殺菌劑對王草草莖點霉葉斑病病原菌的室內毒力測定①

陸 英 林培群 粱艷瓊 賀春萍 黃 興 吳偉懷 易克賢

（中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所/農業農村部熱帶農林有害生物入侵檢測與控制重點開放實驗室/海南省熱帶農業有害生物檢測監控重點實驗室 海南海口 571101）

王草（Pennisetum），別稱皇草、皇竹草，是以象草為母本、美洲狼尾草為父本雜交（Pennisetum purpureum×P. americanum） 育 種 而 成［1］。1982 年由中國熱帶農業科學院從哥倫比亞引進，經過多年試種選育而成，定名為熱研4 號王草［2］。王草為多年生牧草，具有產量高、生長快、抗倒伏、耐干旱、抗病力強等特點，且莖葉柔軟口感好，營養豐富，以優質、高產而著稱，被譽為“草中之王”，是各種草食性牲畜和魚類的優質飼料［3］，適宜在我國熱帶及亞熱帶種植。目前，熱研4號王草已在我國海南、廣東、廣西、江西、福建、四川、湖南、云南、貴州等省區大面積推廣種植［4］。隨著王草種植面積不斷擴大，潛在病害日趨嚴重，影響了王草的產量和品質。前期研究在廣西橫縣發現王草大面積發生葉斑病，從葉斑病病葉上分離獲得1 株真菌GX8-2，對其完成致病性測定，依據病原形態學特征結合rDNA-ITS序列分析，將其鑒定為草莖點霉（Phoma herbarum）［5］。為明確該病原菌的最佳室內抑菌藥劑，開展室內藥劑平板篩選，為進一步田間防效試驗提供依據。

1 材料與方法

1.1 供試菌株和藥劑

供試菌株草莖點霉菌（Phoma herbarum）是從廣西橫縣熱研4號王草上采集的病樣，經過室內無菌條件單胞分離純化得到，菌株編號為GX8-2。供試藥劑、生產廠家和藥劑濃度設置見表1。

表1 供試藥劑、生產廠家和藥劑濃度

1.2 方法

1.2.1 菌餅制備

將保存于試管斜面的菌株接種到PDA 培養基平板上，28 ℃恒溫培養5 d，用直徑5 mm 的打孔器在菌落邊緣打取菌餅備用。

1.2.2 殺菌劑濃度初篩

將供試殺菌劑用無菌水（原藥用DMF 溶解后加0.1%吐溫80 稀釋）配制成濃度為10 000 mg/L的母液，再將母液稀釋成濃度為10、100、1 000 mg/L的藥液，分別取1 mL 稀釋后的藥液加入99 mL 的PDA培養基中制成終濃度分別為0.1、1、100 mg/L的含藥平板。以不加藥劑的PDA 平板為對照。將打取的菌餅轉接至含藥平板中央，每處理3個重復，于28 ℃恒溫培養5 d，觀察供試菌株生長情況，測量菌落大小，確定殺菌劑有效濃度范圍。

1.2.3 室內毒力測定

通過殺菌劑濃度初篩實驗確定好每種殺菌劑的有效濃度后，對不同殺菌劑設置5~6個的毒力測定濃度梯度，分別加入冷卻至50 ℃左右的PDA 培養基中，制成所需要藥劑濃度的含藥平板，各藥劑使用濃度如表1所示。在預培養的菌株菌落邊緣打取直徑5 mm 大小的菌餅，接種不同濃度的含藥PDA 平板上，以不含藥劑的PDA 平板接種菌餅作為對照，每處理重復6 次。接種后置于28 ℃恒溫培養，5 d后采用十字交叉法對菌落直徑進行測定，并按公式求出各藥劑在不同濃度下對菌絲生長的抑制百分率（y），然后將藥劑濃度轉化成對數（x），通過x與y的線性關系求出毒力回歸曲線方程y＝ax+b，并通過方程計算出藥劑的有效抑制中濃度值EC50。

2 結果與分析

由表2可知，菌株對多種殺菌劑均有較強的敏感性，且不同殺菌劑對菌絲生長的抑制效果存在明顯差異，其中苯醚甲環唑的EC50值最小，僅為0.317 6 mg/L；其次為咪鮮胺、多菌靈、腈菌唑、嘧菌酯和戊唑醇對菌絲生長具有較強的抑制作用，其EC50值分別為：2.936 6、3.150 5、4.897 6、5.118 6和5.468 mg/L，均低于10 mg/L；效果較差的為甲基硫菌靈、代森錳鋅、百菌清和異菌脲，其EC50值分別為：33.770 7、48.767 7、160.340 4、258.293 1 mg/L。

表2 殺菌劑對王草草莖點霉的室內毒力測定結果

3 討論

藥劑防治是植物病害防治的重要途徑，選擇藥劑時，首先需考慮藥劑對病原菌殺滅能力，通過測定殺菌劑的室內毒力，可清楚了解殺菌劑對草莖點霉的毒性。本研究利用分離自王草上的草莖點霉，采用菌絲生長速率法對11 種常見殺菌劑進行室內毒力測定。結果發現，毒力最強的是苯醚甲環唑，EC50值最小，抑菌效果最好；其次是咪鮮胺、多菌靈、腈菌唑、嘧菌酯和戊唑醇，抑菌效果較好；而抑菌效果較差的為甲基硫菌靈、代森錳鋅、百菌清和異菌脲。因此，建議優先考慮苯醚甲環唑、咪鮮胺、多菌靈、腈菌唑、嘧菌酯和戊唑醇等作為防治王草草莖點霉的主要殺菌劑，且為了避免長期使用單一化學藥劑造成病原菌產生抗性問題，建議在生產上輪換施用這幾種殺菌劑。

草莖點霉能引起地黃［6］、鴨跖草［7］、豌豆［8］、針葉樹［9］、Tedera［10］、白睡蓮［11］、甘草［12］、油棕［13-14］、刺葵［15］、山茶［16］等多種植物發生病害，是一種分布廣泛的植物病原真菌。而不同藥劑對王草莖點霉菌菌絲抑制效果存在差異的可能原因在于靶標生物作用機理不一樣，本研究只對菌絲的毒力效果進行評估，缺乏藥劑對病原菌孢子萌發的毒力研究，且只涉及室內毒力測定，尚未涉及田間應用效果，因此，篩選出的藥劑有待進一步進行田間防效評價。