COL5A2對(duì)胃癌的價(jià)值-基于薈萃分析和生物信息學(xué)分析*

胡尚尚，高 宇

(1.蚌埠醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)學(xué)院免疫學(xué)專(zhuān)業(yè)，安徽蚌埠 233000；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院生命科學(xué)院)

胃癌(gastric carcinoma,GC)占所有癌癥死亡的8.2 %，是全球第三大癌癥死亡原因[1]。目前，GC的治療方法包括手術(shù)，化學(xué)療法，放射療法和免疫療法，所有這些均可單獨(dú)或組合使用[2]。胃癌患者5年總生存率大概為30.0 %～35.0 %[3]。因此，發(fā)展改進(jìn)檢測(cè)方法來(lái)診斷早期CG是至關(guān)重要的。COL5A2基因，即V型膠原α2鏈基因，編碼一種低豐度纖維膠原的α鏈。該基因突變與埃勒斯-丹洛斯綜合征Ⅰ型和Ⅱ型有關(guān)。在癌癥研究中，少數(shù)報(bào)告指出了其在多種癌癥的病理過(guò)程中的作用，包括結(jié)直腸癌和卵巢癌[4-5]，先前的兩項(xiàng)研究確定COL5A2是前列腺癌的潛在生物標(biāo)志物[6-7]。近年來(lái)，大量的研究已經(jīng)確定了許多與胃癌有關(guān)的基因[8-10]。這些基因有些可作為胃癌的治療靶點(diǎn)和診斷標(biāo)志物，但有些基因的對(duì)診治胃癌的潛力仍未知。關(guān)于COL5A2與腫瘤之間的聯(lián)系的證據(jù)有限，而且COL5A2在胃癌中的作用研究很少，差異表達(dá)的COL5A2在GC中的重要性及其在GC患者中的預(yù)后價(jià)值需要進(jìn)一步研究。本研究在細(xì)胞水平和癌癥基因組圖譜(the cancer genome atlas,TCGA)數(shù)據(jù)庫(kù)和基因表達(dá)匯編(gene expression omnibus,GEO)數(shù)據(jù)庫(kù)分析COL5A2在胃癌中的表達(dá)及其診斷和預(yù)后價(jià)值，通過(guò)基因富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)結(jié)合TCGA數(shù)據(jù)揭示了COL5A2可能的分子功能。

1 對(duì)象與方法

1.1細(xì)胞培養(yǎng)和反轉(zhuǎn)錄定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR) 5種細(xì)胞系，包括HGC-27、SGC-7901、BGC-823和MGC-803 GC細(xì)胞系和正常人胃上皮-1細(xì)胞(GES)細(xì)胞系(所有細(xì)胞系購(gòu)自武漢普諾賽生命科技有限公司)。培養(yǎng)基由100 U/mL青霉素、10.0 %胎牛血清和DMEM培養(yǎng)基組成，將細(xì)胞濃度調(diào)節(jié)至40.0 %～60.0 %后，細(xì)胞在37 ℃和5.0 % CO2下培養(yǎng)。采用TRIzol、無(wú)水乙醇、異丙醇、氯仿提取總RNA。以GAPDH為參考基因，擴(kuò)增COL5A2，利用LightCycler?96 SW 1.1實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行RT-qPCR檢測(cè)(諾唯贊生物科技有限公司)。實(shí)驗(yàn)在八聯(lián)管中進(jìn)行，每個(gè)樣品三個(gè)復(fù)孔，并重復(fù)三次。用2-ΔΔCq法測(cè)定COL5A2相對(duì)表達(dá)量。(引物序列見(jiàn)表1)

