超高效液相色譜法同時檢測丹參中14 種水溶性成分

陳慧芝，任君，尹予希

（烏海市檢驗檢測中心，內蒙古 烏海 016000）

0 引言

丹參屬于唇形科植物丹參的干燥根與根莖，其屬于傳統中藥材，在我國中醫治療上具備悠久的應用歷史，具備廣泛的用途[1]。根據《神農本草經》上有相關記載，丹參主要用于“心腹邪氣”治療，可發揮“破癥除瘕，止煩滿，益氣”的功效[2]。目前在對丹參水溶性成分進行檢測時，應用的方法主要為高效液相色譜法，當水溶性成分分離類型較多時，各個樣品的運行時間會達到60～70min，不但會造成檢測的時間漫長，無法完成大量樣品檢測工作，同時還會導致資源被大量浪費[3]。本次研究就采用超高效液相色譜法對丹參中14 種水溶性成分進行檢測，探討超高效液相色譜法同時檢測丹參中14 種水溶性成分的效果。報告如下。

1 儀器與藥物

1.1 檢測儀器與試劑

本次研究應用的檢測儀器包括美國費麗頓公司生產的超高效液相色譜檢測儀、上海科威特公司生產的MD-500 型電子分析天平、浙江諾豪器械有限公司生產的LK 型超聲波清洗機、北京天科設備有限公司生產的ME200 型旋轉蒸發儀、浙江海林器械有限公司生產的SP-200 型中藥粉碎機以及真空干燥箱。

本次研究應用的試劑包括美國Honeywell Burdick﹠Jackson 公司生產的乙腈，批號為S28M6D；上海斯諾威亞公司生產的乙酸，批號為18 625641；標準物質或對照品包括丹參素鈉、丹酚酸B、原兒茶酸、迷迭香酸、原兒茶醛、咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸、丹酚酸A、9'丹酚酸B 單甲酯、9? 丹酚酸B 單甲酯、丹酚酸C、紫草酸、丹酚酸B 二甲酯。丹參樣品購自山東萊蕪市艾山、羅漢峪、九龍、密埠等區域。

1.2 方法

色譜條件為：色譜柱長寬為2.1×50mm，內徑為1.7μm，柱體溫度控制為30℃；進樣量為1μL，在檢測時將波長設置為286nm；流動相為：0.5%乙酸溶液（A）-乙腈（B），流速控制為0.6mL/min。

制備對照品溶液的方法：分別對對照品進行稱取，稱取量為10mg 左右，然后采用80%甲醇溶液進行溶解，然后進行定容，總容量為10mL，配置濃度分別為：丹參素（1.126mg/mL）、丹酚酸B（0.982mg/mL）、原兒茶酸（0.944mg/mL）、迷迭香酸（0.962mg/mL）、原兒茶醛（1.06mg/mL）、咖啡酸（1.011mg/mL）、阿魏酸（1.010mg/mL）、異阿魏酸（1.020mg/mL）、丹酚酸A（0.968mg/mL）、9' 丹酚酸B單甲酯（1.049mg/mL）、9?丹酚酸B 單甲酯（1.067mg/mL）、丹酚酸C（0.996mg/mL）、紫草酸（0.973mg/mL）、丹酚酸B 二甲酯（0.904mg/mL）。

制備供試品溶液的方法：對樣品粉末進行稱取，稱取量為1g 左右，放置于250mL 錐形瓶內，添加100mL 純化水，加熱回流4h 后，放于室溫下待其冷卻后，對續濾液減壓濃縮，并對其實施定容處理，最終容量為25mL。

1.3 方法學驗證

首先，開展專屬性實驗，采用對照品溶液與供試品溶液，按照1.2 色譜條件進樣，對色譜圖予以記錄。其次，開展線性關系考察，將各對照品溶液分別取0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL 至50mL 量瓶內，定容后搖勻，獲得5 份梯度濃度的混合對照品溶液，根據1.2 色譜條件實施分析，橫坐標為各成分的濃度，縱坐標為峰面積。并開展精密度實驗、穩定性實驗、重復性實驗、重復性實驗，在進行樣品檢測時，采用不同的樣品及不同的部位，對供試品溶液進行制備，每份樣品制備3 份，開展色譜分析。

2 結果

2.1 水溶性成分回收率分析

超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分的平均回收率均超過97%，如表1。

表1 水溶性成分回收率分析

2.2 丹參不同部位含量測定結果

超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分時不同部位的含量存在差異，如表2。

表2 丹參不同部位含量測定結果

2.3 不同直徑丹參根含量測量結果

直徑為0.1～0.5cm 的丹參藥材和丹參周皮中14 種成分含量較高，如表3。

表3 不同直徑丹參根含量測量結果（cm）

3 討論

丹參屬于常用中醫藥物，現代藥理研究發現，丹參中具備的物質達到100 余種，其具備的多種水溶性成分，可發揮抗菌、抗氧化以及對心腦血管疾病起到治療的作用[4]。丹酚酸類成分具備的結構單元主要為咖啡酸以及丹參素，其具備較為相似的結構，分離的難度較大，因此目前研究報道中未見較多的水溶性成分分離的報道[5]。前人研究報道顯示，在對丹參水溶性成分進行測量時，流動相的有機相大部分為乙腈或者甲醇，非有機相主要為乙酸溶液或磷酸溶液，柱溫控制為20～40℃，波長為200～290nm，為分析最佳色譜條件，當流動相為甲醇-0.5%乙酸溶液時，所測成分間的分離度較低。當波長控制為210nm 時，能夠取得最好的溶劑效應[6]。

丹參的部位會對丹參內的水溶性成分水平產生影響，相較于根部，莖葉中具備的水溶性成分較多[7]。除丹參素外，其余不同水溶性成分的總量也明顯低于根[8]。直徑為0.1～0.5cm 的丹參藥材和丹參周皮中14 種成分含量較高，統計數據顯示直徑是影響14 種水溶性成分含量的重要因素。在丹參的部位和根的直徑會影響到丹參中水溶性成分的含量，直徑為0.1～0.5cm 丹參根所含各種水溶性成分均較高，總量上也表現出優勢，莖葉中水溶性成分總量大大低于根，除丹參素外，其余單個成分含量也低于根。檢查開展的8min 內，超高效液相色譜法可完全分離14 種水溶性成分，超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分的平均回收率均超過97%；超高效液相色譜法同時檢測丹參14 種水溶性成分時不同部位的含量存在差異。

綜上所述，超高效液相色譜法同時檢測丹參中14種水溶性成分的效果好，具備較好的分離度以及靈敏度。同時，超高效液相色譜法檢測耗費的時間較短，可使資源得到節約也有利于做好質量控制。