隋珠草莓組培快繁體系的建立

靳 然 楊夢夢

（南陽農(nóng)業(yè)職業(yè)學院 河南南陽 473000）

草莓是薔薇科草本植物，果肉中營養(yǎng)價值豐富，深受廣大人民群眾喜愛。隋珠草莓植株高大，長勢強旺，成熟早，抗病能力強，產(chǎn)量要比紅顏草莓更高，約是紅顏草莓的1.5 倍[1]。隋珠草莓種植將成為多地經(jīng)濟發(fā)展和農(nóng)民增收的重要途徑。

傳統(tǒng)草莓繁殖方式為匍匐莖繁殖或分株繁殖，但營養(yǎng)繁殖育苗，體內(nèi)病毒累積，導致草莓植株矮小、果實畸形，種苗退化，產(chǎn)量和品質(zhì)嚴重下降。植物組織培養(yǎng)技術可有效解決這一問題[2]。

目前關于隋珠草莓組織培養(yǎng)快繁研究較少。為此，文章以隋珠草莓的莖尖為外植體，建立簡單易行的隋珠草莓組培快繁體系，以期為隋珠草莓的規(guī)模化工廠生產(chǎn)提供完整可行的技術支持，更好地促進草莓的種植發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

供試的草莓品種為隋珠，采用匍匐莖的莖尖為試驗材料，所有材料來源一致，采摘于長江路生態(tài)草莓園。

1.2 試驗方法

1.2.1 取樣

選擇生長健壯的草莓植株，剪取植株上頂芽飽滿，并且小葉尚未展開的匍匐莖放入玻璃燒杯中備用。

1.2.2 外植體的預處理和消毒

將匍匐莖莖尖放在洗潔精或洗衣粉的水溶液中浸泡3 min～5 min，用軟毛刷輕輕刷洗除去表面塵土后用自來水沖洗干凈，再用流水沖洗3 h～4 h，裝入干凈玻璃瓶放置到超凈工作臺備用。在超凈工作臺上用75%的酒精浸泡30 s，無菌水沖洗2 次～3 次，后轉入濃度為0.1%的升汞溶液中處理8 min，無菌水沖洗5 次～6 次，放入無菌盤中，用無菌吸水紙吸取表面水分，切取2 mm莖尖備用。

1.2.3 初代培養(yǎng)誘導不定芽

MS為基本培養(yǎng)基，使用不同濃度的激素配比組合誘導不定芽。添加6-BA、NAA兩種激素，設置6個處理，6-BA濃度為0.50 mg/L、1.00 mg/L，NAA濃度為0.02 mg/L、0.05 mg/L，標號A1～A6。每處理接種30 瓶，每瓶接1個消毒莖尖，后置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度25 ℃，光照強度2 000 lx～3 000 lx。30 d后觀察生長情況。

1.2.4 增殖培養(yǎng)

選取長勢一致的不定芽轉接入不同激素配比的增殖培養(yǎng)基進行增殖培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)基添加不同濃度的6-BA、NAA、2,4-D，共設置8個處理，6-BA濃度為0.50 mg/L、1.00 mg/L，NAA濃度為0.05 mg/L、0.10 mg/L，2,4-D濃度為0.05 mg/L、0.10 mg/L，標記為B1～B8。培養(yǎng)基中添加30 g/L蔗糖和7 g/L瓊脂，每個處理接種30 瓶，每瓶接種2株，30 d后觀察叢生芽的生長狀況。

1.2.5 生根培養(yǎng)

將生長健壯、生長狀況一致3 cm～4 cm的隋珠草莓苗分株接種至生根培養(yǎng)基上，生根培養(yǎng)基可采用MS、1/2MS為基本培養(yǎng)基，分別添加0.10 mg/L、0.30 mg/L的IBA，共設置4個處理，標記為C1～C4，每個處理接種30 瓶，每瓶接種1 株～2 株，30 d后觀察組培苗的生根情況。

1.2.6 馴化移栽

將生根2 cm以上、長勢良好的組培苗先進行煉苗，在煉苗室放置2 d，半開封口2 d，隨后全部去除封口蓋3 d～4 d，讓組培苗逐步適應外界環(huán)境。經(jīng)煉苗后把隋珠草莓苗從培養(yǎng)瓶中取出，清水洗凈附著在根部的培養(yǎng)基后用于移栽。移栽的基質(zhì)選擇三種：草炭與蛭石的比例分別為2∶1、1∶1、1∶2，記為D1～D3。前期保證水分供應充足，2周后觀察統(tǒng)計成活率。

2 結果與分析

2.1 無菌組培苗的建立

外植體的滅菌是無菌組培苗建立的前提。75%的酒精+0.1%的升汞溶液滅菌效果良好。隋珠草莓匍匐莖莖尖污染率為42.6%，死亡率達13.7%。

2.2 初代培養(yǎng)

