糖周靈膠囊對STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠下肢神經(jīng)機(jī)械痛閾的影響

晏和國 侯建婷 尹朝蘭 楊 博 陳婉麗 李 軍*

1.云南省昭通市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昭通 657000；2.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650011

糖尿病周圍神經(jīng)病變(Diabetic peripheral neuropathy，DPN)是指周圍神經(jīng)功能障礙，是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，亦是DPN中最常見的類型。研究報(bào)道我國DPN患病率為52.97%。DPN臨床癥狀[1]早期常表現(xiàn)肢體麻木、疼痛、感覺異常等，并隨著糖尿病病程逐漸進(jìn)展[2-3]，可出現(xiàn)運(yùn)動神經(jīng)、感覺神經(jīng)、自主神經(jīng)均可受累，常表現(xiàn)為感覺缺失、腱反射消失，同時(shí)也可出現(xiàn)其他并發(fā)癥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對DPN發(fā)病機(jī)制尚不明確，糖尿病并發(fā)癥統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說認(rèn)為:高糖狀態(tài)引起線粒體中超氧陰離子生成過多，從而導(dǎo)致組織細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激是糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)病機(jī)制[4-5]。西醫(yī)對DPN的治療主要是針對病因治療和針對神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制治療，針對病因治療包括積極嚴(yán)格地控制高血糖并保持血糖穩(wěn)定和使用甲鈷胺、神經(jīng)生長因子進(jìn)行神經(jīng)修復(fù)，針對神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制治療包括抑制醛糖還原酶抑制劑、多元醇通路增強(qiáng)等對癥治療[6-8]。前期研究[9-12]表明糖周靈膠囊可以改善DPN大鼠坐骨神經(jīng)的傳導(dǎo)性、降低血糖、恢復(fù)對熱輻射敏感性、抑制正常大鼠體內(nèi)血栓形成作用及鎮(zhèn)痛作用；糖周靈膠囊中的多種藥物均具有抑制神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激的作用。本研究針對糖周靈膠囊低、中、高劑量與抗氧化劑維生素C、模型組、正常對照組相比，對機(jī)械性痛閾的影響進(jìn)行研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動物 8～9周的SPF級雄性SD大鼠，體重：220～260 g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司， 動物許可證號:SCXK (湘)2016-0002，在云南中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)公共平臺實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)，許可證：SYXK(滇)K2017-0005。

1.2 材料 糖周靈膠囊(主要由黃芪、三七、全蟲等藥物組成)由昆明市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。 維生素C 片(100 mg/片，昆明振華制藥廠有限公司)，鏈脲佐菌素(STZ，批號：CAS1883-66-4，美國Sigma公司)，4279血糖試紙(批號：TD-18F130-BED，中國臺灣泰博科技股份有限公司)。Von Frey觸覺刺痛套件。

2 方法

2.1 實(shí)驗(yàn)分組及培養(yǎng) 將60只雄性SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,采用隨機(jī)對照方法-用電子計(jì)算機(jī)隨機(jī)編碼法隨機(jī)分為正常對照組和造模組，其中正常組(10只)，造模組分為糖尿病組、糖周靈小劑量組、中劑量組、高劑量組、維生素c組各10只；造模成功后，糖周靈小劑量組以糖尿病0.44 g/(kg·d)給藥；中劑量組按0.88 g/(kg·d)給藥；大劑量組按1.75 g/(kg·d)給藥，維生素C組按0.05 g/(kg·d)給藥，糖尿病組及對照組給予等量蒸餾水，給藥時(shí)間為16周，16周后用Von Frey測量儀測定機(jī)械痛閾值。

2.2 指標(biāo)檢測及方法 觀察SD大鼠一般情況(毛色、精神狀態(tài)等)，測定治療前、治療后4周、8周、12周、16周大鼠體重、大鼠尾尖血血糖，用Von Frey儀測量測定灌胃16周后大鼠機(jī)械痛閾值并記錄。

3 結(jié)果

3.1 一般情況 正常組大鼠毛色純白,精神狀態(tài)良好,有光澤,動作自如，進(jìn)食、飲水量、尿量均正常，體重明顯增加。模型組大鼠出現(xiàn)毛色枯黃，精神萎靡，動作遲緩，出現(xiàn)明顯的多飲、多食、多尿癥狀。維C組、糖周靈低中高劑量組均出現(xiàn)類似模型組癥狀，但程度都較輕。為防止各組出現(xiàn)不明原因死亡，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，故每組均選取造模成功的12只大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。模型組2只死亡，維C組、糖周靈小中高劑量組各1只死亡，均考慮為長期高血糖導(dǎo)致。糖周靈大劑量組1只大鼠因灌胃操作不當(dāng)死亡。

3.2 糖周靈膠囊對血糖影響 在空腹血糖指標(biāo)來看：在治療4周、8周、12周、16周后，與正常對照組相比，模型組、維C組、糖周靈小、中、高各治療組均明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，維C 組及糖周靈小、中、高劑量組均無明顯差異差異(P>0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血糖比較

3.3 糖周靈對體重影響 各組體重在治療前無明顯的差異(P>0.05)，在治療4周、8周、12周、16周后，與正常對照組相比，模型組、維C組、糖周靈各治療組體重均下降(P<0.01)；與模型組相比，維C 組、糖周靈各濃度組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與維C組相比，糖周靈各濃度組無明顯差異(P>0.05)。見表2。

