養陰止渴丸對糖尿病模型大鼠血糖水平的影響

王 海，張世龍，付娟芝

慶陽市第二人民醫院，甘肅 慶陽745000

中醫認為糖尿病（diabetes mellitus，DM）屬于“消渴”“肥胖”范疇［1-3］，其發病的主要因素為稟賦異常、五臟柔弱、素體陰虛、過食肥甘、情志失調，稟賦異常為內因，飲食情志為誘因，內外因相結合而致［4-8］。現代醫學認為，環境因素、肥胖、飲食結構不合理、熱量攝入過多、體力活動減少、吸煙等是其主要誘發因素［9］。養陰止渴丸由黃芪、太子參等17味中藥組成，具有清熱生津，益氣養陰的功效。本實驗應用動物模型對其調節血糖作用進行研究［10-13］，現報道如下：

1 材料與方法

1.1 實驗動物Wistar大鼠SPF級72只，體質量180～220 g，雌雄各半，實驗動物生產許可證號：SCXK（甘）2011-0004。昆明種小鼠SPF級60只，體質量（20±2）g，雌雄各半，實驗動物生產許可證號：SCXK（甘）2011-0004。實驗動物由甘肅中醫藥大學實驗動物中心提供，飼喂標準飼料，溫度20±2℃，相對濕度60%～70%，大鼠適應7天后開始實驗，小鼠適應3天后開始實驗。

1.2 藥物及儀器養陰止渴丸（以下簡稱ZKW）（慶陽市第二人民醫院制劑室制備，批號：160401，規格：60 g/瓶）；格列本脲片［上海醫藥（集團）有限公司信誼制藥總廠，批號：160310，規格：2.5 mg/片］；四氧嘧啶（ALX，Sigma，批號：GA16908，規格：5 g/瓶），二甲雙胍腸溶片（山東力諾科峰制藥有限公司，批號：SC00825，規格：0.25 g/片）。HX502T型電子天平（浙江天東衡器廠）；三諾安穩血糖測試儀（長沙三諾生物傳感技術股份有限公司，YZB/湘0074-2008，B1116KD1522，試紙條批號：2135/7AL-2135/7AP）。

1.3 實驗方法

1.3.1 試藥制備1）大鼠受試藥物的制備：取養陰止渴丸40 g，研磨成粉末，加150 mL蒸餾水浸泡過夜，超聲提取30 min，過濾，取上清液，蒸餾水定容至100 mL，作為高劑量受試品；取高劑量受試品減半稀釋，為中劑量受試品；取中劑量受試品減半稀釋，為低劑量受試品。得高、中、低劑量分別為4.0、2.0、1.0 g/kg的受試藥物（相當于臨床成人日用量的14、7、3.5倍）。2）小鼠受試藥物的制備：取養陰止渴丸28.6 g，制備過程同大鼠受試藥物，得高、中、低劑量濃度分別為5.71、2.86、1.43 g/kg的受試藥物（相當于臨床成人日用量的20、10、5倍）。

1.3.2 大鼠實驗

1.3.2.1 分組及造模 取Wistar大鼠，雌雄兼用，禁食不禁水12 h，測定空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）為4.0～6.0 mmol/L的大鼠72只，隨機分為空白對照組，模型對照組，陽性對照組（鹽酸二甲雙胍片0.2 g/kg，相當于臨床成人日用量的7倍），ZKW高、中、低劑量組（4.0、2.0、1.0 g/kg，相當于臨床成人日用量的14、7、3.5倍），每組12只。按10 mL/kg體質量容積灌胃給藥，空白對照組和模型對照組灌服等量的生理鹽水，每日1次，連續30天。給藥第10天各組動物禁食不禁水12 h，測定各組大鼠FBG后，除空白對照組腹腔注射等容量生理鹽水外，其余各組大鼠一次性腹腔注射四氧嘧啶200 mg/kg［14-15］（溶于0.9%的生理鹽水），4.5～5.0 h后各組大鼠灌胃50%葡萄糖每只2.0 mL；72 h后大鼠FBG值≥11.1 mmol/L為糖尿病大鼠造模成功［9-14］。

1.3.2.2 觀察指標1）于給藥第0、10、20、30天稱各組大鼠體質量、24 h進食量飲水量及FBG；2）于大鼠股動脈取血，室溫放置6 h，離心半徑20 cm，4000 r/min離心15 min，分離血清，按試劑盒說明書采用放射免疫分析法（RIA）測定各大鼠血清胰島素，計算胰島素敏感性指數（insulin sensitive index，ISI）［15-17］。

1.3.3 小鼠實驗

1.3.3.1 分組及給藥 取小鼠，雌雄兼用，禁食不禁水12 h后測定FBG為4.0～6.0 mmol/L的小鼠60只，隨機分為空白對照組、陽性對照組（格列本脲片用量0.01 g/kg，相當于臨床成人日用量的10倍），ZKW高、中、低劑量組分別為5.71、2.86、1.43 g/kg，每組12只。空白對照組灌服等量的生理鹽水，其余各組按20 mL/kg體質量容積給予對應藥物灌胃，每日1次，連續7天。

