福建省種雞J亞群禽白血病的流行病學調查

陳秀琴，張世忠，鄭 敏，林 甦，朱志明，黃梅清*，林鋒強* (.福建省農業科學院 畜牧獸醫研究所/福建省畜禽疫病防治工程技術研究中心，福建 福州35003；2.吉林大學 人獸共患病研究所/人獸共患病研究教育部重點實驗室，吉林 長春 30062)

禽白血病(avian leukosis,AL)是由反轉錄病毒科α反轉錄病毒屬的禽白血病病毒(avian leucosis virus,ALV)引起禽類的一類腫瘤性疾病[1]。根據病毒血清中和試驗、囊膜糖蛋白、宿主范圍和病毒干擾模式的不同，可將ALV劃分為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K共11個亞群[2-4]。只有 A、B、C、D、E、J、K 7個亞群可以自然感染雞群[2]，其中E亞群是內源性病毒，通常致病性弱甚至無致病性，其余亞群均為外源性病毒，具有較強的致病性[5]。1988年，英國科學家首先從白羽肉雞中分離到對雞致病性更強的J亞群禽白血病病毒(ALV-J)[3]，隨后在世界各地廣泛傳播，給全球養禽業帶來巨大的經濟損失[6]。1999年至今，我國已先后報道從雞群中分離到ALV-J毒株[1,7-9]，特別是自2007年以來，我國多地的蛋雞場暴發以血管瘤為特征的J亞群AL[10]。外源性ALV的傳播方式包括水平傳播和垂直傳播兩種。水平傳播是通過接觸ALV感染雞或被ALV污染的物品，通常造成短暫的病毒血癥[3]。絕大多數水平傳播都發生在出殼后的雛雞階段。被接觸感染的雞都是由于與先天感染的雞的直接接觸而被感染[11]。垂直傳播是ALV最重要的傳播方式，感染雞可產生持久的病毒血癥[3]。母雞和公雞都可以將ALV-J傳播給下一代[11]。

ALV感染對雞群的危害體現在兩方面：首先，ALV誘發腫瘤導致死亡，但死亡率通常較低(1%～2%)；其次，ALV感染雞可發生亞臨床感染，導致產蛋下降、免疫抑制或生長緩慢。而由ALV感染導致的繼發感染所帶來的損失可能遠遠大于由于腫瘤致死造成的經濟損失[2]。目前，尚無預防AL的有效疫苗，主要依靠種源凈化[12]。

為了解福建省種雞感染ALV的情況和進一步開展福建地區垂直性傳播病毒病凈化工作，本研究采集了福建省不同地區、不同品系種雞的血清和初產蛋，對采集樣品分別進行了ALV-J抗體檢測和ALV p27抗原檢測。

1 材料與方法

1.1 樣品來源及養殖場概況分別從福州、莆田、龍巖3個地區6個種雞場采集2 470份血樣和2 848 枚初產蛋。各種雞場的生產性能、種源管理情況和疫病凈化情況分別見表1，2，3。

表1 各種雞場的生產性能

每個雞場隨機抽取一定數量的健康雞進行翅下靜脈采血，5 000 r/min離心10 min分離血清，-20℃ 保存備用。

表2 各種雞場的種源管理情況

表3 各種雞場的疫病凈化情況

1.2 ALV-J抗體檢測用ALV-J抗體檢測試劑盒(Avian Leukosis Virus Antibody Test Kit subgroup J，美國IDEXX)檢測ALV-J抗體，具體方法參照試劑盒說明書進行。ELx800光吸收酶標儀和洗板機均為美國伯騰儀器有限公司(BioTek)。

為了保證檢測結果的準確性，每份血清樣品設定1個重復，只有2次均為陽性可判定為陽性。如有可疑則將該樣品重復3次。

1.3 初產蛋中ALV p27抗原的檢測分別于種雞開產后1周內收集種蛋，每枚種蛋吸取1 mL稀蛋清反復凍融3次后，用ALV p27抗原檢測試劑盒(Avian Leukosis Virus Antigen Test Kit，美國IDEXX公司)檢測ALV特異性抗原p27，具體方法參照試劑盒說明書進行。

為了保證檢測結果的準確性，每份樣品設定1個重復，只有2次均為陽性可判定為陽性。如有可疑則將該樣品重復3次。

2 結果

2.1 各地區種雞ALV-J抗體檢測情況如表4所示，3個地區檢測的2 470份血清樣品中，共有114份為ALV-J抗體陽性，陽性率為4.62%；其中福州地區檢測1 185份血清，ALV-J抗體陽性率為5.23%(62/1 185)，莆田地區檢測1 116份血清，ALV-J抗體陽性率為2.87%(32/1 116)，龍巖地區檢測137份血清，ALV-J抗體陽性率為14.6%(20/137)。結果表明，龍巖地區的ALV-J抗體陽性率最高。公雞的ALV-J抗體總陽性率為3.02%(25/828)，母雞的ALV-J抗體總陽性率為5.42%(89/1 642)，表明福建省種公雞的ALV-J抗體總陽性率低于種母雞。對不同地區的公母種雞的ALV-J抗體陽性率進行比較發現相同的規律。

表4 福建省種雞場ALV-J抗體陽性率檢測結果

2.2 各地區種雞ALV p27抗原檢測情況如表5所示，本研究共收集2 848枚初產蛋用于檢測ALV p27抗原，有224份為陽性，總陽性率為7.87%；其中福州地區檢測2 177份蛋清，陽性率為0.83%(18/2 177)，莆田地區檢測298份蛋清，陽性率為62.4%(186/298)，龍巖地區檢測120份蛋清，陽性率為16.67%(20/120)。結果表明，莆田地區的ALV p27抗原陽性率最高，福州地區最低。對不同品系的種雞進行比較，發現不同品系的種雞都有不同程度的ALV p27抗原陽性檢出，福建省本地雞的ALV p27抗原陽性率明顯高于海蘭、羅曼和京紅。

