梔榆洗劑的提取工藝研究

鮑云惠 呂鎖忠 曹昌娥 鄧 祎 楊 帆

云南省曲靖市中醫醫院，云南 曲靖 655000

梔榆洗劑為曲靖市中醫醫院自主研究純中藥制劑，原處方由本院皮膚科醫師張穎組方，其成份由地榆、梔子、大黃、白礬等11味中藥組成。具有清熱解毒涼血、祛風燥濕止癢之功效，用于濕熱壅滯所致的皮膚紅腫、丘疹、瘙癢等。基于原處方顯著的臨床療效和多年大量積累的用藥資料，為方便患者使用，醫院特將該處方開發為院內制劑，對其進行了提取工藝的篩選研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 FA1104型0.1 mg電子天平(上海上平儀器公司)；AS306000BT型超聲波清洗機(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；GZX-9140MBE電熱鼓風干燥箱(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)。

1.2 材料 所使用藥材由曲靖市中醫醫院提供，且均符合藥典要求。

2 方法

根據處方各中藥所含化學成分的特性[1-2]，結合臨床使用經驗，組方中大黃、白礬用滲漉法提取；其余地榆、梔子等9味中藥用煎煮法提取。

2.1 滲漉工藝篩選影響 滲漉工藝的主要因素包括溶媒、溶媒濃度、溶媒量、流速，該實驗中溶媒為水，故用單因素實驗法重點考察加水量、流速對大黃浸出物的影響。按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，共取6份，分別按照試驗要求試驗，收集滲漉液，濃縮為稠膏。精密稱取各試驗項下稠膏10 g，分別置于恒重的扁形稱量瓶中，于105 ℃干燥至恒重，精密稱定，計算干膏得率。各因素水平見表1。

表1 滲漉因素水平表

2.1.1 加水量對大黃浸出物的影響 按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，以流速為5 mL/min·kg考察加水量對大黃浸出物的影響。大黃浸出物隨加水量的增加而增加，與5倍量的水相比，加6倍水及7倍水大黃浸出物分別增加4.94%(P<0.01)、7.11%(P<0.01)；與加6倍量的水相比，加7倍水大黃浸出物增加2.49%(P<0.01)，其中加6倍水量相比加5倍水量對大黃浸出物的影響較大，結合實際生產及成本，大黃滲漉工藝加水量為6倍水量。結果見表2。

表2 加水量對大黃浸出物的影響試驗干膏得率

2.1.2 流速對大黃浸出物的影響 按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，選用6倍量的水作為溶媒來考察流速對大黃浸出物的影響。按處方比例稱取大黃、白礬中藥飲片共 120 g，大黃粉碎為粗粉，以流速為5 mL/(min·kg)考察加水量對大黃浸出物的影響。大黃浸出物的量與流速成反比，流速為3 mL/(min·kg)時，大黃浸出物為44.73%，相比流速為4 mL/(min·kg)、5 mL/(min·kg)時，浸出物分別增加0.24%(P<0.05)、1.79%(P<0.05)，結合實際生產，大黃滲漉工藝流速為3 mL/(min·kg)。結果見表3。

表3 流速對大黃浸出物的影響試驗干膏得率

2.1.3 大黃滲漉工藝驗證試驗 根據加水量及流速對大黃浸出物的影響結果，對其最佳滲漉工藝進行驗證，通過3批試驗，以大黃浸出物得率作為評價指標，確認提取工藝操作重現性和可行性。大黃、白礬中藥飲片共120 g，大黃粉碎為粗粉，加6倍水，流速設定為3 mL/(min·kg)。結果見表4。

表4 大黃滲漉工藝驗證試驗干膏得率

2.1.4 驗證實驗 通過驗證實驗，3組試驗RSD為0.3%，證明被驗證的滲漉工藝中的加水量及流速處于“控制狀態”，表明該滲漉工藝操作具有重現性和可行性。

2.2 煮提工藝研究

2.2.1 方法 按處方比例稱取除地榆、梔子的9味中藥飲片共120 g，共取9份，按正產表中各實驗號對應的條件安排試驗，收集提取液，濃縮為稠膏。精密稱取各試驗項下稠膏10 g，分別置已恒重的扁形稱量瓶中于105 ℃干燥至恒重，精密穩定，計算干膏得率。

2.2.2 水煮提取工藝 篩選用L9(34)正交實驗[3]對梔榆洗劑的煮提工藝進行篩選，以確定最佳煮提工藝。本試驗以地榆、梔子等9味中藥的加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(C)和誤差因素(D)4個因素為考察對象，每個因素設3個水平，以提取物的干膏得率為評價指標，選用L9(34)正交實驗設計進行實驗，各因素水平見表5。

表5 煮提因素水平表

2.2.3 正交試驗設計和測定結果 按處方比例稱取除地榆、梔子等的9味中藥飲片共120 g，共取9份，根據L9(34)正交實驗設計表，將飲片浸泡后按“2.1”項下操作步驟進行試驗。結果見表6、表7。

表6 煮提工藝正交結果匯總表

表7 方差分析表

干膏得率方差分析結果表明：因素C(提取次數)對浸膏的提取率有極顯著性影響(P<0.01)；因素A(用水量)對浸膏的提取率有顯著性影響(P<0.05)、因素B(提取時間)對浸膏的提取率無顯著性影響 (P>0.05),三個因素對浸膏提取率的影響順序為C>A>B,各因素不同水平對浸膏提取率的影響順序為A3>A2>A1，B3>B2>B1，C3>C2>C1，其最佳提取工藝為A3B1C3。但其中A為次要因素，A2與A3相比出膏率的差值僅為0.58 g，結合實際生產及操作成本考慮，綜合以上分析，加水量確定為7倍水量，因此確定梔榆洗劑的最佳提取工藝條件為A2B1C3，即每次加7倍量水，提取3次，每次提取時間為1 h。

2.2.4 最佳工藝提取工藝驗證試驗 為驗證正交實驗結果的準確性，以確保提取工藝合理可行，按上述工藝條件A2B1C3重復安排三批試驗，結果見表8。三次驗證試驗結果表明，檢測指標數值穩定，說明所有優選的提取條件具有重現性和可行性。

表8 提取工藝驗證試驗數據匯總表

3 討論

梔榆洗劑是我院皮膚科用于治療銀屑病的協定方，目前正處于研發申報階段。研究[4]表明梔榆洗劑可降低尋常型銀屑病進行期患者外周血中的IL-17和IL-23的水平，治療尋常型銀屑療效確切，能明顯改善患者癥狀，止癢效果好，復發率低，并且無刺激性、未見明顯不良反應，療效安全可靠。

醫院制劑研發的協定方，均是經臨床多年使用其藥效已經得到了證明的處方。制劑研發是把臨床處方轉向為可大規模生產處方的過程。研發過程中，使協定方和生產處方發揮藥效學的化學物質基礎盡量保持一致，是需要優先考慮的問題，因此梔榆洗劑采用了中藥傳統工藝制備方法，用水為溶媒進行提取。在此基礎上再根據處方各藥味的特點，結合制劑生產實際條件，采取單因素試驗法和正交試驗法對提取工藝參數進行優化，最終確定了該制劑工藝關鍵參數。經中試試驗證明三批樣品均符合《中國藥典》(2015版 四部)洗劑項下有關要求，說明本工藝較穩定，具規模化生產可行性。