HPLC法同時測定感冒疏風丸中蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯的含量

楊深應 劉常遜 上官云蘭 陶明寶 柴連周 趙興蕊

摘要：目的 建立高效液相色譜法（HPLC）同時測定感冒疏風丸中蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯含量的方法。方法 采用Agilent 5TC-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-水（49∶51），流速1.0 mL/min，檢測波長330 nm，柱溫30.0 ℃。結果 蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯線性范圍分別為0.0451～1.3533μg（r=0.9999）和0.0164～0.4911μg（r=0.9999）;平均回收率分別為98.74%和97.09%，RSD分別為0.35%和0.29%。結論 該方法專屬性強、結果準確、操作簡便，可用于感冒疏風丸的質量控制。

關鍵詞：感冒疏風丸;高效液相色譜法;蛇床子素;二氫歐山芹醇當歸酸酯;含量測定

中圖分類號：R285.5?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2021）09-0072-04

Simultaneous Determination of Osthol and Dihydrooxanol AngelicaAcid Ester in Ganmao Shufeng Pills by HPLC

YANG Shen-ying1， LIU Chang-xun2， SHANG-guan Yun-lan3，TAO Ming-bao1， CHAI Lian-zhou2， ZHAO Xing-rui2

（1. Food and Drug Inspection and Testing Center of Baoshan City， Baoshan 678000， China;2. Baoshan Junior College of Traditional Chinese Medicine， Baoshan 678000， China; 3. School of Pharmacy， Dali University， Dali 671000， China）

【Abstract】Objective： To establish a high-performance liquid chromatography （HPLC） method for the simultaneous determination of osthol and dihydrooxanol angelica acid ester in Ganmao Shufeng Pills. Methods： An agilent 5TC-C18 column （4.6 mm×250 mm， 5 μm） was used， the mobile phase was acetonitrile-water （49：51）， the flow rate was 1.0 mL/min， the detection wavelength was 330 nm， and the column temperature was 30.0 ℃. Results： The linear ranges of osthole and dihydrooxanol angelica acid este were 0.0451～1.3533μg （r=0.9999） and 0.0164～0.4911μg （r=0.9999）， respectively and the average recoveries were 98.74% and 97.09% respectively， and the RSDs were0.35% and 0.29%. It is 0.35% and 0.29% respectively. Conclusion： The method has strong specificity， accurate results and simple operation， and can be used for the quality control of Ganmao Shufeng Pills.

【Key words】Ganmao Shufeng Pills; High Performance Liquid Chromatography; Osthole; Dihydrooxanol Angelica Acid Ester; Content Determination

感冒疏風丸收載于《衛生部藥品標準中藥成方制劑第十三冊》，由麻黃絨（炙）、苦杏仁、桂枝、獨活等十二味藥組成，具有辛溫解表、宣肺和中的功效，用于風寒感冒、發熱咳嗽、頭痛怕冷、鼻流清涕、骨節酸痛、四肢倦怠等癥[1]。處方中獨活為傘形科植物重齒毛當歸Angelica pubescens Maxim.f.biserrata Shan et Yuan的干燥根，具有祛風除濕，通痹止痛的功效[2]。感冒疏風丸有水蜜丸和大蜜丸2種劑型，其質量標準中僅有顯微鑒別及芍藥苷的薄層色譜鑒別，無含量測定項目[1]，不利于控制藥品的質量。現參考有關文獻[2-10]，建立了高效液相色譜（HPLC）法同時測定感冒疏風丸中獨活的有效成分蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯含量的方法，為提高感冒疏風丸的質量標準提供參考依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）;Sartorius BP211D型電子天平（德國賽多利斯公司）;SK2510LHC型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）;A2S-10-BE超純水機（美國艾科浦國際有限公司）。