表5 福建省種雞場ALV p27抗原檢測結果

2.3 不同用途雞群ALV檢測差異分析對蛋種雞和肉種雞的ALV-J抗體陽性率、ALV p27抗原陽性率進行比較，由圖1可知，蛋種雞ALV-J抗體陽性率略高于肉種雞，蛋種雞的ALV p27抗原陽性率明顯低于肉種雞。

圖1 不同用途雞群ALV流行病學比較

2.4 不同品系雞群ALV檢測差異分析對海蘭、京紅、羅曼和福建本地雞多個品系的ALV-J抗體陽性率、ALV p27抗原陽性率進行比較，由圖2，3可知，海蘭品系的ALV-J抗體陽性率和ALV p27抗原陽性率都很低。京紅和羅曼品系的ALV-J抗體陽性率分別達到了7.17%和10.68%，但是ALV p27抗原陽性率卻均低于2%。福建地方品系雞的ALV-J抗體陽性率和ALV p27抗原陽性率普遍高于大型種雞場培育的品系，特別注意的是，本地雞2的ALV-J抗體陽性率較低(2.87%)，但是ALV p27抗原陽性率卻達到了62.42%。

圖2 不同品系雞群ALV-J抗體陽性率比較

圖3 不同品系雞群ALV p27抗原陽性率比較

3 討論

AL可導致禽類免疫抑制，主要通過垂直傳播，無有效的疫苗，目前防制的方法主要是通過種源凈化。《國家中長期動物疫病防治規劃(2012—2020年)》中已經將AL列為需要優先凈化的禽病，并制定了“到2020 年全國所有種雞場達到凈化標準”的疫病凈化考核標準。

本研究對福建省3個地區6個種雞場進行AL感染調查，結果表明，不同品系的種雞群普遍感染ALV-J。ALV-J抗體總陽性率和ALV p27抗原總陽性率分別為4.62%和7.87%。此外，本研究發現本地雞2的ALV p27抗原陽性率為62.4%，遠遠高于ALV-J抗體陽性率2.87%，本地雞3也是類似的結果。李鑫等[13]對蛋雞場進行AL流行病學調查，同樣發現ALV p27抗原陽性率高于ALV-J抗體陽性率。這種現象一方面可能與ALV-J的垂直傳播有關。垂直傳播可導致雞產生免疫耐受感染，只有當免疫耐受的雞不再處于免疫耐受狀態時，機體才能產生相應的抗體[14]。另一方面可能是由于雞群中除了感染ALV-J外，還感染了馬立克氏病病毒和禽網狀內皮組織增生癥病毒等其他免疫抑制性病毒，抑制了ALV-J抗體的產生[15]。

將各個種雞場的生產性能、種源管理情況、疫病凈化情況與ALV的感染進行比較，結果顯示，福建省本地雞2和本地雞3的ALV p27抗原陽性率均遠高于大型種雞場培育的品系，而這兩個本地雞品系的死亡和淘汰率均高于大型種雞場培育的品系。提示ALV p27抗原陽性率與雞群的死亡和淘汰率存在一定的正相關性。趙鵬等[16]報道，種蛋中p27抗原檢出率越高，種雞群發病情況越嚴重，下游客戶雞群發病率和投訴率越高。此外還表明福建地方品系雞ALV感染嚴重。楊鳳等[10]對海蘭蛋雞、羅曼蛋雞、特佳蛋雞、尼克珊瑚粉蛋雞和蘆花雞進行AL流行病學調查，發現蘆花雞的ALV p27抗原陽性率高于進口蛋雞品系。貝懷國等[17]對江蘇安徽地區5個品系的父母代種雞及其中的3個子代雞群進行AL的檢測，發現某蛋雞品系的p27抗原陽性率高達49.77%。崔治中[18]研究表明，我國有些純地方品種雞群ALV-J的感染率相當高，且開始表現典型的髓細胞瘤和其他AL的病理變化。

場1和場2嚴格開展ALV凈化，ALV-J抗體陽性率和p27抗原陽性率普遍低于沒有開展ALV凈化的場，說明通過種源凈化是可以降低ALV感染率。本研究還發現，福建省種公雞的ALV-J抗體總陽性率低于種母雞。這可能是由于種母雞的血樣數量遠大于種公雞的血樣數量導致的。公雞和母雞對ALV的易感性是否存在顯著性差異，還有待進一步驗證。

鑒于福建省地方品種雞ALV感染率較高的問題，且沒有凈化的雞群對其他已實現凈化的規模化養殖場可能會造成威脅，種雞場有必要開展ALV種源凈化。雖然垂直傳播是ALV重要的傳播方式，但是水平傳播卻起著放大的效應。種蛋入孵前種蛋及孵化器的消毒、孵化環節的控制、出雛前的準備工作及人員的管理，堅持自繁自養，這些對ALV的凈化都發揮關鍵作用。同時鑒于國內活疫苗普遍存在外源性ALV污染的問題[15]，還要關注用雞胚或雞胚來源的細胞作為原材料生產的弱毒疫苗[18]。此外，結合實驗室開展ALV凈化和防控也很重要。首先，引進種雞前必須進行ALV檢疫。ALV容易發生變異和基因重組，隨著引種而帶入的ALV將對養殖場構成威脅[19]。其次，在育成雞轉群和種雞留種前還要定期檢測和監控雞群的感染狀態。總之，AL的凈化工作任重道遠，養殖場需要從飼養管理和實驗室檢測等方面多措并舉，才能盡快凈化ALV。