食源性致病菌快速檢測技術分享

文 李娜（樂山市疾病預防控制中心）

目前，發達國家、發展中國家都普遍存在食物中生物性污染這一嚴重現象，該因素是影響食品安全問題的重要原因，致病性微生物對于消費者生命而言危害性極大。近些年來，各國都在重點關注食品安全問題，同時也采取了一系列有效措施，而想要明確食源性致病菌在食物鏈中的相關食品，并盡可能避免食物污染，極大程度地依賴于對致病菌的檢測水平以及能力。以往傳統的檢測方式對于難以培養的致病菌無法實施檢測，并且檢測方式耗時較長，想要獲取檢測結果需要幾天時間，因此不能起到實質性的檢測、預防作用。鑒于此，發展新的快速檢測技術是及時防控致病菌傳播的關鍵所在。本文就來說一說食源性致病菌快速檢測技術到底有哪些？

免疫學檢測技術

免疫學檢測技術主要指的是將抗體、抗原反應的特異性有效結合酶的高催化作用，屬于一種較為全面的綜合技術，能有效定位、定量及定性，敏感度、專一性均較高。酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。Engvall于1971年創建了ELISA方法，將酶作為標記物，對抗體或是抗原進行有效標記，并利用酶促反應所起到的放大作用將初級免疫學反應進一步顯示，同時通過聚苯乙烯微量反應板將抗體或是抗原吸附，進而使其固相化，而后再于其中實施免疫反應。ELISA方法具有較強的實用性，同時檢測結果客觀、準確率較高，并且還能對大量樣品進行處理，這些優點彌補了以往傳統化學分析方法和其他傳統儀器檢測方法上存在的不足之處。但是ELISA對于試劑的選擇性較高，同一時間難以對多種成分進行有效分析，并且針對結構相似的化合物，會出現交叉反應。另外，在對小分子量化合物進行分析時存在一定的難度。免疫磁性分離技術。免疫磁性分離技術主要指的是通過將特異性抗體偶聯于磁性顆粒表面，使得樣品中存在的致病菌與其特異性結合，而存在致病菌的磁性顆粒在外加磁場的作用下，聚集于磁極方向，這種情況下將檢樣混合液取出，不斷地分離致病菌，使其濃縮。免疫磁性分離技術可以替代以往傳統的選擇性增菌培養環節，并且可以有效地將需要檢驗的微生物從試驗樣品中有效、快速分離。免疫膠體金技術（GICT）。Faulk等在1971年電鏡免疫膠體金染色法實驗對沙門氏菌進行觀察時創建了免疫膠體金技術。該技術的應用原理主要是將微孔濾膜作為載體，包被已知的致病菌抗體、抗原，再將待檢標本加入后，在濾膜的作用下讓標本內的抗體或是抗原有效結合膜上包被的抗體或是抗原，而后再應用膠體金結合物進行標記，從而實施有效監測。該技術的優點在于具有較高的特異性、敏感度，不需要再應用其他儀器，實際操作相對簡單，且快速，在幾分鐘內便可以對實驗結果進行肉眼觀察，同時還能將實驗結果加以保持。

聚合酶鏈式反應（PCR）檢測技術

多重PCR檢測技術（m-PCR）。PCR技術現目前已經廣泛應用于檢測食品中的單一致病菌，并取得了較佳的效果。但是由于食品中通常存在多重致病菌，因此就需要建立多重PCR，便同時檢測多種食源性致病菌。m-PCR主要指的是在同一反應體系內，將多種特異性引物加入，加入后如若出現與各引物互補的模板，則可以同時在同一反應管內對目的DNA片段進行擴增，進而滿足同一時間一次性對多種致病菌實施檢測的需求。

定量PCR檢測技術。定量PCR檢測技術則是對以往所應用的定性PCR技術進行的補充和延伸，主要指的是在PCR反應體系內加入標記物，進而通過觀察標記物的表達量，在對其定性的情況下再進行定量。其中又細分為內標定量PCR與定時熒光定量PCR。①內標定量PCR：內標定量PCR主要是應用的終點檢測方式，指的是在PCR處于平臺期階段時實施檢測，首先創建常規PCR，通過對數期后，逐步擴增至平臺期，但是檢測重顯性相對較差。鑒于此，是難以從終點產物中直接將起始模板量推算出來的，但是在加入內標后，便可以將部分終點產物定量所致的不確定性消除，進而起到定量的作用。內標定量主要包括ELISA法、競爭法、內參照法等。將內標物加入PCR反應觀眾后，可以消除PCR在逐步擴增時標本之間及反應管內存在的差異，其中方法的關鍵所在是對內標物進行有效構建。構建的基礎原則在于內標物應具有一定的靶基因相同擴增效率及條件。②實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR檢測技術不需要內標物，但是需要在反應體系中加入一定量的熒光基團，并通過實施監測熒光信號，觀察PCR進程，進而在應用標準曲線對未知的模板實施定量分析，不僅可以突破以往內標定量PCR只能夠于終點進行檢測存在的局限性，還能實現每一輪循環均可以對熒光信號強度再實施一次檢測，并詳細記錄與電腦中，而通過計算每個樣品的Ct值，再根據標準曲線得出相應的定量結果。實時熒光定量PCR將分子雜交與DNA擴增同時實施，并且應用閉管檢測，DNA在擴增后不需要電泳，檢測自動化，極大程度地降低了污染發生的風險，同時還進一步提升了檢測結果的特異度、靈敏度。

小結

隨著對于食源性致病菌快速檢測技術研究的不斷深入，越來越多的新技術在持續發展，而在食源性致病菌檢測過程中，這一系列新的檢測技術也發揮著巨大的作用，雖然不同的檢測技術其作用、適用范圍均有所不同，但是可以充分滿足檢測所需的差異化需求，進而確保我國食品安全，避免不良事件發生。隨著時代的進步，科學技術也在不斷發展，食源性致病菌快速檢測方式也在不斷地完善、改進，同時檢測標準也在發生變化，相信以后還會出現更簡便、更快速、更有效的檢測技術，進而滿足人們對食品安全的高需求。