1.2 試藥 蛇床子素對照品（批號：110822-201710，純度為99.5%），二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品（批號：111583-201605，純度為98.6%），均購自中國食品藥品檢定研究院;感冒疏風丸（昆明中藥廠有限公司生產，水蜜丸規格為6 g/袋，批號為200717，280780，281810，280262，271362，27128;大蜜丸規格為9 g/丸，批號為100070，180138，190024，190089，180136，190116，180187）;乙腈為色譜純（默克股份兩合公司）;水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent 5TC-C 18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）;流動相：乙腈-水（49∶51）;檢測波長：330 nm;流速：1.0 mL/min;柱溫：30.0 ℃;進樣量：10 μL;理論塔板數按二氫歐山芹醇當歸酸酯峰計算應不低于6 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取蛇床子素對照品22.67 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，得蛇床子素對照品儲備液;精密稱取二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品16.60 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，得二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品儲備液。再分別精密量取蛇床子素對照品儲備液2 mL、二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品儲備液1 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇制成每1 mL含蛇床子素45.11 μg和二氫歐山芹醇當歸酸酯16.37 μg的混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取水蜜丸，研細，取約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中;或取重量差異項下的大蜜丸，剪碎，混勻，取20 g，精密稱定，精密加入硅藻土10 g，研勻，取7.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）40 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方比例及工藝配制缺獨活的陰性樣品，按供試品溶液制備方法，制備陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗 精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10 μL，依法測定，記錄色譜圖。結果陰性對照色譜圖中在與對照品以及供試品色譜相對應的保留時間處無色譜峰出現，表明該方法專屬性好。色譜圖見圖1。

2.4 線性關系考察 分別精密吸取每1 mL含蛇床子素45.11 μg和二氫歐山芹醇當歸酸酯16.37 μg的混合對照品溶液1、5、10、15、20、25、30μL，進行測定，記錄峰面積，以對照品進樣質量為橫坐標（X）、色譜峰峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸，分別得蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯回歸方程為Y=3144.66X+7.68，r=0.9999（n=7）;Y=2767.62X+2.15，r=0.9999（n=7）。結果表明，蛇床子素、二氫歐山芹醇當歸酸酯進樣質量分別在0.0451～1.3533μg和0.0164～0.4911μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 精密吸取“2.2.1”項下的混合對照品溶液10 μL，連續進樣6 次，記錄峰面積。結果蛇床子素、二氫歐山芹醇當歸酸酯峰面積的RSD分別為0.62%和0.66%（n=6），表明該儀器精密度良好。

1.蛇床子素;2.二氫歐山芹醇當歸酸酯;A.對照品;B.供試品;C.陰性對照圖1 高效液相色譜圖

2.6 穩定性試驗 取“2.2.2”項下制備好的同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、16、24、32h進樣10 μL，記錄峰面積。結果蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯峰面積的RSD分別為1.44%和1.19%，表明供試品溶液在32h內穩定。

2.7 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：200717）6份，按“2.2.2”項下制備供試品溶液，測定蛇床子素和二氫歐山芹醇當歸酸酯的平均含量為0.2102mg/g和0.0803mg/g，RSD分別為0.71%和0.73%（n=6）。表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗 稱取已知含量的感冒疏風丸（批號：200717）6份，每份約1.5 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入每1mL分別含蛇床子素0.0632mg、二氫歐山芹醇當歸酸酯0.0242mg的混合對照品溶液液5mL，再精密加入甲醇20mL，按“2.2.2”項下供試品溶液制備方法操作，進行測定，計算回收率。結果見表1。

2.9 樣品含量測定 取不同批號的樣品，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件測定樣品中蛇床子素、二氫歐山芹醇當歸酸酯的含量。結果見表2。

3 討論

3.1 檢測波長的選擇 采用二極管陣列檢測器在190～400 nm波長下對蛇床子素、二氫歐山芹醇當歸酸酯對照品溶液進行紫外掃描，結果蛇床子素在322 nm處有最大吸收，二氫歐山芹醇當歸酸酯在330 nm處有最大吸收，參考《中華人民共和國藥典》2020年版一部“獨活”項下含量測定的檢測波長，故本實驗選用330 nm作為檢測波長。

3.2 提取條件的選擇 經查閱文獻，選擇提取溶劑為甲醇;考察了超聲、加熱回流2種提取方式，結果表明兩者提取效率相當，但超聲提取操作簡便，故選用超聲提取;分別考察了超聲30、40、50、60 min的提取情況，結果表明超聲40 min待測成分已提取完全，因此確定超聲時間為40 min。

3.3 流動相的選擇 本實驗考察了甲醇-水體系、乙腈-水體系，結果表明乙腈的洗脫能力更強，峰形較好，通過考察不同比例的流動相，最終選擇以乙腈-水（49∶51）為流動相，該流動相基線較平穩，保留時間適中，分離度、拖尾因子等色譜參數都能達到要求。

綜上所述，本實驗建立的HPLC法測定感冒疏風丸中蛇床子素、二氫歐山芹醇當歸酸酯含量的方法，操作簡便，重復性好，專屬性高，可作為感冒疏風丸的質量控制的檢測方法。

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（收稿日期：2021-04-22）