1.3.3.2 觀察指標 第7天各組動物禁食不禁水12 h，進行糖耐量試驗（灌服葡萄糖水溶液1.5 g/kg），測定小鼠血糖值［18］。

1.4 統計學方法采用SPSS 17.0統計軟件處理，計量資料采用±s表示，多組間比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩組間比較采用t檢驗，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 大鼠實驗結果實驗過程中，模型對照組死亡3只，陽性對照組死亡1只，ZKW高劑量組死亡2只，ZKW中劑量組死亡2只，ZKW低劑量組死亡3只。

2.1.1 大鼠體質量 給藥第10天，各組大鼠體質量正常增加，組間比較差異無統計學意義（P＞0.05）；給藥第20天，模型對照組、ZKW各劑量組大鼠體質量明顯減少，與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；給藥第30天，陽性對照組和ZKW高、中、低劑量組大鼠體質量降低，與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；陽性對照組、ZKW高劑量組與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠不同時間點體質量比較（±s）

表1 各組大鼠不同時間點體質量比較（±s）

注：與空白對照組比較，**表示P＜0.01；與模型對照組比較，#表示P＜0.05；-表示無數值

?

2.1.2 大鼠飲食量 給藥第20天，模型對照組，ZKW中、低劑量組與空白對照組比較，日進食量和日飲水量均明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05）；陽性對照組、ZKW高劑量組大鼠日進食量和飲水量相對減少，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。給藥第30天，模型對照組和ZKW各劑量組大鼠進食量均增大，與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；ZKW高劑量組大鼠的飲水量較少，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2—3。

表2 各組大鼠日進食量比較（±s）

表2 各組大鼠日進食量比較（±s）

注：與空白對照組比較，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；與模型對照組比較，##表示P＜0.01，＃表示P＜0.05；-表示無數值

?

2.1.3 大鼠FBG給藥第20天，模型對照組、ZKW各劑量組大鼠血糖明顯升高，與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；ZKW各劑量組與模型對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。給藥第30天，陽性對照組、ZKW各劑量組大鼠血糖明顯降低，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 各組大鼠不同時間點FBG比較（±s）

表4 各組大鼠不同時間點FBG比較（±s）

注：與空白對照組比較，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05；與模型對照組比較，##表示P＜0.01，＃表示P＜0.05；-表示無數值

?

2.1.4 大鼠血清胰島素及ISI給藥第30天各組大鼠血清胰島素水平明顯降低，模型對照組大鼠ISI明顯升高，與空白對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.01）；陽性對照組ZKW高、中劑量組大鼠ISI明顯降低，與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表5。

表5 各組大鼠血清胰島素和ISI比較（±s）

表5 各組大鼠血清胰島素和ISI比較（±s）

注：與空白對照組比較，**表示P＜0.01；與模型對照組比較，#表示P＜0.05；-表示無數值

?

2.2 小鼠糖耐量實驗給藥第7天，ZKW各劑量組小鼠空腹血糖均降低的趨勢，呈量-效關系，但與空白對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。給藥第7天進行糖耐量試驗，在30、60、120 min各組血糖均明顯升高；ZKW高、中劑量組小鼠在各時間點血糖有降低的趨勢，與空白對照組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表6。

表3 各組大鼠日飲水量比較（±s）

表3 各組大鼠日飲水量比較（±s）

注：與空白對照組比較，*表示P＜0.05；與模型對照組比較，#表示P＜0.05；-表示無數值

?

表6 各組小鼠不同時間點血糖比較（±s）

表6 各組小鼠不同時間點血糖比較（±s）

注：與空白對照組比較，*表示P＜0.05

?

3 討論

中醫認為消渴病的病因病機主要有以下4個方面：一是稟賦不足；二是飲食失節；三是情志失調；四是勞欲過度。養陰止渴丸是慶陽市第二人民醫院內分泌科張世龍主任醫師臨床經驗方。方中黃芪、生地黃、太子參益氣養陰，生津止渴；葛根、桑白皮、夏枯草、地骨皮清泄三焦之火，養陰潤燥；苦瓜、黃連、知母、玄參清熱瀉火，生津潤燥；丹參、荔枝核、鬼箭羽疏肝理氣，活血化瘀；蒼術健脾化濕、和胃；仙鶴草解毒補虛。諸藥合用使陰液得復、脈絡通利、燥熱自消。

本研究結果表明，養陰止渴丸對DM模型大鼠、小鼠有一定的治療作用，能降低模型大鼠空腹血糖、改善ISI，但對正常血糖無明顯影響，且增加正常小鼠的糖耐量。