孕晚期婦女B族鏈球菌PCR檢測結(jié)果分析及其對(duì)妊娠結(jié)局的影響

孫春濤，盛優(yōu)靜

B族鏈球菌(GBS)又稱為無乳鏈球菌，為兼性厭氧革蘭氏陽性球菌，主要寄居于人類陰道和直腸中[1-2]。20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)B族鏈球菌能使新生兒出現(xiàn)嚴(yán)重感染[3]，進(jìn)而引起腦膜炎、敗血癥、肺炎等死亡率極高的疾病[4]。B族鏈球菌屬于孕婦圍產(chǎn)期危害性非常高的致病菌，也是孕產(chǎn)婦生殖道感染的致病菌[5]，一旦形成，會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)褥感染、早產(chǎn)、泌尿道感染等。此外還和孕婦胎膜早破、新生兒肺炎、胎兒生長受限等有關(guān)[6-7]，近年來受到了廣泛的關(guān)注[8]。本文探討孕晚期婦女B族鏈球菌PCR檢測結(jié)果，為孕晚期婦女B族鏈球菌的感染情況提供了數(shù)據(jù)支持；并降低圍生期孕婦感染和減少新生兒發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，提高母嬰預(yù)后質(zhì)量，采取積極有效的防治措施提供了依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取2016年6月-2019年3月于寧夏回族自治區(qū)婦幼保健院就診的446例產(chǎn)檢和分娩孕晚期婦女作為研究對(duì)象，年齡在19～37歲，平均為(27.22±1.35)歲，分娩經(jīng)驗(yàn)：40例(8.97%)經(jīng)產(chǎn)婦、406例(91.03%)初產(chǎn)婦。所有孕婦近期均未使用抗生素和性交。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集：兩根無菌棉拭子置于孕產(chǎn)婦陰道下1/3的位置，旋轉(zhuǎn)一圈，將分泌物取出；兩根無菌棉拭子插入孕產(chǎn)婦肛門，在括約肌上采集直腸分泌物，將采集的標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和PCR檢測。

1.2.2 細(xì)菌培養(yǎng)：采集所有研究對(duì)象的生殖道標(biāo)本行B族鏈球菌培養(yǎng) ,使用安圖公司 B族鏈球菌顯色培養(yǎng)基進(jìn)行篩查 ,對(duì)顯色為紫色的菌落進(jìn)行分離培養(yǎng)，然后將培養(yǎng)基置于5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h,培養(yǎng)溫度控制在35 ℃ ,完成上述培養(yǎng)操作后,對(duì)菌落 (圓形、表面光滑、有乳光、灰白色)用3%過氧化氫進(jìn)行觸酶試驗(yàn),對(duì)觸酶試驗(yàn)呈陽性者不作任何干預(yù) ,對(duì)陰性者行CAMP試驗(yàn)，CAMP 試驗(yàn)陽性則判為B族鏈球菌篩查陽性。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測：將采集到的樣本置于PCR專用采集管內(nèi)，24 h內(nèi)實(shí)施檢測操作。檢測前將樣本置于渦旋振蕩器混勻，吸取樣本1 000 μL加入離心管內(nèi)14 000 r離心5 min，棄去上清液，在沉淀中加入1 mL滅菌清洗液，震蕩重懸，再次離心5 min處理，棄去上清液，加入三羥甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸50 μL，高速漩渦震蕩，時(shí)間為5 min，在95 ℃環(huán)境下，加熱2 min，冰浴5 min，離心1 min，取5 μL上清液加入PCR反應(yīng)管中進(jìn)行擴(kuò)增[4]。

