多次輸血產(chǎn)生抗-E、抗-c聯(lián)合抗-Wra抗體致疑難配血一例

郝蕭 刁雪芹 魯雯雯 張紅 夏小葉

臨床患者在輸血前進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查試驗，不規(guī)則抗體是引起臨床配血不合的主要原因。對于不規(guī)則抗體篩查陽性患者，需進(jìn)行進(jìn)一步的抗體鑒定，確定抗體特異性，然后選擇相應(yīng)抗原陰性的獻(xiàn)血者紅細(xì)胞進(jìn)行輸注，保障臨床輸血安全。本實驗室發(fā)現(xiàn)一例抗-E、抗-c聯(lián)合抗-Wra抗體導(dǎo)致配血不合，現(xiàn)報道如下。

材料與方法

1 標(biāo)本來源 患者何某，女，71歲，臨床診斷T-細(xì)胞大顆粒淋巴細(xì)胞白血病，上呼吸道感染，重度貧血入院，Hb 24 g/L，既往有多次輸血史，抗體篩查陽性，送我室進(jìn)行配血。

2 儀器與試劑 抗-A、抗-B 血清（上海血液生物，批號：201809019）；ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（上海血液生物，批號：20205313）；（IgG+IgM） 抗D（上海血液生物，批號：20191807）抗-C 、抗-c、抗-E、抗-e（上海血液生物，批號：20193001，20183102，20203201，20183302）；抗-Wra（Sanquin 批號：8000233510）；抗體篩選細(xì)胞（Sanquin 批號：8000450705）；抗體鑒定譜細(xì)胞（Sanquin 批號：8000450012）；抗人球蛋白試劑多抗（Sanquin 批號為8000226471）；Anti-IgG單抗（Sanquin批號為8000229804）；MC450全自動洗滌離心機(jī)（日本日立）；KUBOTA KA-2200離心機(jī)（日本久保田）；毛血管超速離心機(jī)（KUBOTA-322）；水浴箱JULAB-20B；BioVUE 孵育器和離心機(jī)。

3 試驗方法 血型鑒定方法：用試管法；抗體篩查、抗體鑒定及抗體效價鑒定：用室溫鹽水試管立即離心 （NS法）及微柱凝膠卡式法（Gel）；木瓜酶法：抗體鑒定譜細(xì)胞與等體積配制好的木瓜酶37 ℃孵育15 min，生理鹽水洗滌3次，離心取壓積紅細(xì)胞備用。處理完的細(xì)胞用直接抗人球?qū)嶒炞鰧φ镇炞C是否處理成功，如果直抗結(jié)果陽性，說明紅細(xì)胞被致敏，需要重新配制。

毛細(xì)管離心法：取患者400 μL紅細(xì)胞洗滌3次，取壓積紅細(xì)胞轉(zhuǎn)入2支毛細(xì)管，底部用橡皮泥封堵后進(jìn)行毛細(xì)管超速離心15 min（封閉端置于遠(yuǎn)心端），轉(zhuǎn)速為10 000 r/min。分別取近心端、遠(yuǎn)心端紅細(xì)胞配制成2%～5%紅細(xì)胞懸液備用[1]。

結(jié) 果

1 患者血型 為A型，RhD（+），Wra抗原表型呈雙群現(xiàn)象，Rh系統(tǒng)分型CcEe，其中c、E為混合視野2+mf。采用毛細(xì)管離心法后鑒定患者Wra（-），Rh系統(tǒng)分型為CCee。

2 直接抗人球蛋白試驗 抗IgG+C 3d（多抗）：2+；抗-IgG：2+；抗-C3d：0。

3 抗體篩查 患者血清與2號篩選細(xì)胞鹽水不反應(yīng)，卡式與2號篩選細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度達(dá)2+，酶法與2號篩選細(xì)胞反應(yīng)增強(qiáng)呈3+，與3號篩選細(xì)胞出現(xiàn)1+，抗體篩查結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，患者血清中存IgG類不規(guī)則抗體，酶法能增強(qiáng)反應(yīng)強(qiáng)度。

表1 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

4 抗體鑒定 聯(lián)合應(yīng)用兩個批次的譜細(xì)胞進(jìn)行抗體鑒定，根據(jù)抗體鑒定結(jié)果，見表2，對照譜細(xì)胞格局分析，患者體內(nèi)含有：抗-E、抗-c聯(lián)合抗-Wra。

表2 譜細(xì)胞（8000450012）抗體鑒定結(jié)果

5 抗體效價測定 患者血清用譜細(xì)胞（8000450501）11號（E+，c-）卡式法測抗-E抗體的效價為3 2；譜細(xì)胞4號（E-，c+）卡式法測抗-c抗體的效價為2；用譜細(xì)胞（8000450012）5號（E-，c-，Wra+）卡式法測抗-Wra抗體的效價為16。

