青年腦卒中與MTHFR基因多態性、同型半胱氨酸水平及血小板參數的相關性研究*

劉淑靜，孫嘉潞，王玉飛，李斯文，周 金，谷愉愉，司學眾，張國軍

首都醫科大學附屬北京天壇醫院檢驗科/國家藥監局體外診斷試劑質量控制重點實驗室/北京市免疫試劑臨床工程技術研究中心，北京 100070

腦卒中是目前世界范圍內病死率排名第2位的疾病，其主要患病人群是中老年人，但近年來平均發病年齡呈現出“年輕化”的趨勢。腦卒中患者預后差，常伴有單側或雙側肢體無力、言語不清、感覺障礙等后遺癥，嚴重影響患者生活質量，患者還存在發生血管疾病等其他并發癥的風險，需要長期接受康復治療。因此，對腦卒中早發現、早診斷、早治療具有重要的臨床意義[1]。青年腦卒中通常被認為與傳統老年腦卒中的病因有一定差異[2]，因此，對于青年腦卒中的研究十分有必要。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是體內代謝同型半胱氨酸和葉酸的重要物質，有研究表明MTHFR基因多態性與腦卒中的發病相關[3]。該基因677位點的基因片段突變后產生3種基因型：野生純合型CC、雜合型CT及純合型突變TT。該基因產生的突變可以使血中同型半胱氨酸水平升高[4]，是心血管疾病的危險因素，但該基因在腦血管疾病，特別是青年腦卒中的研究較少，因此，本研究通過對MTHFR基因型、同型半胱氨酸水平、血小板參數等指標分析，比較青年腦卒中與老年腦卒中發病危險因素的差異。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016—2020年首都醫科大學附屬北京天壇醫院收治的627例腦卒中患者和健康志愿者作為研究對象。依據年齡將>45歲腦卒中患者作為老年腦卒中組，≤45歲腦卒中患者作為青年腦卒中組[5]；健康志愿者作為對照組。腦卒中患者共216例，男202例，女14例，年齡17～85歲。其中青年腦卒中組78例，老年腦卒中組138例。對照組共411例，男252例，女159例，年齡19～82歲。

患者納入標準：根據第四次全國腦血管病會議提出的腦卒中相關標準診斷為腦卒中患者[6]。患者排除標準：診斷不明確患者；未區分腦卒中或腦出血患者；同時患有腫瘤或血液系統疾病的患者。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 MTHFR C677T基因檢測選用ABI公司VerityTMDx96 Well Thermal Cycler PCR擴增儀及西安金磁納米生物技術有限公司MTHFR C677T基因檢測試劑盒；Hcy檢測采用7020日本HITACHI 全自動生化分析儀和武漢長立生物技術開發有限公司生產的生化檢測試劑盒進行；血常規檢測采用邁瑞BC-6900全自動血細胞分析儀及配套試劑盒進行；血栓彈力圖采用美國Haemoscope公司的血栓彈力圖儀TEGTEG-5000及配套試劑盒進行。

1.2.2檢測方法 MTHFR C677T基因檢測方法為PCR-金磁微粒層析法，取患者外周血，提取其基因組DNA進行檢測；同型半胱氨酸測定使用循環酶法，利用酶促反應及還原性輔酶1的變化來測定血清同型半胱氨酸水平；血常規檢測原理為電阻抗法檢測全血；血栓彈力圖用于監測全血凝血狀態。

1.3統計學處理 采用SPSS26.0統計學軟件進行數據分析，計數資料以例數或百分率表示，組間比較行χ2檢驗；非正態分布以計量資料以M(P25,P75)表示，組間比較采用秩和檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1各組MTHFR基因型分布 老年腦卒中組和青年腦卒中組MTHFR基因677TT純合突變型比例明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，青年腦卒中組和老年腦卒中組MTHFR基因677TT純合突變型比例差異無統計學意義(P>0.05)。各組MTHFR基因型分布見表1。

表1 青、老年腦卒中組與對照組MTHFR基因型分布分析

2.2各組同型半胱氨酸水平比較 青年腦卒中組同型半胱氨酸水平為36.7(19.0,54.5)μmol/L，老年腦卒中組為29.1(20.1，45.0)μmol/L，兩組比較差異無統計學意義(P=0.209)。對照組同型半胱氨酸水平為12.4(10.3,15.1)μmol/L，低于青年腦卒中組和老年腦卒中組，差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.3青年腦卒中與老年腦卒中患者血小板功能比較 青年卒中組的血小板計數(PLT)、平均血小板體積(MPV)、大血小板比率(Plcr)和血小板壓積(PCT)與老年腦卒中組比較，差異無統計學意義(P>0.05)；青年腦卒中組的血小板分布寬度(PDW)高于老年腦卒中組，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 青、老年腦卒中組血小板功能比較[M(P25,P75)]

2.4青年腦卒中與老年腦卒中患者血栓彈力圖比較 青年腦卒中組從血凝塊形成點至描記圖最大曲線弧度作切線與水平線的夾角(α)低于老年腦卒中組，差異有統計學意義(P<0.05)；青年腦卒中組血凝塊最大振幅(MA)與老年腦卒中組比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 青、老年腦卒中組血栓彈力圖比較[M(P25,P75)]

