾病診斷工作中一般主要包括兩個方面的內容：其一是抗體檢測方面的應用，其二是在病原檢測方面的應用。

3.1 抗體檢測

在臨床開展抗體檢測過程中，免疫膠體金診斷的基本原理是相應的抗原在硝酸纖維素膜（NC 膜）上呈現包被狀態，采用膠體金對相應抗原進行標記，檢測的樣品如果顯示為陽性，則樣品中的抗體與NC 膜上的抗原或金標抗原通過結合后會發生相應的反應，可見有紅色線條或點出現；但如果樣品呈現陰性反應，則不會出現上述現象。根據相關研究報道可知，對動物感染的很多疾病檢測過程中，通過應用免疫膠體金技術都可以獲得比較理想的符合率、靈敏度和特異性[5]。所以，可以得出結論：在臨床生產中針對動物疾病進行診斷時采用膠體金診斷技術，在符合率、靈敏度和特異性方面的表現都比較好，所以膠體金診斷技術在獸醫臨床診斷方面的應用價值非常高。

3.2 病原檢測

動物臨床生產中針對病原開展的相應檢測工作過程中，實施免疫膠體金診斷技術的基本原理是硝酸纖維素膜（NC 膜）與膠體金分別包被抗特定病原的2 種抗體，如果被檢樣品呈現陽性反應，則樣品中的抗原與NC 膜上的抗體和金標抗體通過結合而發生相應的反應，并且會在NC 膜上可見紅色的線或點；如果被檢樣品出現陰性反應，同樣說明沒有上述情況出現。根據大量報道可知，在動物疾病實際診斷過程中，應用膠體金標診斷技術具有比較高的檢出率。同時結合很多相關轉接試驗結果表明，膠體金檢測診斷技術在動物疾病診斷中的應用能獲得比較高的檢出率，而且會表現出良好的特異性，將此技術廣泛應用在動物疾病診斷方面的價值非常高。

4 結語

綜上所述，免疫膠體金診斷技術在動物臨床應用中操作相對比較簡單，而且方便快捷，投入的相關檢測成本也不高，對樣品也具有比較高的利用率、檢測結果易于研判，檢出率和穩定性都比較高，同時表現出比較強的特異性，結合以上優點可以發現，此種檢測方法在動物生產現場比較適用，此外，開展大批量的檢測及大面積普查工作中也非常適用，因此，膠體金診斷技術在獸醫臨床診斷疾病過程中的應用前景非?？捎^。