基于水產品中喹諾酮類和磺胺類獸藥殘留檢測方法與思路分析

李新

摘要：磺胺類藥物與喹諾酮類藥物是一種人工合成的抗菌藥物，目前主要用于集約化養殖當中，如果使用量過多或者不遵守休藥期規定會導致藥物殘留在水產品當中，危害人們健康。近年來國際組織對牲畜和水產品中的獸藥殘留最大允許殘留限量作出明確規定，同時檢測技術也在不斷進步，以下對相關內容進行分析。

關鍵詞：水產品;喹諾酮類;磺胺類;獸藥殘留;檢測方法

一、當前水產品獸藥殘留常用檢測方法

超高效液相串聯質譜法不需要對樣品衍生化處理，能夠同時對多個目標物測定，體現出靈活性高、選擇性廣的優勢，目前這一技術已經在食品安全分析中廣泛利用。QuEChERS是農產品檢測的快速樣品前處理技術，具有操作簡單、檢測速度快、價格低廉、安全性高的優勢。問世以來，在農藥殘留檢測中得到了普遍利用。目前已逐步用于獸藥殘留檢測當中，能夠分析肉制品中磺胺類獸藥的殘留，有相關研究人員對紅霉素、泰勒菌素、北里霉素、硝沙霉素以及恩諾沙星、丹諾沙星、環丙沙星、沙拉沙星、林可霉素惡喹酸在內的10幾種殘留物檢測，方法為在線固相萃取液相色譜-串聯質譜法，我國相關人員借助HPLC-MS/MS內標法對水產品當中18種磺胺類藥物的殘留含量進行分析，不過這兩種檢測手段較為繁瑣，并且檢測成本偏高，以下就喹諾酮類和磺胺類獸藥殘留檢測進行深入分析。

二、喹諾酮類和磺胺類獸藥殘留檢測技術

（一）材料與儀器準備

在分析過程中主要利用的儀器包括超高效液相色譜串聯四級桿質譜聯用儀、天平、旋轉蒸發儀、離心機、氮吹濃縮儀，使用材料包括超純水、乙腈、甲醇、甲酸、C18填料;醋酸為優級純、無水硫酸鈉為分析純。標準物質如下：吡哌酸、西諾沙星、萘啶酸、諾氟沙星、氧氟沙星、依諾沙星、單諾沙星、環丙沙星、洛美沙星、氟甲喹、恩諾沙星、沙拉沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺二甲嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶鈉、磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪、磺胺多辛、磺胺甲惡唑、磺胺異惡唑、磺胺地索辛。標準溶液和內標溶液配置方法如下：乙腈溶劑配制質量濃度范圍0.2mg/mL-1mg/mL，將其作為標準儲備溶液，并放置在-18℃或者4℃的避光條件下，保存為期三個月。再配置成10 mg/mL的標準中間液，保存時間為30天。之后借助初始流動相對中間液稀釋，之后稀釋成為滿足標準工作液的要求，保存7天。

（二）樣品前期處理

需要選取具有代表性的脊背部魚肉，先進行破碎處理，之后再把蝦類、貝類中可食部分破碎，將脊背部魚肉、蝦類、貝類共同放置在-18℃環境下保存，把破碎魚肉樣品（2g）放在規格為50 mL的離心管內部，技術人員加入10μg內標溶液，后續加入10 mL 1%的醋酸、乙腈搖勻，之后使用離心機轉數設定為5000r/min，持續旋轉5 min，盛出上部清液，轉移到另一離心管內，該步驟重復兩次，然后將提取的溶液合并。將提取的液體放在含有Na2SO4的離心管當中，溶液重量為5g，完成離心后將上部清液取出，在原底燒瓶當中處于40℃、60r/min的減壓條件下蒸發，發之后加入甲醇5mL，再次轉移到裝滿C18填料的離心管中，之后使用乙醇8mL洗滌圓底燒瓶，完成以上操作對上部清液收集，使用氮氣吹干，然后加入2mL流動相，經0.22μm濾膜過濾。

（三）色譜-質譜條件

選取WatersBEHC181.7μm，2.1mm×100mm為色譜柱，流動相A為0.1%甲酸水，B為乙腈，梯度洗脫程序如表一：

采用正離子模式掃描，并且利用多反應監測采集方法，其中霧化氣壓力為413.8kPa、輔助氣壓力為413.8kPa、氣簾氣壓力為206.9kPa、離子源溫度為551℃、電噴霧電壓（IS）：5400V，質譜參數見表二：

（四）優化提取劑

在水產品中獸藥多殘留同時測定過程中，關鍵在于對提取方式合理選擇，提取溶劑主要包括有甲醇、醋酸乙酯、乙腈。研究發現醋酸乙酯、甲醇溶液提取過程中不易去除油脂等雜質，并且對蛋白的沉積效果不明顯。乙腈可減少從組織中提取出的脂肪含量，并且具有蛋白沉積效果，所以本次研究選擇乙腈作為提取溶劑，分別為乙腈、1%醋酸、5%醋酸乙腈，之后優化提取劑的酸度。

（五）優化質譜和色譜條件

質譜條件中的去阻電壓和碰撞能量大小對離子分度影響明顯，并且與方法靈敏度關系密切。本次實驗使用的已經配制濃度為25 ng/mL標準品。

在液相檢測過程中，甲醇和乙腈為流動相。在利用以氫作為流動相時容易定量。由于甲酸可以起到提升離子化效果，檢測方法更加靈活，所以在試驗的有機相中加入0.1%的甲酸。色譜圖如下：

結束語：

綜上所述，本次研究分析了石斑魚、鯉魚、鰱魚等樣本，利用1%醋酸、乙腈提取，前處理方法選擇QuEChERS，流動相選擇水、乙腈（都含有0.1%甲酸），建立了UPLC-MS/MS，形成了測定水產品中獸藥殘留的方法。最終實驗結果如下：回收率為69%-124%，相對標準偏差為1%-19%，檢測周期短，不需要理由特殊實驗裝置，并且實驗成本低，有利于大批量水產品獸藥殘留檢測研究。

參考文獻：

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