結直腸癌組織及血清中miRNA-107相對表達水平與臨床病理特征及預后的關系*

張肖麗,張月曉,李炳慶,李 萍,陳 健

承德醫學院附屬醫院消化內科,河北承德 067000

結直腸癌具有較高的侵襲性和轉移性，早期和中期階段患者預后較好，5年生存率高達80%，一旦進入晚期或者術后復發轉移，死亡風險則明顯升高[1-2]。早期診斷、治療可有效提高患者生存期，但常用的糞便潛血實驗、結腸鏡檢查在臨床運用過程中均存在不同程度的限制(如靈敏度低、花費高、操作復雜等)，因此早期診斷仍然是臨床研究的重點[3]。腫瘤標志物因其特異性已逐步成為早期腫瘤篩查的重要指標，例如結直腸癌的發生、發展與微小RNA(miRNA)密切關聯。由于腫瘤基因突變累積，可在血液系統、實體瘤中檢測到miRNA的異常表達[4-5]。miRNA可靶向結合到下游的靶基因mRNA，從而調控細胞因子的表達，影響細胞增殖、分化及侵襲等，可表現為促進或者抑制腫瘤的發生。研究顯示，miRNA-107在乳腺癌、非小細胞肺癌、陰莖癌中異常表達，通過調控多種信號通路(如癌基因CDK6、靶基因蛋白激酶Cε、抑癌基因let-7)從而促進腫瘤的侵襲和轉移，導致疾病惡化，其表達與預后密切關聯[6]。對于miRNA-107與結直腸癌的發生、發展、預后的相互關系，文獻報道并不多見，因此本文將進一步探討結直腸癌腫瘤組織及血清中miRNA-107相對表達水平及其與臨床病理特征及預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年11月至2019年4月于本院收治的60例患者作為試驗組，根據腫瘤細胞浸潤深度分早期癌癥組(30例)及進展期癌組(30例)，并選取同期體檢健康的20例就診者為對照組，20例結直腸息肉患者為息肉組。其中息肉組中，男14例，女6例；平均年齡(60.20±8.12)歲。早期癌癥組為腫瘤細胞浸潤深度局限于黏膜及黏膜下層的任意大小的結直腸上皮性腫瘤，無論有無淋巴結轉移的患者，其中男18例，女12例；平均年齡(59.30±9.11)歲；癌癥部位：結腸15例，直腸10例，其他腸段5例。進展期癌組中，男17例，女13例；平均年齡(61.50±8.69)歲；癌癥部位：結腸14例，直腸10例，其他腸段6例。對照組中，男12例，女8例；平均年齡(60.75±8.35)歲。受試者入組前的年齡、性別比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。試驗組患者納入標準[7]：(1)行腸鏡及活檢等檢查，有明顯病變；(2)病例資料完整，依從研究方案。排除標準：(1)心、腎、肝等重要臟器功能障礙或造血系統疾病；(2)存在其他原發性惡性腫瘤，或者腫瘤轉移。所有患者及家屬均簽署知情同意書，本研究獲得本院倫理委員會批準。

1.2方法 全部患者入組后收集年齡、性別、吸煙、腫瘤部位及大小、生存情況等信息。患者入組后，空腹抽取外周靜脈血約5 mL，3 000 r/min離心10 min，取上層血清于-80 ℃凍存待用。采用TRIzol試劑盒(北京華邁科生物技術有限責任公司)提取血清總RNA；按照miRNA反轉錄試劑盒說明書的要求，將提取的總RNA反轉錄成cDNA；按照Taqman探針試劑盒的要求使用熒光定量PCR法檢測miRNA-107相對表達水平，U6作為內參因子，以2-ΔΔCt表示相對表達水平。術中腫瘤區域采集患者腫瘤組織標本，研磨低溫凍存下的組織標本，采用TRIzol試劑提取總RNA，隨后操作同血清miRNA-107水平測定步驟。采用全自動生化免疫分析儀(廠家：羅氏公司；型號：cobas8000 e602模塊)測定所有患者血清癌胚抗原(CEA)，試劑盒購于羅氏公司，以所有患者的均值為臨界值。以試驗組患者的血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平中位數為臨界值，超過該范圍則判定為血清陽性或者腫瘤組織陽性。

2 結 果

2.14組miRNA-107相對表達水平比較及血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平的相關性 息肉組、早期癌癥組和進展期癌組血清miRNA-107相對表達水平明顯高于對照組(P<0.05)，早期癌癥組和進展期癌組血清miRNA-107相對表達水平明顯高于息肉組(P<0.05)，進展期癌組血清miRNA-107相對表達水平明顯高于早期癌癥組(P<0.05)。進展期癌組腫瘤組織miRNA-107相對表達水平明顯高于早期癌癥組(P<0.05)，見表1。Spearman檢驗分析表明，試驗組血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平呈正相關(r=0.446，P<0.05)。

表1 4組miRNA-107相對表達水平比較

2.2血清、腫瘤組織中miRNA-107相對表達水平與臨床特征的關系 試驗組患者血清、腫瘤組織中miRNA-107相對表達水平的臨界值分別為1.232、1.164，血清miRNA-107陽性患者32例，腫瘤組織miRNA-107陽性患者34例。血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平在不同年齡、性別、吸煙情況、腫瘤部位、腫瘤最大徑患者之間差異無統計學意義(P>0.05)；試驗組CEA水平均值為3.52 ng/L，血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平在CEA≤3.52 ng/L和CEA>3.52 ng/L患者之間差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 血清、腫瘤組織中miRNA-107相對表達水平與臨床特征的關系(n)

