廣藿香加入厚樸后提取工藝及測定條件的優(yōu)化研究*

齊樂輝，尹 蕊，富 波，楊連榮，田 園，范卓文

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150040）

廣藿香為唇形科廣藿香（Pogostemon cablin（Blanco）Benth.）的干燥莖葉部分，主治脘痞嘔吐、暑濕表證等[1]；厚樸為木蘭科厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.）及凹葉厚樸（Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.）的干燥外皮或根皮，具有行氣消積、去燥濕、平喘功效[1]，是消化系統(tǒng)和抗病毒疾病的常用中藥[2]。廣藿香和厚樸均為典型的化濕、理氣中藥，臨床上常配伍使用，如藿樸夏苓湯、藿香正氣液等名方劑中均有此藥對。廣藿香、厚樸作為主要的化濕藥，具有多種藥理作用[3]。

現(xiàn)代研究中，大多數(shù)將廣藿香的揮發(fā)油類成分作為評價廣藿香的指標(biāo)，其揮發(fā)油有廣藿香醇和廣藿香酮等[4，5]。對水溶性、有藥理活性的物質(zhì)研究較少，非常有必要進(jìn)行深入的研究，完善研究廣藿香水提物的物質(zhì)基礎(chǔ)，為深入研究廣藿香的水溶性成分的藥理活性提供依據(jù)。

1 實驗部分

1.1 儀器及材料

LT502型電子天平（常熟市天量儀器有限責(zé)任公司）；KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；HR-20 1000g多功能粉碎機(jī)（上海哈瑞斯電器有限公司）；Ultimate 3000超快速液相色譜儀（賽默飛世爾科技（中國）有限公司）。

廣藿香藥材產(chǎn)于廣東肇慶；姜厚樸產(chǎn)于浙江；香草酸和原兒茶酸對照品購自上海源葉生物科技有限公司；甲醇（色譜純天津星馬克科技發(fā)展有限公司）；乙腈、H3PO4均為色譜純，天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；純凈水為娃哈哈集團(tuán)生產(chǎn)。

1.2 正交試驗設(shè)計

為了最大限度提高廣藿香中兩種水溶性成分（香草酸、原兒茶酸）的提取效率，建立了對于樣品提取的正交試驗方案，選提取時間（A）、配料比（B）、加水量（C）作為考察因素，每個因素4個水平，建立L4（23）正交試驗，見表1。

表1 因素水平Tab.1 Level of factors

1.3 HPLC條件的優(yōu)化

為實現(xiàn)廣藿香中水溶性成分（香草酸、原兒茶酸）的快速分離，得到最佳峰型，對廣藿香中水溶性成分（香草酸、原兒茶酸）的含量進(jìn)行準(zhǔn)確高效的檢測，進(jìn)行HPLC條件優(yōu)化。

本研究選擇流動相甲醇-水、乙腈-水（含0.1%H3PO4）進(jìn)行洗脫，分別在283、254、260、248nm不同檢測波長下進(jìn)行檢測，進(jìn)行洗脫程序的選擇如下。

HPLC色譜條件：色譜柱：Supersil ODS2（150mm×4.6mm，5μm）；柱溫：30℃；流速：1.0mL·min-1；進(jìn)樣量：10μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 正交試驗結(jié)果

由表2直觀分析發(fā)現(xiàn)，峰面積大小影響因素的順序為B＞A＞C。

表2 正交試驗結(jié)果Tab.2 Orthogonal test results

由表3可知，廣藿香提取效率最佳組合為A1B1C1，所以確定提取時間為30min，加水量為50mL，廣藿香與厚樸配伍的比例為1∶1為最佳提取條件。

表3 方差分析表Tab.3 Variance Analysis Table

2.2 HPLC色譜條件優(yōu)化結(jié)果

使用甲醇-水為洗脫流動相時，色譜峰出峰較少，色譜峰分辨率較差，不能完整的呈現(xiàn)香草酸、原兒茶酸的最佳峰形，見圖1。

圖1 以乙醇和水為流動相得到的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatogram with ethanol and water as mobile phase

在采用乙腈-水（含0.1% H3PO4為流動相，并進(jìn)行梯度洗脫）時，色譜峰的分離效果得到明顯改善，色譜峰峰數(shù)較多。

圖2 以乙腈-水（含0.1% H3PO4）為流動相得到的HPLC色譜圖Fig.2 HPLC chromatogram with acetonitrile water（0.1% phosphoric acid）as mobile phase

3 結(jié)論

采用蒸餾水作為溶劑進(jìn)行原兒茶酸和香草酸的加熱回流提取實驗，正交試驗結(jié)果表明，峰面積大小影響因素的順序為B＞A＞C，方差結(jié)果分析顯示，廣藿香提取效率最佳組合為A1B1C1，提取時間為30min，加水量為50mL，廣藿香與厚樸配伍的比例為1∶1為最佳提取條件。

經(jīng)洗脫程序優(yōu)化，最終確定的色譜條件為：Ultimate 3000 HPLC儀器，Supersil ODS2（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱，柱溫：30℃，流速：1.0mL·min-1，進(jìn)樣量：10μL，流動相：乙腈-水（含0.1% H3PO4），0~10min，10%~25%乙腈，檢測波長：254nm。