3 討 論

近年來，我國腦卒中發病的年輕化趨勢越來越嚴重，腦卒中負擔在過去30年中也有所增加，并且在農村地區發病率尤其較高。中國腦卒中呈南北梯度，北部和中部地區腦卒中負擔最大[7]。一項歷時15年的研究表明，腦卒中患者住院率增加了一倍多，且住院死亡率較高，住院花費較多[8]。因此，早期發現腦卒中，并進行預防性治療非常必要。國內外對于青年腦卒中危險因素的研究目前大多停留在如高血壓、糖尿病、高脂血癥等傳統腦卒中危險因素上，對青年腦卒中和老年腦卒中發病因素的差異研究較少。本研究通過對MTHFR基因型、同型半胱氨酸水平、血小板參數等指標分析，比較青年腦卒中與老年腦卒中發病危險因素的差異。本研究共收集腦卒中患者216例，青年腦卒中患者78例，老年腦卒中患者138例，該比例較NING等[9]報道的青年腦卒中占全部腦卒中的13.3%更高。本研究腦卒中患者中，男202例，女14例，這與國內外報道一致[9-10]。研究顯示，在35～45歲年齡段腦血管病的發病率男性為18/100 000～142/100 000，女性為23/100 000～95/100 000，大約1.49∶1.00[9]。有文獻表明，國外同年齡段青年腦卒中男女比例為1.7∶1.0[10]。

MTHFR是葉酸代謝途經中的關鍵酶，其催化亞甲基四氫葉酸還原成5-甲基四氫葉酸，5-甲基四氫葉酸作為甲基供體，與DNA、RNA和蛋白質的修復有關，同時同型半胱氨酸依靠5-甲基四氫葉酸提供的甲基，發生甲基化反應生成甲硫氨酸，維持血漿同型半胱氨酸的正常水平[11]。研究表明，677T等位基因純合個體的酶活性只有野生型C等位基因純合個體酶活性的30% ，而是雜合子保留野生型MTHFR酶活性的65%[12]。與正常的非突變對照者相比，純合突變患者同型半胱氨酸水平更高，而雜合突變患者同型半胱氨酸水平輕度升高[13]。本研究結果顯示，與對照組比較，青年腦卒中組和老年腦卒中組MTHFR基因677TT純合突變型比例顯著增高，符合以往研究結果[13]。青年腦卒中患者中，677CC型5例，所占比例為6.4%；677CT型15例，所占比例為19.2%；677TT型58例，所占比例為74.4%。老年腦卒中患者中677CC型11例，所占比例為7.9%；677CT型35例，所占比例為25.4%；677TT型92例，所占比例為66.7%。但青年腦卒中患者MTHFR基因677TT純合突變型與老年腦卒中患者比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

由于MTHFR基因多態性，677位點C→T的突變，可導致酶活性下降，從而引起血同型半胱氨酸水平升高。筆者發現，青年腦卒中組和老年腦卒中組同型半胱氨酸水平與對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。高同型半胱氨酸會對血管內皮細胞造成損傷，促進血管平滑肌增殖，增加血液中血小板的黏附性，從而導致心腦血管疾病的發生[14]。血清同型半胱氨酸水平升高可能與顱內動脈鈣化和動脈粥樣硬化密切相關[14]。也有研究顯示，血清同型半胱氨酸水平升高與中青年患者顱內大動脈狹窄引起的缺血性中風相關[16]。本研究結果顯示，青年腦卒中組同型半胱氨酸水平與老年腦卒中組比較差異無統計學意義(P>0.05)。這一結果與本研究的MTHFR基因結果一致。

本研究還分析了各組血小板參數。青年腦卒中組的PDW高于老年腦卒中組，差異有統計學意義(P<0.05)。PDW是反映血小板體積變化的參數，正常參考值為15%～17%。如果PDW增大，說明血小板大小不均。有研究也發現，PDW是房顫患者腦卒中的重要危險因素，有可能成為預測腦卒中發生的新的生物標志物[17]。PDW的差異提示青年腦卒中和老年腦卒中的發病機制可能存在差異。

本研究選用血栓彈力圖來分析各組凝血功能，血栓彈力圖可以監測凝血的整個過程(除血管內皮因素外)，其檢測內容為血凝塊強度的變化及時間，包括血凝塊形成的速率(纖維蛋白的形成速度)、血凝塊的強度、血凝塊的穩定性(血凝塊溶解)[18]。本研究分析了反映血小板聚集功能的MA和反映血凝塊形成速率的α，結果顯示青年腦卒中組α顯著低于老年腦卒中組，提示凝血功能對于青年腦卒中和老年腦卒中的影響有明顯差異，此項結果與以往研究結果一致[17,19]。這可能與同型半胱氨酸損傷血管內皮，導致動脈粥樣硬化，使血小板易于黏附、聚集血管壁相關，且同型半胱氨酸水平升高可直接或間接引起血管內皮細胞損傷。此外，同型半胱氨酸也能氧化自身產生有毒的活性氧，引起血管功能異常，其產生的活性氧中間產物與血小板L-Arg/NOS/NO系統功能呈高度一致性變化[19]，這種功能變化可以反映內皮功能。血管疾病、血流動力學和血液成分的改變與缺血性腦卒中的發生和發展有關，因此血小板凝血功能和生物活性的評估在監測急性缺血性腦卒中發病和進展中具有重要意義，血小板參數可以作為評估急性缺血性腦卒中發生、發展的組合標志物[20]。

本研究根據文獻[6]以45歲為界，將腦卒中患者分為青年腦卒中組和老年腦卒中組，對可能的危險因素進行了分析。本研究發現，青年腦卒中患者PDW增加，α減小，提示青年腦卒中患者與老年腦卒中患者發病原因可能存在差異。但是，本研究中青年腦卒中患者與老年腦卒中患者MTHFR基因型和血同型半胱氨酸水平比較差異無統計學意義(P>0.05),這可能與本研究樣本量有關，下一步研究筆者將加大樣本量并進一步對年齡進行更細的分層，以挖掘可能存在的差異。