2.3血清、腫瘤組織中miRNA-107相對表達水平與預后關系 通過Kaplan-Meier生存分析，60例試驗組患者整體無進展生存期(PFS)中位時間約為10個月。通過Log-rank檢驗，血清、腫瘤組織miRNA-107呈陽性時，患者的PFS明顯短于呈陰性患者(P<0.05)，其中患者血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平及CEA水平均為陰性時，其PFS最長。Log-rank檢驗結果顯示，血清、腫瘤組織miRNA-107的相對表達水平與患者的PFS有一定關系，水平越高，預后越差，見圖1。

2.4試驗組患者血清、腫瘤組織中miRNA-107相對表達水平的獨立預后危險因素分析 對患者的血清、腫瘤組織中miRNA-107水平及CEA水平進行PFS的Cox回歸多因素分析，結果顯示，血清、腫瘤組織中miRNA-107陽性及CEA>3.52 ng/L可作為影響結直腸癌患者PFS的獨立預后危險因素(P<0.05)，見表3。

注：A為血清miRNA-107相對表達水平與患者PFS的關系；B為腫瘤組織miRNA-107相對表達水平與患者PFS的關系；C為血清+腫瘤組織miRNA-107相對表達水平與患者PFS的關系。

表3 患者術后生存影響因素多因素分析結果

3 討 論

結直腸癌是臨床常見的消化系統腫瘤，由于早、中期缺乏典型或者明顯的臨床癥狀，容易被臨床醫生及患者忽視，導致一旦確診即已進入晚期，從而錯過最佳治療時期。研究顯示，結直腸癌的無瘤生存時間低于38個月，通過手術切除、化療等綜合措施治療后3年內生存率低于65%，因此早診斷和早治療對于降低病死率至關重要[8-9]。目前，糞便隱血試驗、結腸鏡檢查是常規篩查方法，其中結腸鏡檢查為診斷金標準，但是需在鏡下摘除病理組織進行檢查，成本較高，且操作具有侵入性，而糞便隱血試驗特異度、靈敏度較低，因此仍需探尋高效、準確、操作簡便且經濟的診斷方法[3,10]。隨著分子生物學的迅速發展，對結直腸癌的研究已逐步轉入基因水平，有文獻報道顯示miRNA與腫瘤的發生、發展密切關聯[1,11]，不同腫瘤類型、不同腫瘤分期、同一腫瘤不同組織或者系統中miRNA均可異常表達，可發揮致癌基因或者抑癌基因作用，因此外周血miRNA表達可反映結直腸癌早期狀態，其可作為其非侵入性生物標志物，且血液標本獲取方便，易于檢測。

miRNA-107位于人的第10號染色體上，其促癌作用已在乳癌、胃癌、肝癌等腫瘤中得到證實，如在乳腺癌患者中其可通過調控Dicer1基因的表達，從而促進上皮細胞到間質細胞轉化，導致腫瘤細胞的侵襲和轉移，在肝癌患者體內可靶向調控軸抑制蛋白2的表達從而促進腫瘤細胞的增殖[12-13]。因此，推測miRNA-107的促癌作用也能調控結直腸癌的疾病進展，本文通過分析miRNA-107在結直腸癌腫瘤組織及血清中的相對表達水平，發現試驗組血清miRNA-107相對表達水平明顯高于對照組，其中癌癥組患者血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平明顯高于息肉組、早癌組(P<0.05)，表明miRNA-107與結直腸癌的發生、發展存在關聯。同時通過Spearman相關分析表明，觀察組血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平呈正相關，分析認為結直腸腫瘤細胞中的miRNA-107處于激活狀態，可促進腫瘤細胞的增殖、分化、轉移，導致miRNA-107被大量釋放于外周血中，因此外周血的miRNA-107也會處于高水平狀態，提示外周血miRNA-107可作為結直腸癌的篩選指標。

通過對試驗組患者腫瘤組織及血清中miRNA-107相對表達水平、CEA水平、臨床特征進行單因素、多因素分析發現，高CEA水平(CEA>3.52 ng/L)的試驗組患者的血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平明顯較高，CEA是人類胚胎抗原特異性決定簇的酸性糖蛋白，已作為結直腸癌診療的常用腫瘤標志物[14]。miRNA-107作為促癌基因，可通過促進高遷徙率族蛋白A2、原肌球蛋白1的表達，調控腫瘤腫瘤細胞的增殖、分化，進而誘導結直腸癌的發生、侵襲、進展。對60例試驗組患者進行Kaplan-Meier生存分析發現，PFS中位時間約為10個月，通過Log-rank檢驗結果顯示血清、腫瘤組織miRNA-107相對表達水平與患者的PFS相關，其相對表達水平越高，預后越差，進一步表明血清、腫瘤組織miRNA-107的相對表達水平與結直腸癌進展密切關聯，分析認為miRNA-107可通過多種信號通路調控腫瘤細胞的生長、增殖及遷移，從而誘導腫瘤細胞的侵入和淋巴結轉移，同時還能提高腫瘤細胞對化療藥物(如鉑類化合物)的耐藥性[12,15]，導致疾病進展和惡化，縮短PFS和影響預后效果，因此miRNA-107相對表達水平陽性患者預后更差。當然，本研究例數較少，需擴大樣本量進一步證實miRNA-107水平與臨床特征和預后的相關性，同時本研究僅通過60例研究對象論述了miRNA-107相對表達水平與臨床特征的相互關系，仍需從分子生物學角度進一步論述影響結直腸癌淋巴結轉移、高分化程度等的具體作用機制，從而為研究提供可靠的依據。

綜上所述，miRNA-107在結直腸癌患者的血清、腫瘤組織中呈高表達，且其相對表達水平越高則預后越差，可作為結直腸癌診斷、預后的參考指標。