將消毒滅菌的隋珠草莓匍匐莖莖尖接種于A1～A6培養(yǎng)基中，接種7 d后，在生長點基部首先出現(xiàn)綠色芽點，隨后不斷長大，在16 d～18 d后萌發(fā)出幼芽。由表1可看出，在相同培養(yǎng)條件下，誘導不定芽分化的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.02 mg/L。當6-BA濃度為0.50 mg/L時，不定芽萌發(fā)率隨著NAA濃度的升高先上升后下降。NAA濃度一定時，6-BA濃度的升高反而使不定芽萌發(fā)率下降（如A2與A5對比，A3與A6對比），且A4和A6處理下不定芽萌發(fā)率差異不大。

表1 不定芽誘導結果

2.3 增殖培養(yǎng)

將隋珠草莓生長一致的不定芽轉接入增殖培養(yǎng)基中，表2結果可以看出，不同培養(yǎng)基處理的增殖倍數(shù)差異明顯，增殖培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.05 mg/L，在該種激素配比下，叢生芽生長健壯。當6-BA濃度一定時，6-BA和NAA的組合促進不定芽增殖的效果要優(yōu)于6-BA和2,4-D組合。在6-BA和NAA的組合中，NAA濃度一定時，隨著6-BA濃度的升高，增殖倍數(shù)反而下降，即6-BA濃度為0.50 mg/L時促進增殖的效果要優(yōu)于6-BA濃度為1.00 mg/L處理組。

表2 不定芽增殖結果

2.4 生根培養(yǎng)

當隋珠草莓苗長至3 cm～4 cm時，移至生根培養(yǎng)基中誘導生根。從表3可以看出，誘導生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.10 mg/L。不同培養(yǎng)基處理對生根率影響不大，1/2MS培養(yǎng)基誘導生根效果稍優(yōu)于MS培養(yǎng)基。加入IBA后更有利于根的發(fā)生，當IBA濃度為0.10 mg/L時，生根條數(shù)最大，但較高濃度IBA反而會抑制根的萌發(fā)。

表3 生根培養(yǎng)結果

2.5 馴化移栽

將煉苗后草莓苗移栽到不同基質(zhì)，14 d后統(tǒng)計成活率。表4可以看出，不同移栽基質(zhì)中組培苗成活率差異不明顯，最優(yōu)移栽基質(zhì)為草炭∶蛭石=1∶1。移栽2 周后生長達到穩(wěn)定，平均株高約4.8 cm，根系發(fā)達，生長健壯。

表4 不同基質(zhì)對隋珠草莓苗成活率的影響

3 結論與討論

隋珠草莓組培快繁研究中，外植體選用匍匐莖莖尖，用0.1%的升汞溶液消毒8 min，滅菌效果良好，成活率達86.3%。本試驗中，選用MS培養(yǎng)基，向其添加不同濃度的6-BA、NAA、2,4-D來進行隋珠草莓苗莖尖初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)的研究。對于不定芽的誘導，最佳培養(yǎng)基是MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.02 mg/L，萌發(fā)率高達86.7%。在初代培養(yǎng)階段，以紅顏草莓為材料，鄧淵確定促進草莓萌發(fā)的6-BA最適濃度為0.50 mg/L[3]，與本試驗結果相一致。

草莓組培苗的增殖培養(yǎng)階段，受多種植物激素影響，6-BA與NAA的組合促進不定芽增殖的效果要優(yōu)于6-BA和2,4-D組合。對于隋珠草莓，增殖培養(yǎng)的最適宜培養(yǎng)基為MS+6-BA0.50 mg/L+NAA0.05 mg/L。此外6-BA濃度升高增殖倍數(shù)反而會有所下降，在今后的研究中，可探究低濃度6-BA對增殖培養(yǎng)的影響，一方面可節(jié)約成本，另一方面有利于叢生芽生長健壯。

生根培養(yǎng)階段，選用了MS與1/2MS比較來研究基礎培養(yǎng)基對生根的影響，結果表明：1/2MS在生根率、生根數(shù)上都要稍優(yōu)于MS培養(yǎng)基。同時適宜濃度的IBA能夠促進根的萌發(fā)，較低濃度能夠促進根的發(fā)生，高濃度反而抑制生根，隋珠草莓苗生根培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1 mg/L。該結果與其他報道的草莓品種差異不大，說明各草莓品種對于激素誘導生根的差異較小。

馴化移栽階段，一般需要在煉苗室培育7 d左右，使組培苗逐漸適宜外界環(huán)境便于移栽。本研究中選用的移栽基質(zhì)對成活率的影響差異不明顯，最適宜的移栽基質(zhì)為草炭∶蛭石=1∶1，成活率高達89.3%。移栽后的管理也比較重要，初期要勤澆水，搭拱棚遮陰，1 周后可噴施營養(yǎng)水，2 周后可補充噴施氮肥，4 周后即可長成商品苗。