表2 各組大鼠體重比較

3.4 糖周靈膠囊對糖尿病神經(jīng)病變大鼠感覺閾值影響 正常對照組與維生素C組存在明顯差異(P<0.05)；正常對照組、模型組與小劑量組存在顯著差異(P<0.01)；模型組與小劑量組、中劑量組、大劑量組存在顯著差異(P<0.01)，與維C組相比，糖周靈小、中、大劑量組存在明顯差異(P<0.05)，與糖周靈大劑量相比，糖周靈小、中劑量無明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 機(jī)械痛閾值比較

4 討論

糖周靈膠囊是云南省昆明市中醫(yī)醫(yī)院院內(nèi)制劑，主要功用是益氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)、搜風(fēng)止痛，其方藥由黃芪、三七、當(dāng)歸、川芎、雞血藤、全蟲、牛膝等藥物組成，其中黃芪、三七為君，健脾益氣活血，通絡(luò)止痛；當(dāng)歸、川芎、雞血藤為臣，養(yǎng)血活血，行氣止痛，祛瘀通絡(luò)，舒筋活絡(luò)；全蟲等為佐藥，搜風(fēng)通絡(luò)，溫經(jīng)止痛，祛風(fēng)散寒等；使以牛膝滋養(yǎng)肝腎，載藥下行。其配伍特點(diǎn)有：其一，先擬扶正，以達(dá)到治療未病，截?cái)嘌泳徃裳Y瘕的形成的目的；其二，在健脾益氣養(yǎng)血的基礎(chǔ)上，施以活血祛瘀，溫陽通絡(luò)；其三，結(jié)合 DPN絡(luò)脈“以通為用” 的特點(diǎn) ，佐以辛香蟲蟻之品搜剔絡(luò)中混處之邪；其四，考慮消渴病多始于陰虛的特點(diǎn)，使以滋養(yǎng)肝腎、引邪下行之品。現(xiàn)代藥理研究[9-12]表明：黃芪、三七、當(dāng)歸、葛根具有降血糖作用；三七、羌活、細(xì)辛等則具有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用；牛膝具有改善紅細(xì)胞變形能力，降低纖維蛋白原水平的作用。大部分中藥均具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、抑制血小板聚集、抗氧化、抗血栓形成、降低血粘度、抗動脈硬化的作用。

糖尿病神經(jīng)病變是一種神經(jīng)退行性疾病，可導(dǎo)致部分糖尿病患者功能、情緒和睡眠的改變。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組機(jī)械痛閾值最低，糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機(jī)械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對糖尿病周圍神經(jīng)病變具有一定保護(hù)作用。糖尿病神經(jīng)病變的發(fā)病機(jī)制包括:神經(jīng)鞘病變、多元醇通路活性、糖基化終末產(chǎn)物積累、蛋白激酶活性、己糖胺通路通量增加、氧化應(yīng)激、一氧化氮和炎癥等[13]。DPN主要表現(xiàn)為多樣性異常感覺，包括感覺過敏、自發(fā)痛、痛覺過敏等。研究[14]證實(shí)高血糖時(shí)，機(jī)體對機(jī)械刺激的反應(yīng)呈一個(gè)增強(qiáng)的過程。本研究發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組的機(jī)械痛閾值最低，說明該組大鼠對機(jī)械刺激反應(yīng)最高，此研究亦證實(shí)這一點(diǎn)。糖尿病并發(fā)癥統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說認(rèn)為:高糖狀態(tài)引起線粒體中超氧陰離子生成過多，引起組織細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激,是導(dǎo)致包括 DPN在內(nèi)的糖尿病慢性并發(fā)癥的共同機(jī)制[15-16]。細(xì)胞凋亡是通過線粒體內(nèi)ROS生成增多可誘導(dǎo)線粒體內(nèi)膜去極化，膜電位下降，線粒體膜通透性增加，導(dǎo)致釋放細(xì)胞色素等凋亡相關(guān)蛋白入胞漿,進(jìn)而與凋亡蛋白酶激活因子和 procaspase-9 結(jié)合，使后者活化為有活性的 Caspase-9，從而進(jìn)一步使下游的 procaspase-3激活為Caspase-3，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[17-19]。糖尿病神經(jīng)病變可導(dǎo)致終身殘疾，目前尚無有效的治療方法或?qū)⒒颊叩耐纯嘟档阶畹停虼酥贫ㄌ悄虿〉闹委煵呗詣菰诒匦小Ｓ捎谘趸瘧?yīng)激、線粒體功能障礙、細(xì)胞凋亡和炎癥是DPN發(fā)展和進(jìn)展的關(guān)鍵機(jī)制[20]，有研究[21]發(fā)現(xiàn)對糖尿病神經(jīng)病變的保護(hù)作用可能是由于糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)中SOD(超氧化歧化酶)的含量顯著下降而MAD(丙二醛)、ROS(活性氧簇)含量明顯增高，Caspase-3蛋白表達(dá)增加，氧化應(yīng)激啟動后細(xì)胞凋亡明顯增加，通過上調(diào)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠SOD 水平，下調(diào) MAD、ROS 水平，抑制 Caspase-3蛋白的表達(dá)，達(dá)到抗氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病神經(jīng)病變模型建立，糖周靈膠囊灌胃16周后，發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組機(jī)械痛閾值最低，糖周靈膠囊一定程度上可以提高糖尿病大鼠機(jī)械痛閾值，改善糖尿病神經(jīng)病變神經(jīng)功能，對糖尿病周圍神經(jīng)病變具有一定保護(hù)作用，可能是由于糖周靈膠囊上調(diào)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠SOD水平，下調(diào)MAD、ROS水平，抑制Caspase-3蛋白的表達(dá)，達(dá)到抗氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡的作用來實(shí)現(xiàn)對糖尿病周圍神經(jīng)病變的保護(hù)作用。其作用機(jī)制尚不明確，有待作進(jìn)一步深入研究。