1.3 觀察指標(biāo)：觀察446例產(chǎn)檢和分娩孕晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢測結(jié)果和細(xì)菌培養(yǎng)基本情況，觀察菌落顏色、形態(tài)，觀察觸酶試驗(yàn)、CAMP實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用χ2檢驗(yàn)分析B族鏈球菌-DNA檢查為陰性、陽性與細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果之間的差異，以及對(duì)妊娠結(jié)局的影響，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 446例產(chǎn)檢和分娩孕晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢查和細(xì)菌培養(yǎng)情況：446例產(chǎn)檢和分娩孕晚期婦女經(jīng)過B族鏈球菌細(xì)菌培養(yǎng)后，陽性標(biāo)本為17例(3.81%)，陰性標(biāo)本為429例(96.19%)，經(jīng)B族鏈球菌-DNA檢查，陽性標(biāo)本為39例，其中2例為假陽性，陰性標(biāo)本為407例,以PCR法聯(lián)合細(xì)菌培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，細(xì)菌培養(yǎng)法檢測靈敏度45.95%，特異性100%；PCR法檢測靈敏度100%，特異性為99.51%。

2.2 兩種方法檢測結(jié)果：兩種方法檢測陽性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 446例孕晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢查和細(xì)菌培養(yǎng)情況[n(%)]

2.3 分娩晚期婦女B族鏈球菌-DNA檢查結(jié)果與妊娠結(jié)局的關(guān)系：B族鏈球菌檢查結(jié)果對(duì)妊娠結(jié)局產(chǎn)生影響(P<0.05)，B族鏈球菌陽性的妊娠期婦女更容易發(fā)生早產(chǎn)、宮內(nèi)感染及產(chǎn)后出血，見表2。

表2 B族鏈球菌-DNA檢測對(duì)妊娠結(jié)局影響情況[n(%)]

3 討論

隨著醫(yī)療水平的不斷提升，針對(duì)B族鏈球菌的檢測越來越受到重視，本研究選用的檢測方法為細(xì)菌培養(yǎng)和PCR。比較這兩種檢測方法發(fā)現(xiàn)，B族鏈球菌-DNA陽性檢出率明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)陽性檢出率，與黃永建[9]等的研究結(jié)果一致。在實(shí)施細(xì)菌培養(yǎng)檢測時(shí)會(huì)出現(xiàn)漏檢，在接種培養(yǎng)皿時(shí)受到環(huán)境、保存條件等影響，部分B族鏈球菌會(huì)出現(xiàn)死亡，從而影響檢出率；而實(shí)施熒光PCR檢測時(shí)，對(duì)于死亡的B族鏈球菌也能檢測到，因此，針對(duì)孕晚期婦女B族鏈球菌檢測時(shí)，PCR檢測方案的應(yīng)用價(jià)值極高，值得優(yōu)先選用[10]。在本研究中，B族鏈球菌陽性孕產(chǎn)婦發(fā)生宮內(nèi)感染、早產(chǎn)及產(chǎn)后出血的發(fā)生率明顯高于陰性孕產(chǎn)婦。同時(shí)，GBS對(duì)胎膜及絨毛具有較強(qiáng)的穿透力，造成胎膜早破及胎盤絨毛感染，從而造成胎兒宮內(nèi)感染及新生兒早發(fā)性疾病。陽性孕婦宮內(nèi)感染率的顯著增加使早產(chǎn)和產(chǎn)后出血的發(fā)生率也明顯高于陰性孕婦。近年來，國內(nèi)也逐漸注重GBS的篩查及治療，對(duì)于GBS感染陽性患者，國內(nèi)目前主要通過使用抗生素來進(jìn)行治療，預(yù)防新生兒感染的發(fā)生。但是，在臨床中仍有一部分患者未定期產(chǎn)檢及篩查GBS，這主要是由于國內(nèi)圍產(chǎn)保健相關(guān)知識(shí)未得到普遍宣教及落實(shí)。因此積極開展孕晚期GBS篩查，對(duì)GBS定植者采取積極、規(guī)范的抗生素治療方案可減少GBS定植導(dǎo)致的不良妊娠結(jié)局，減少新生兒GBS的感染率。B族鏈球菌PCR檢測擁有較高特異性、敏感度，因此PCR檢測可應(yīng)用于檢測妊娠晚期孕婦B族鏈球菌的感染。