表1 所用引物序列

1.2從GEO和TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)提取COL5A2表達(dá)的數(shù)據(jù) 基于癌癥基因組圖譜(TCGA)數(shù)據(jù)的腫瘤免疫評(píng)估資源(Tumor Immune Estimation Resource,TIMER)數(shù)據(jù)庫(kù)分析幾種癌癥(包括胃癌)中COL5A2的mRNA水平(http://timer.comp-genomics.org/)[11]。從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)(https://portal.gdc.cancer.gov/)下載GC患者的RNA測(cè)序數(shù)據(jù),用R 3.6.1軟件"limma"包進(jìn)行處理數(shù)據(jù)并分析COL5A2在胃癌組織與正常組織的表達(dá)差異。使用以下搜索詞在GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得包含GC樣本的數(shù)據(jù)集：gastric AND(cancer OR carcinoma)，用(Entry type)and Homo sapiens (Organism)的過(guò)濾器來(lái)指定搜索結(jié)果。制定以下排除標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步篩選搜索結(jié)果：(1)只包含GC組織而不包含正常組織的數(shù)據(jù)集；(2)僅包含細(xì)胞系樣本的數(shù)據(jù)集；(3)正常組和腫瘤組各小于10；(4)不包含COL5A2表達(dá)的數(shù)據(jù)集。(5)重復(fù)的數(shù)據(jù)集。分析COL5A2在胃癌組織和正常胃組織中的表達(dá)差異，并用R軟件繪制TCGA數(shù)據(jù)和GEO數(shù)據(jù)差異表達(dá)圖。

1.3胃癌COL5A2 mRNA表達(dá)水平的分析 利用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)得到的數(shù)據(jù)集，全面分析COL5A2的表達(dá)。使用標(biāo)準(zhǔn)化均值差(SMD)方法評(píng)估連續(xù)變量COL5A2表達(dá)。采用Cohen分類(lèi)評(píng)價(jià)總體效應(yīng)大小，SMD<0.2，屬于小效應(yīng)；SMD在0.2～0.8之間，屬于中等效應(yīng)；SMD>0.8屬于大效應(yīng)。當(dāng)有異質(zhì)性時(shí)，來(lái)自GEO和TCGA的數(shù)據(jù)與隨機(jī)效應(yīng)模型結(jié)合(I2)>50.0 %，結(jié)果以森林圖的形式呈現(xiàn)，并用Begg's檢驗(yàn)和漏斗圖用于評(píng)估出版偏倚。COL5A2表達(dá)的連續(xù)變量被轉(zhuǎn)換為真陽(yáng)性，假陽(yáng)性，假陰性和真陰性計(jì)數(shù)。并計(jì)算靈敏度(Sensitivity，SEN)、特異性(Specificity，SPE)、陽(yáng)性似然比(Positive Likelihood Ratio，PLR)、陰性似然比(Negative Likelihood Ratio，NLR)和診斷比(Diagnostic Odds Ratio，DOR)。繪制了綜合受試者工作特征曲線(Summary ROC，SROC)，并采用Deek漏斗圖對(duì)納入的研究進(jìn)行發(fā)表偏倚檢驗(yàn)。采用費(fèi)根圖(Fagan)計(jì)算診斷后概率，全面研究COL5A2的診斷價(jià)值。所有分析均使用STATA 12.0軟件進(jìn)行。

1.4COL5A2與臨床病理特征的相關(guān)性分析 從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載原發(fā)性胃癌患者的臨床病理資料，選取有年齡(age)、性別(gender)、分級(jí)(garde)、TNM分期(TNM stage)、浸潤(rùn)深度(Invasion depth)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(Lymph node metastasis)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(Distant metastasis)等臨床病理資料的胃癌組織標(biāo)本進(jìn)行進(jìn)一步分析。最后，根據(jù)COL5A2的中位數(shù)表達(dá)值將293例患者分為COL5A2高表達(dá)組和低表達(dá)組。采用卡方檢驗(yàn)分析COL5A2表達(dá)水平與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1.5COL5A2對(duì)胃癌預(yù)后分析 利用Gene Expression Profiling Interactive Analysis (GEPIA)[12](http://gepia.cancer-pku.cn/index.html)網(wǎng)站基于TCGA數(shù)據(jù)和Kaplan Meier繪圖儀在線數(shù)據(jù)庫(kù)(http://kmplot.com/analysis/)分析COL5A2表達(dá)在胃癌患者中的預(yù)后價(jià)值。COL5A2使用的檢查探針I(yè)D為221730_at，并計(jì)算95 %置信區(qū)間的對(duì)數(shù)秩P值和危險(xiǎn)比(HR)。從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載原發(fā)性胃癌患者的生存數(shù)據(jù),采用R版本3.6.1軟件，通過(guò)“Survminer”和“Survminer”軟件包，利用單因素Cox回歸分析和多因素Cox分析確定獨(dú)立的預(yù)后因素。

