血管內皮生長因子、堿性成纖維細胞生長因子在宮頸癌中的表達及其與微血管密度的關系

劉松格，谷見法，潘瓊，易善永

鄭州大學附屬鄭州中心醫院腫瘤內科，鄭州 467000

宮頸癌是發病率僅次于乳腺癌的女性惡性腫 瘤，流行病學報道近年來宮頸癌逐漸呈現年輕化趨勢，嚴重威脅女性的生命健康。隨著分子生物學的發展，分子生物學指標在惡性腫瘤發生、發展過程中的作用得到逐步重視。血管生成被認為是腫瘤發展的重要病理改變，這一過程是在多種細胞因子調控下完成，目前研究已鑒定了多種與血管生成相關的因子。血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種具有高度特異性及選擇性的有絲分裂原，研究表明該生長因子在體外可誘導內皮細胞的增殖、遷移及凋亡，而在體內其可刺激血管內皮細胞的增殖從而促進血管的形成。堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）是調節神經及血管形成的多肽生長因子，廣泛分布于機體多種組織，對多種類型細胞的生長、分化及功能調節均有影響。本研究旨在探討宮頸癌患者VEGF、bFGF的表達水平與微血管密度（microvessel density，MVD）的關系，以期明確宮頸癌的發生發展過程中組織病理變化及相關因子表達的改變，為宮頸癌診斷及病情評估提供新思路，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年6月至2018年9月于鄭州大學附屬鄭州中心醫院行外科手術的宮頸癌患者。納入標準：初診患者；經病理組織學檢查確診為宮頸鱗狀細胞癌；臨床資料完整。排除標準：術前行其他抗腫瘤治療；合并其他全身性疾??；合并心腦血管疾?。缓喜⒕裥约膊　８鶕{入與排除標準，共選取118例宮頸癌患者作為宮頸癌組，年齡33～68歲，平均（51.48±10.27）歲。另選取同期鄭州大學附屬鄭州中心醫院收治的宮頸上皮內瘤變、宮頸炎患者，納入標準：液基薄層細胞檢測及臨床檢查提示為宮頸上皮內瘤變、宮頸炎；臨床資料完整。排除標準：合并全身性疾病、心腦血管疾病、精神性疾病。根據納入與排除標準，共選取71例宮頸上皮內瘤變患者作為瘤變組，年齡29～77歲，平均（50.96±8.88）歲；共選取50例宮頸炎患者作為對照組，年齡22～70歲，平均（51.26±9.02）歲。收集宮頸癌組織、宮頸上皮內瘤變組織、宮頸炎組織進行研究。

1.2 方法

使用免疫組織化學染色法檢測VEGF、bFGF的表達情況，試劑均由Santa Cruz公司提供，其中VEGF抗體稀釋濃度為1∶200，bFGF稀釋濃度為1∶500。所有組織標本均采用多聚甲醛固定，石蠟包埋，并采用切片機切取4 μm切片，切片脫蠟后采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗，以3%過氧化氫室溫孵育10 min以阻斷內源性過氧化物酶，PBS沖洗后加入5%牛血清孵育10 min；滴加一抗置于4℃環境下孵育過夜，沖洗后二抗室溫孵育20 min，沖洗后加入鏈親和素-過氧化物酶孵育20 min，沖洗后采用二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木精復染，經脫水、透明、封片等操作完成制片。在光學顯微鏡（日本奧林巴斯公司）下觀察切片，陽性細胞為細胞質呈彌散的棕黃色，對顯微鏡下視野內的陽性細胞進行計數，以陽性細胞百分率≥10%為陽性，陽性細胞百分率＜10%為陰性。結果判定由2名高年資病理學醫師獨立進行觀察，意見不一致的病例經探討后給出最終結論。

采用免疫組織化學染色法以CD34單克隆抗體標記測定MVD，染色方法同上，以與鄰近細胞、結締組織界限清晰且呈棕色染色的內皮細胞或細胞群作為一個血管，先在低倍鏡下尋找血管密度較高的5個區域，然后在高倍鏡下進行MVD計數，以5個區域的均值作為該樣本的MVD值。細胞計數由兩名高年資病理醫師在雙盲情況下進行，以兩位醫師計算的平均值作為最終結果。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 VEGF、bFGF表達情況的比較

宮頸癌組、瘤變組及對照組患者VEGF、bFGF陽性表達率比較，差異均有統計學意義（

P

＜0.01）；宮頸癌組、瘤變組患者VEGF、bFGF陽性表達率均明顯高于對照組（

P

＜0.01），且宮頸癌組患者VEGF、bFGF陽性表達率均明顯高于瘤變組（

P

＜0.01）。（表1、圖1）

表1 各組患者中VEGF、bFGF陽性表達情況的比較[ n（%）]

圖1 宮頸癌組織中VEGF、bFGF的陽性表達情況（免疫組織化學染色法）

2.2 MVD的比較

宮頸癌組、瘤變組及對照組患者中MVD計數依次為（37.41±5.27）、（27.84±4.59）、（15.42±4.25），三組比較差異有統計學意義（

F

=366.857，

P

＜0.01），宮頸癌組、瘤變組患者中MVD均明顯高于對照組（

P

＜0.01），且宮頸癌組MVD明顯高于瘤變組（

P

＜0.01）。

2.3 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中VEGF、bFGF陽性表達率及MVD的比較

不同國際婦產科聯盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期、淋巴結轉移情況宮頸癌患者宮頸癌組織中VEGF、bFGF陽性表達率的比較，差異均有統計學意義（