6 配血 連續(xù)兩次從血庫中篩選出E抗原、c抗原及Wra抗原陰性的獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞共8 U，鹽水和卡式配血主側(cè)相合，無凝集無溶血。一周后再次挑選6 U 相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞。

7 隨訪 跟蹤該患者，醫(yī)院拿回8 U紅細(xì)胞后分四次，每次間隔一天輸注，第一次輸注2 U后升至32 g/L，至第四次輸注完隔天查血常規(guī)血紅蛋白升至67 g/L。一周后再次輸血6 U后血紅蛋白升由67 g/L至99 g/L，輸血效果良好，無溶血性輸血反應(yīng)。

討 論

Rh血型系統(tǒng)是所有血型系統(tǒng)中最復(fù)雜的，最常見的五個抗原有C、c、D、E、e。Rh血型系統(tǒng)的抗體多由輸血或妊娠免疫生成[2]，其臨床意義僅次于ABO 血型系統(tǒng)，可能會造成嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病。雖然輸血技術(shù)在不斷提高，但是不規(guī)則抗體漏檢的情況還經(jīng)常發(fā)生[3-5]，為提高臨床輸血的安全性，減少因抗體漏檢導(dǎo)致的溶血性輸血反應(yīng)，該現(xiàn)象應(yīng)該引起足夠的重視。本患者采用常規(guī)方法檢測發(fā)現(xiàn)抗-c抗體的格局沒有完全顯示出來，推測抗-c抗體較弱，進(jìn)而我們采用經(jīng)木瓜酶處理后的不規(guī)則篩查細(xì)胞與譜細(xì)胞加強(qiáng)試驗進(jìn)而鑒定抗-c抗體格局完全出來。提示我們當(dāng)抗原抗體反應(yīng)弱時可以通過酶處理細(xì)胞提高Rh系統(tǒng)抗體的檢測[2]。

該患者Rh抗原分型c與E存在混合視野，患者存在輸血史，考慮為之前輸入了抗原c（+）、E（+） 的紅細(xì)胞造成的混合視野，進(jìn)而產(chǎn)生抗-E、抗-c抗體。經(jīng)毛細(xì)管離心法對自身紅細(xì)胞及輸入的獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞進(jìn)行分離后鑒定患者Rh抗原分型為CCDee。對于近期輸血的患者應(yīng)采用毛細(xì)管超速離心法對患者紅細(xì)胞及獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞進(jìn)行分離后鑒定患者的血型。Wra抗原的鑒定采用間接抗人球方法，由于患者直抗陽性，無法正確定型，經(jīng)毛細(xì)管離心后，取患者紅細(xì)胞做熱放散致直抗陰性后，鑒定患者Wra抗原為陰性。

Wra是Diego血型系統(tǒng)的低頻抗原，在中國人群中頻率＜0.01%[6-7]。一些作者報道了在輸過血的患者和孕婦的血清中抗-Wra的發(fā)生率較高，抗-Wra的發(fā)病率可能在免疫系統(tǒng)變得活躍時增加[8，9]。該患者為IgG型抗-Wra。鑒于該抗體在溶血性貧血患者體內(nèi)的高發(fā)頻率，為了保障輸血安全，建議增加抗-Wra鑒定。本實驗用了兩套譜細(xì)胞進(jìn)行鑒定，16個譜細(xì)胞（8000450501）凝集強(qiáng)度有格局，除了16號鑒定細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度外其他的均符合抗-E和抗-c的格局，抗-c反應(yīng)強(qiáng)度弱陽性，但是16號細(xì)胞（E-，c+）反應(yīng)強(qiáng)度達(dá)2+，顯示還存在除了抗-c抗體以外其他的抗體，符合該特征的只有抗-Wra抗體。進(jìn)一步用批號為8000450012的16個譜細(xì)胞進(jìn)行鑒定，該批次的細(xì)胞中5號譜細(xì)胞抗原表型為E（-），c（-），Wra（+），該細(xì)胞的凝集強(qiáng)度達(dá)2+，說明患者確實存在抗-Wra抗體。鑒于該抗體在多次輸血的溶血性貧血患者體內(nèi)高發(fā)，為了保障輸血安全，建議臨床輸血檢驗人員在不規(guī)則抗體鑒定時增加抗-Wra鑒定。避免抗體漏檢要做到檢測時，使用多種試驗方法與試劑相結(jié)合，不同試劑與試驗方法的靈敏度各異，是減少抗體漏檢的有效途徑。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突