1.6基因集富集分析(GSEA) 從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)下載的375例胃癌患者中，根據(jù)COL5A2表達(dá)的中位數(shù)將其分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。GSEA檢測(cè)兩組中排名靠前的基因富集的通路。對(duì)于每個(gè)分析，基因集排列的數(shù)量被設(shè)置為1 000。用標(biāo)稱(chēng)(NOM)P值、假發(fā)現(xiàn)率(FDR)和歸一化富集評(píng)分(NES)來(lái)識(shí)別每種表型的富集途徑。

1.7與COL5A2共表達(dá)的基因分析 利用Coexpedia數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.coexpedia.org/search.php)對(duì)COL5A2的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行評(píng)估，以篩選與COL5A2相互作用的基因[13]。篩選出5個(gè)與COL5A2共表達(dá)并且與胃癌生存預(yù)后相關(guān)的基因進(jìn)行進(jìn)一步分析，并在TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)中驗(yàn)證它們與COL5A2的相關(guān)性。

1.8統(tǒng)計(jì)分析 統(tǒng)計(jì)分析采用STATA 12.0和R 3.6.1軟件。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析TCGA和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中COL5A2 mRNA在胃癌組織和正常組織中的差異表達(dá)水平。皮爾遜卡方檢驗(yàn)用于分析BICC1和臨床特征變量之間的關(guān)聯(lián)。采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行單因素和多因素分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1COL5A2在胃癌細(xì)胞中高表達(dá) 與GSE-1相比，胃癌細(xì)胞中的COL5A2表達(dá)增高(圖1)。

圖1 COL5A2在胃癌細(xì)胞中差異表達(dá)圖

2.2基于TCGA和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)的COL5A2 mRNA表達(dá)水平 通過(guò)TIMER分析TCGA RNA-SEQ數(shù)據(jù)來(lái)評(píng)估不同人類(lèi)腫瘤中的COL5A2轉(zhuǎn)錄水平(圖2)。胃癌組織中COL5A2 mRNA的表達(dá)高于正常胃組織。此外，與正常組織相比，COL5A2在乳腺浸潤(rùn)癌(BRCA)、膽管癌(CHOL)、結(jié)腸腺癌(COAD)、食管癌(ESCA)、頭頸部癌(HNSC)、腎臟透明性細(xì)胞癌(KIRC)、胃癌等組織中高表達(dá)。在腎癌(KICH)、子宮內(nèi)膜癌(UCEC)、腎乳頭狀細(xì)胞癌(KIRP)組織中表達(dá)降低。這些結(jié)果表明，COL5A2在多種腫瘤中異常表達(dá)。使用TCGA和GEO數(shù)據(jù)進(jìn)一步評(píng)估了COL5A2在胃癌組織中的表達(dá)水平，通過(guò)排除標(biāo)準(zhǔn)從GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中選擇了包含胃癌組織和正常胃組織樣本的17個(gè)數(shù)據(jù)集(GSE13861,GSE26899,GSE26942,GSE29272,GSE30727, GSE33429,GSE13911,GSE19826,GSE27342,GSE54129,GSE63089,GSE64951,GSE65801,GSE79973,GSE84787,GSE112369,GSE118916)，TCGA數(shù)據(jù)和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)的17個(gè)數(shù)據(jù)集共包括1 387例胃癌組織和568例正常組織(表2)。在TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)和17個(gè)GEO數(shù)據(jù)集分析中(除GSE30727)，COL5A2在GC組織中的表達(dá)水平高于正常組織(圖3)。隨后對(duì)GC中COL5A2的表達(dá)水平進(jìn)行了薈萃分析，GC組織中的COL5A2表達(dá)相比正常組織中表達(dá)上調(diào)[SMD=1.31，95 %置信區(qū)間(CI)：1.19-1.42；P<0.001](圖4A)。Begg's檢驗(yàn)(P=0.34)和漏斗圖中未發(fā)現(xiàn)明顯的出版偏倚(圖4B)?？傮w而言，這些結(jié)果表明COL5A2在胃癌組織中的表達(dá)高于正常組織。

圖2 COL5A2在多種腫瘤中差異表達(dá)圖

圖3 相對(duì)于正常組織COL5A2在胃癌組織中高表達(dá)(除GSE30727)

圖4 COL5A2表達(dá)的森林圖(A)和漏斗圖(B)

