食品中瘦肉精檢測存在的問題及解決方法分析①

方榮謙

（廈門市產品質量監督檢驗院 福建廈門 361000）

1 GB/T 22286標準檢測瘦肉精存在的問題

GB/T 22286 標準作為重要的瘦肉精檢測手段，方法較準確，檢出限低，常用于畜禽肉及副產品中的萊克多巴胺、克倫特羅等β-受體激動劑（即瘦肉精）殘留量的檢測。在《國家食品安全監督抽檢實施細則》2019 版、2020 版規定，豬、牛、羊及其他畜肉中的萊克多巴胺等瘦肉精的檢測方法均采用該標準方法。然而該標準在實際使用過程中，由于步驟繁多，操作復雜，不同檢測人員對標準細節的理解也不盡相同，以及標準所用的儀器設備更新換代，比如可用自動固相萃取裝置代替手動萃取，或儀器參數設置不同等諸多原因，會引起檢測結果的顯著偏差。

2 GB/T 22286 標準在實際檢測過程中的解決方法

2.1 簡化提取過程中沉淀蛋白的步驟

GB/T 22286 需要將已酶解、加過內標的樣品用高氯酸將pH 調節至1，離心后取上清液用氫氧化鈉溶液調為11，再用有機相進行液液萃取，萃取后的有機相用氮氣吹至干，最后用合適溶劑溶解殘渣才能進入下一步的凈化步驟。整個過程操作步驟多，不僅費時費力，還使得整個方法的A類不確定度變大。由于該步驟的主要目的是沉淀固體雜質和蛋白，避免在凈化步驟中堵塞固相萃取柱，因此簡化該步驟。實際操作中，對于生豬肉和生牛肉樣品，無需用高氯酸調節pH，直接將加過內標且混合均勻的樣品離心，上清液用濾紙過濾，濾液澄清即可用于下一步凈化。簡化后的方法可行且操作簡單，無論是使用自動固相萃取裝置進行凈化，還是手動操作凈化，均不會造成固相萃取柱堵塞。簡化后的步驟數量大幅減少，縮短了檢測時間，還提高了檢測方法的精密度。

2.2 自動固相萃取凈化參數的優化

自動固相萃取儀是一種能夠自動化運行固相萃取方法中包括活化、上樣、清洗、洗脫等步驟的固相萃取裝置，廣泛應用于食品中農殘、真菌毒素和獸殘分析的樣品前處理。按同時處理樣品的批量數區分，自動固相萃取儀可分為單通道固相萃取儀和多通道固相萃取儀。通道數越多，同時處理樣品的批量越多，可節省更多的前處理時間，特別是萃取步驟中上樣的時間。自動固相萃取儀的特點是穩定、可靠，能夠充分體現自動化的長處，將實驗過程的人工隨機誤差降至最低。GB/T 22286 中并無提到凈化過程是采用自動固相萃取還是手動固相萃取裝置。因此，實驗室常采用自動固相萃取裝置更省心省力。

GB/T 22286 詳細描述了固相萃取的各個參數，包括活化、上樣、清洗、洗脫等步驟所需的溶劑種類和數量，規定過程流速應控制在0.5 mL/min。如采用手動方式，檢驗人員對流速的控制都比較熟悉，直接掐著秒表數液體滴下來的數量換算成體積即可。如采用自動方式，由于大部分自動萃取裝置都可以在儀器面板或軟件的操作界面直接設置流速參數，理論上操作應該更會簡單，且過程不用人工干預，平行性也會更好。然而在實際操作中往往會遇到流速不一致的問題。比如在洗脫這一步設置流速成0.5 mL/min 的時候，由于儀器的滯后效應，洗脫過程流速遠遠小于0.5 mL/min，不僅達不到慢速洗脫的效果，而且還可能使洗脫液滯留在萃取柱中，使得待測目標物損失。在多通道固相萃取儀中還可能造成各通道流速不一致，導致實驗平行性不好。值得注意的是，標準方法中流速控制在0.5 mL/min，是指實際流速，不是儀器上設置的流速。標準方法里僅用1mL 洗脫液在自動萃取裝置凈化，有時無法完全把目標物洗脫下來，導致回收率降低，檢測數值偏小。建議將洗脫液增大為2～5 mL，充分將目標物洗脫下來。經調整參數之后的檢測回收率及檢測結果重復性均有明顯提升。

2.3 內標加入方式的改進

在檢測分析中，為了保證操作符合標準方法的要求，常常使用內標法定量。內標法可補償檢測過程中待測物在樣品前處理，儀器響應等方面誤差，使定量結果更加準確［1］。GB/T 22286 標準前處理步驟繁多，待測目標物在諸多復雜操作中很容易損失，如果用外標法定量會造成檢測數值重復性差，加標回收率數值也明顯偏低。因此，有必要加入內標。一般的檢測方法是內標直接加入待測樣品中，混合均勻即可進行下一步操作。GB/T 22286 加入內標后需要在振蕩器中振蕩15 min，以使內標物充分混合，與待測目標物處于相同狀態。如果加入內標后不振蕩或振蕩時間不夠，則內標大部分游離于待測樣品及待測目標物之外，檢測結果會造成內標數值偏大，使得內標校正后的待測目標物檢測值明顯偏低。在實際檢測中，為了更好發揮內標作用，加入內標后把振蕩時間延長至30 min，或在振蕩15 min 之后再靜置30 min，讓內標與基質能夠得到充分混合。

3 GB/T 22286標準應用優化實踐的結論

瘦肉精檢測過程復雜，方法精密度相對較差，本文通過簡化前處理中沉淀蛋白的處理，優化固相萃取設置參數，改進內標的加入方式，使檢測時間大幅減少的同時提升了檢測精密度和方法回收率，大大增強了檢測數據的準確性。