χ

=4.395、6.676，

P

=0.036、0.009）。不同分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移情況、腫瘤浸潤深度宮頸癌患者宮頸癌組織中MVD的比較，差異均有統計學意義（

t

=4.685、6.195、8.013、5.237，

P

＜0.01）。（表2）

表2 不同臨床特征宮頸癌患者宮頸癌組織中VEGF、bFGF陽性表達率及MVD的比較（ n=118）

2.4 宮頸癌組織中VEGF、bFGF陽性表達與MVD計數的相關性分析

Spearman相關性分析示，宮頸癌組織中VEGF、bFGF陽性表達與MVD呈正相關（

r

=0.529、0.601，

P

＜0.05）。

3 討論

研究認為，實體瘤的發生及轉移均與血管的生成相關，血管生成是腫瘤生長及浸潤的形態學基礎，也是其生物學行為中的重要部分，因此對血管生成的研究可明確良性疾病的惡變趨勢，也可反映惡性病灶的生物學行為。

本研究結果顯示，宮頸癌組及瘤變組患者VEGF、bFGF陽性表達率均明顯高于對照組，且宮頸癌組陽性表達率最高，提示VEGF、bFGF的高表達可能與宮頸癌的發生相關。采用CD34免疫組織化學染色方法測定各組織中的MVD，結果顯示，宮頸癌組織MVD明顯高于瘤變組及對照組，提示宮頸癌患者也可伴有MVD的增加。周慶紅等研究比較了宮頸癌組、宮頸瘤變組及宮頸炎組患者VEGF、bFGF表達水平，結果也證實宮頸癌組及宮頸瘤變組患者可伴有VEGF、bFGF陽性表達率升高，且宮頸癌組患者陽性表達率均高于宮頸瘤變組。梁志洪等對宮頸癌及宮頸息肉組織中

bFGF

mRNA表達情況分析證實，宮頸癌表達量明顯高于宮頸息肉組。Sidorkiewicz等研究證實，宮頸鱗狀細胞癌及腺癌中VEGF表達均明顯升高，與本研究結果相似。

本研究對不同臨床特征的宮頸癌患者進行研究，結果顯示，VEGF、bFGF陽性表達率可能與宮頸癌FIGO分期及淋巴結轉移有關，具體表現為宮頸癌FIGO分期越高其陽性表達率越高，伴有淋巴結轉移的患者陽性表達率越高，這一結果提示VEGF、bFGF的表達可能在宮頸癌進展、侵襲及轉移過程中具有重要作用。另外，在宮頸癌患者宮頸癌組織中，MVD與患者分化程度、FIGO分期及淋巴結轉移相關，提示MVD與腫瘤的發生及發展也存在密切關系。VEGF一方面可誘導新生毛細血管的生成為腫瘤生長提供營養及代謝，另一方面VEGF也可直接促進腫瘤細胞的生長；另外，新生血管內皮常有裂隙，VEGF可促進內皮細胞釋放膠原酶使腫瘤細胞及腫瘤組織分離、脫落，為腫瘤的轉移提供條件。目前關于VEGF及bFGF表達量與宮頸癌臨床特征的關系研究較多，但報道的相關性不盡相同。杜俊俊等的研究證實，宮頸癌患者VEGF表達與病理學分級及淋巴結轉移相關，而與病理組織學類型、FIGO分期無明顯相關。陳舒等證實不同FIGO分期與淋巴結轉移患者的VEGF陽性表達率差異顯著。國外一項研究證實，VEGF與宮頸癌組織病理學分級無明顯相關性，各研究存在一定差異的原因可能與研究對象、指標的陽性判斷標準差異相關。

如上文所述，宮頸癌患者宮頸癌組織中均可伴有VEGF、bFGF陽性表達率升高及MVD升高，對兩者關系進行研究可能可對MVD的形成機制有一定參考。本研究結果顯示，VEGF及bFGF陽性表達率與宮頸癌患者宮頸癌組織中MVD呈正相關，進一步證實VEGF、bFGF表達上調可能與MVD的升高存在密切關系，提示VEGF及bFGF陽性表達率的升高可能促進宮頸癌微血管新生能力，從而提高宮頸癌侵襲轉移能力的重要因素。目前已有靶向調控VEGF、bFGF從而實現抗腫瘤效應的報道。本研究證實了VEGF、bFGF與血管新生存在一定關系，或可為靶向治療提供一定參考。

綜上所述，宮頸癌組織中可伴有VEGF、bFGF陽性表達率的升高及MVD的升高，其升高與宮頸癌腫瘤侵襲性及病灶轉移相關，這些指標可作為宮頸癌診斷、病情評估的參考指標。VEGF、bFGF的表達與宮頸癌組織MVD密切相關，VEGF、bFGF表達水平的增加可能為宮頸癌組織微血管生成的重要機制之一，基于此，VEGF、bFGF可作為抗腫瘤血管生成、延緩病情進展的重要靶點，考慮到腫瘤血管生長因子的異質性，通過檢測個體生長因子的表達可為干預方案的制訂提供參考。