表2 TCGA數(shù)據(jù)和GEO數(shù)據(jù)集信息匯總

2.3COL5A2在GC患者中的診斷價(jià)值 繪制TCGA數(shù)據(jù)和GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的17個(gè)數(shù)據(jù)集的ROC曲線(圖5)，GEO數(shù)據(jù)庫(kù)的15個(gè)數(shù)據(jù)集(除GSE26942,GSE30727)和TCGA數(shù)據(jù)顯示出較強(qiáng)的診斷潛力(P<0.05)。進(jìn)一步對(duì)TCGA數(shù)據(jù)和GEO數(shù)據(jù)進(jìn)行薈萃分析，對(duì)來(lái)自18個(gè)COL5A2研究的SEN和SPE數(shù)據(jù)進(jìn)行了匯總，并以森林圖的形式顯示。從敏感性和特異性的數(shù)據(jù)來(lái)看，研究之間存在異質(zhì)性(分別為I2=76.77 %和I2=86.02 %)(圖6)，因此在分析中選擇隨機(jī)效應(yīng)模型。森林圖結(jié)果：(1)SEN：0.80(95 %CI：0.76-0.85)(圖6A);(2)SPE：0.88(95 %CI：0.79-0.93)(圖6B);(3)PLR：5.61(95 %CI：3.24-9.71)(圖6C);(4)NLR：0.25(95 %CI：0.20-0.31)(圖6D);(5)DOR：24.41(95 %CI：13.12-45.40)(圖6E);(6)通過(guò)繪制綜合受試者工作特征曲線(SROC)并計(jì)算AUC來(lái)評(píng)估診斷的準(zhǔn)確性(AUC=0.88,95 %CI：0.85-0.91)(圖6F)。此外，進(jìn)行Fagan列線圖評(píng)估COL5A2的臨床實(shí)用性，如圖所示(圖6G)，結(jié)果表明，如果將前檢測(cè)概率設(shè)置為20 %，PLR為7，后檢測(cè)概率為52 %，NLR為0.22，后檢測(cè)概率將降至5 %。Deek檢驗(yàn)漏斗圖未發(fā)現(xiàn)明顯的出版偏倚(P=0.5)(圖6H)。

圖5 COL5A2表達(dá)的ROC曲線圖

圖6 COL5A2對(duì)腫瘤診斷的SEN森林圖(A)，SPE森林圖(B)，PLR森林圖(C)，NLR森林圖(D)，DOR森林圖(E)，SROC曲線(F)，F(xiàn)agan圖(G)，DEEK漏斗圖(H)

2.4胃癌患者COL5A2的表達(dá)與臨床變量的關(guān)系 胃癌患者的性別、TNM分期、浸潤(rùn)深度和生存狀態(tài)間COL5A2的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。年齡、分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移間COL5A2的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 胃癌患者COL5A2表達(dá)水平與臨床病理變量的關(guān)系

2.5COL5A2是胃癌中一個(gè)獨(dú)立的不良預(yù)后因素 COL5A2的高表達(dá)均與較短的總生存期相關(guān)，如圖7A(Hr=1.5，P=3.1e-12)和圖7B(Hr=1.3，P=3.1e-12)所示。COX單因素生存分析顯示，年齡(P=0.0072)、TNM分期(P=0.0002)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.0012)和COL5A2表達(dá)是影響胃癌患者生存時(shí)間的重要因素，見(jiàn)表4。多變量Cox生存分析顯示，年齡和COL5A2表達(dá)是胃癌患者不良預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素(均P<0.05；圖7C)?？傮w而言，提示COL5A2是一個(gè)不利的預(yù)后因素和獨(dú)立的預(yù)后標(biāo)記物。

圖7 胃癌患者COL5A2高表達(dá)與生存率差有關(guān)(A)，GEPIA使用TCGA數(shù)據(jù)分析COL5A2高和COL5A2低GC患者的總體生存率(B)，在Kaplan-Meier繪圖儀數(shù)據(jù)庫(kù)中使用GSE14210(n=145)、GSE15459(n=200)、GSE22377(n=43)、GSE29272(n=268)、GSE51105(n=94)和GSE62254(n=300)數(shù)據(jù)集分析COL5A2高和低COL5A2患者的總生存率(C)多因素Cox分析顯示不同因素的危險(xiǎn)比(HR)

表4 單因素Cox分析顯示不同臨床變量的危險(xiǎn)比(HR)

2.6GSEA識(shí)別GC中與COL5A2相關(guān)的信號(hào)通路 對(duì)COL5A2低表達(dá)和高表達(dá)的樣本進(jìn)行了GSEA分析，以預(yù)測(cè)COL5A2相關(guān)的信號(hào)通路。178條信號(hào)通路中有159條上調(diào)，其中9條信號(hào)通路在NOMP<0.05、FDR<0.25和NES>1.5處豐富，其中4條與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。高COL5A2組參與胃癌發(fā)生的相關(guān)術(shù)語(yǔ)有“DNA錯(cuò)配修復(fù)(DNA mismatch repair,MMR)”、“嘌呤代謝(Purine metabolism)”、“核苷酸切除修復(fù)(Nucleotide excision repair)”、“基底切除修復(fù)術(shù)(Base excision repair)”富集結(jié)果的匯總?cè)鐖D8A-D所示。

圖8 COL5A2高表達(dá)樣本中富集的GSEA通路圖

2.7GC中與COL5A2共表達(dá)的基因分析 利用Coexpedia進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘，篩選出與COL5A2共表達(dá)的基因(圖9)。通過(guò)邊緣LLS分?jǐn)?shù)篩選出與COL5A2共表達(dá)的前5個(gè)與胃癌患者總體生存率較差的相關(guān)基因，包括V型膠原α1鏈(collagen type V alpha 1 chain,COL5A1)、I型膠原α1鏈(collagen type I alpha 1 chain,COL1A1)、Versican(VCAN)、骨膜素(periostin，POSTN)、ADAM金屬肽酶結(jié)構(gòu)域12(ADAM metallopeptidase domain 12,ADAM12)。并在TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)中驗(yàn)證了COL5A2與這些基因的相關(guān)性,結(jié)果表明，COL5A2與COL5A1(r=0.918，P=1.09e-167)、COL1A1(r=0.906，P=2.41e-156)、VCAN(r=0.875，P=5.87e-132)、POSTN(r=0.859，P=3.99e-122)、ADAM12(r=0.812，P=1.89e-98)呈正相關(guān)(圖10)。COL5A2及其共表達(dá)基因可能共同促進(jìn)了胃癌的發(fā)生。

圖9 胃癌中COL5A2共表達(dá)基因網(wǎng)絡(luò)圖藍(lán)色表示與胃癌患者總體生存率較差顯著的相關(guān)基因，包括COL5A1、COL1A1、VCAN、POSTN、ADAM12

圖10 COL5A2與其共表達(dá)基因相關(guān)性圖

3 討論

胃癌是人類(lèi)消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤,盡管過(guò)去幾十年來(lái)胃癌的診斷和治療策略有了很大的改善，但胃癌患者的預(yù)后仍然很差。臨床上用于GC早期檢測(cè)的腫瘤標(biāo)志物包括癌胚抗原(CEA)、碳水化合物抗原(CA)-CA19-9、CA72-4、CA125、CA24-2、CA50，以及胃蛋白酶原和甲胎蛋白(AFP)[14]。然而，這些血清生物標(biāo)志物的特異性和敏感性很差，迄今為止，沒(méi)有一種是GC診斷的唯一方法[15]。目前胃癌發(fā)生的分子機(jī)制尚不清楚，研究表明基因表達(dá)異?？赡軈⑴c腫瘤的發(fā)生，并可成為診斷腫瘤的標(biāo)志物[16-17]。最近的研究表明，基于GEO數(shù)據(jù)集和TCGA數(shù)據(jù)已經(jīng)確定了不同類(lèi)型的基因生物標(biāo)志物。例如，基于生物信息學(xué)分析Ⅰ型膠原α2鏈(collagen type I alpha 2 chain，COL1A2)是一種新的提高胃癌臨床預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物[18]。薈萃分析和生物信息學(xué)分析表明FKBP脯氨酰異構(gòu)酶10(FKBP prolyl isomerase 10,FKBP10)可能是治療GC的潛在治療靶標(biāo)[19]。

然而，胃癌發(fā)生的分子機(jī)制尚不清楚。本文通過(guò)薈萃分析證實(shí)COL5A2在胃癌組織中的表達(dá)增高。從薈萃分析的結(jié)果中可知COL5A2的表達(dá)對(duì)胃癌的診斷有價(jià)值。并且COL5A2的表達(dá)與與胃癌患者的性別、TNM分期、浸潤(rùn)深度和生存狀態(tài)相關(guān)。此外，COL5A2過(guò)表達(dá)與預(yù)后不良和總生存率相關(guān)?？傮w而言，本研究的結(jié)果表明COL5A2可能是參與GC發(fā)育的關(guān)鍵靶基因。

為了研究COL5A2在胃癌發(fā)生中的分子功能和潛在機(jī)制，進(jìn)行了GSEA探索富含高COL5A2表達(dá)樣品的途徑，并鑒定了4種上調(diào)途徑(與胃癌發(fā)生發(fā)展有關(guān))。高COL5A2組參與胃癌發(fā)生的相關(guān)術(shù)語(yǔ)有“DNA錯(cuò)配修復(fù)(DNA mismatch repair, MMR)”、“嘌呤代謝(Purine metabolism)”、“核苷酸切除修復(fù)(Nucleotide excision repair)”、“基底切除修復(fù)術(shù)(Base excision repair)”。缺失的DNA錯(cuò)配修復(fù)(MMR)導(dǎo)致了一種稱(chēng)為微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)的強(qiáng)突變表型，MSI是20 %的胃癌中發(fā)生胃癌的主要途徑[20]。Y V Dumanskiy等人研究表明胃腺癌患者中觀察到嘌呤代謝紊亂，嘌呤代謝紊亂程度可反映了病程的嚴(yán)重性，并與腫瘤過(guò)程定位有關(guān)，有預(yù)測(cè)價(jià)值[21]。Jingwei Liu等人的研究中核苷酸切除修復(fù)途徑可增加患胃癌和萎縮性胃炎的風(fēng)險(xiǎn)[22]。這些研究表明COL5A2可能參與了胃癌相關(guān)的KEGG通路。COL5A2可能通過(guò)影響這些信號(hào)通路促進(jìn)胃癌的發(fā)生發(fā)展。

COL5A2共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)和TIMER數(shù)據(jù)庫(kù)分析結(jié)果表明，COL5A2與COL5A1、COL1A1、VCAN、POSTN、ADAM12有很強(qiáng)的相關(guān)性。如HOTAIR通過(guò)刺激miR-1277-5p并上調(diào)COL5A1來(lái)調(diào)節(jié)GC的生長(zhǎng)，而COL5A1介導(dǎo)的GC細(xì)胞增殖是通過(guò)對(duì)腫瘤微環(huán)境的影響而介導(dǎo)的[23]。Quan Wang等人研究表明miR-129-5p通過(guò)選擇性抑制COL1A1從而抑制GC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲[24]。Ye Cheng等人的實(shí)驗(yàn)中，高VCAN表達(dá)的GC患者進(jìn)展后生存率(PPS)、首次進(jìn)展(FP)和總生存率(OS)較低，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示VCAN基因敲除抑制、增殖、侵襲和遷移GC細(xì)胞水平，而VCAN的過(guò)度表達(dá)則起相反的作用[25]。Hai Zhong等人研究研究表明骨膜炎素表達(dá)逐漸增加，與無(wú)病生存率和總生存率密切相關(guān)。免疫組化和Western印跡分析表明，POSTN蛋白在胃癌組織和轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)明顯高于癌旁正常胃粘膜組織。另外，POSTN在進(jìn)展期胃癌組織中的表達(dá)高于早期胃癌組織，并且POSTN在永生化人胃癌細(xì)胞系中的異位表達(dá)可增加胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲[26]。Takaya Shimura 等人的研究中，ADAM12在胃癌組織和尿中高表達(dá)，尿中ADAM12可作為胃癌潛在診斷標(biāo)志物[27]。COL5A2及其共表達(dá)基因可能共同參與了胃癌的發(fā)生，導(dǎo)致胃癌患者生存率較低。

綜上所述，本文證實(shí)COL5A2在胃癌中的高表達(dá)，對(duì)胃癌具有診斷價(jià)值，進(jìn)一步分析了COL5A2在胃癌中的預(yù)后作用及潛在分子機(jī)制，COL5A2可作為胃癌的診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。