circ_0000144靶向miR-502-5p調(diào)控人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖和凋亡及遷移侵襲

儲(chǔ)明慧，陳海銀，張曉力

?KEYWORDS:retinoblastoma; circ_0000144; miR-502-5p; proliferation; apoptosis; migration; invasion

0引言

視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤是一種眼內(nèi)惡性腫瘤，最常影響5歲以下的嬰兒[1]。臨床上視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者的典型特征是白瞳和斜視，活產(chǎn)兒發(fā)病率約為1/20 000[2]。盡管在過(guò)去的幾十年中進(jìn)行了廣泛的研究，但視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤仍然難以診斷和治愈，在發(fā)展中國(guó)家，相關(guān)的死亡率高達(dá)約70%[3]。因此，闡明發(fā)病機(jī)制的分子機(jī)制對(duì)于視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的早期發(fā)現(xiàn)和靶向治療十分重要。環(huán)狀RNA(circular RNA，circRNA)是單鏈，共價(jià)閉合的RNA分子，在多種類型的癌癥(包括結(jié)直腸癌，肝細(xì)胞癌和胰腺癌)中表現(xiàn)出異常表達(dá)，可能成為各種癌癥類型的診斷或治療靶標(biāo)[4-5]。屬于一類短非編碼RNA(19～22個(gè)核苷酸)的微小RNA(MicroRNA，miRNA)通過(guò)靶向影響細(xì)胞生理和疾病發(fā)展的多種分子來(lái)調(diào)控基因表達(dá)水平，在人類疾病中發(fā)揮重要作用[6]。研究表明，circ_0000144在胃癌組織和細(xì)胞中上調(diào)表達(dá)，敲低其表達(dá)可減緩胃癌細(xì)胞的增殖、克隆形成、遷移和侵襲，加速細(xì)胞凋亡[7]。circ_0000144在膀胱癌組織中表達(dá)上調(diào)，下調(diào)其表達(dá)可抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖和侵襲[8]。miR-502-5p在腎細(xì)胞癌組織中低表達(dá)，上調(diào)其表達(dá)可抑制腎細(xì)胞癌細(xì)胞的遷移和侵襲，circ_001842通過(guò)miR-502-5p參與腎細(xì)胞癌發(fā)病機(jī)制[9]。miR-502-5p在乳腺癌組織和細(xì)胞中下調(diào)表達(dá)，可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[10]。但是，目前尚未探討circ_0000144和miR-502-5p在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)概況，以及其在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞中的生物學(xué)功能和機(jī)制。基于此，本研究旨在確定circ_0000144和miR-502-5p在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移侵襲中所起的作用，以增進(jìn)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤發(fā)病機(jī)制的理解。

1材料和方法

人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞株Y79購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞資源中心(上海)，Roswell Park Memorial Institute(RPMI)1640培養(yǎng)基、胎牛血清(fetal calf serum，F(xiàn)BS)購(gòu)自美國(guó)Invitrogen，si-circ_0000144、si-NC、pcDNA、pcDNA-circ_0000144、miR-502-5p mimic、miR-502-5p inhibitor(anti-miR-502-5p)、mimic陰性對(duì)照miR-NC，inhibitor陰性對(duì)照anti-miR-NC購(gòu)自上海GenePharma，M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶購(gòu)自日本TaKaRa，SYBR Green assay試劑盒購(gòu)自德國(guó)Roche，溴化噻唑藍(lán)四氮唑(thiazole blue tetrazolium bromide，MTT)購(gòu)自美國(guó)Life Technologies，膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Becton Dickinson，RIPA緩沖液、二抗購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling Technology，二辛可寧酸蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific，ECL工作液購(gòu)自南京Biochannel，熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)BioVision，兔單克隆細(xì)胞核相關(guān)抗原Ki-67(nuclear associated antigen Ki67，Ki-67)抗體、兔單克隆B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2)抗體、兔單克隆Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bcl-2 associated x protein，Bax)抗體、兔單克隆基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloprotease，MMP)-2抗體、兔單克隆MMP-9抗體、兔單克隆甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)購(gòu)自美國(guó)Abcam公司。Multiscan MK3酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific，7500 PCR儀購(gòu)自美國(guó)ABI，F(xiàn)ACSCalbur流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)BD。

1.2方法

1.2.1實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)circ_0000144和miR-502-5p表達(dá)按照制造商的說(shuō)明，用TRIzol提取視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織和瘤旁組織的總RNA，使用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶將其合成為互補(bǔ)DNA(complementary DNA，cDNA)。使用SYBR Green試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)。circ_0000144和miR-502-5p，GAPDH(用于circRNA歸一化)和U6(用于miRNA歸一化)的引物如下：circ_0000144有義：5’-GAGTGTTGGCCTGTCCTCAA-3’和反義5’-TTGTGCCCAGTTGCCTGTAT-3’；GAPDH有義：5’-ACACCCACTCCTCCACCTTT-3’和反義：5’-TTACTCCTTGGAGGCCATGT-3’；miR-502-5p：5’-ATCCTTGCTATCTGGGTGCTA-3’和通用引物5’-CGAATTCTAGAGCTCGAGGCAGGCGACATGGCTGGCTAGTTAAGCTTGGTACCGAGCTCGGATCCACTAGTCC(T)-3’；U6有義：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’和反義5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。使用2-ΔΔCt相對(duì)定量方法評(píng)估circ_0000144和miR-502-5p相對(duì)表達(dá)水平，其中ΔCt=Ct(靶標(biāo))-Ct(GAPDH/U6)。

1.2.2細(xì)胞培養(yǎng)與分組處理Y79細(xì)胞在含10% FBS的RPMI 1640培養(yǎng)基中和37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)期Y79細(xì)胞分為si-NC組(轉(zhuǎn)染si-NC)、si-circ_0000144組(轉(zhuǎn)染si-circ_0000144)、miR-NC組(轉(zhuǎn)染miR-NC)、miR-502-5p組(轉(zhuǎn)染miR-502-5p mimic)、pcDNA組(轉(zhuǎn)染pcDNA)、pcDNA-circ_0000144組(轉(zhuǎn)染pcDNA-circ_0000144)、si-circ_0000144+anti-miR-NC組(轉(zhuǎn)染si-circ_0000144和anti-miR-NC)、si-circ_0000144+anti-miR-502-5p組(轉(zhuǎn)染si-circ_0000144和anti-miR-502-5p)。將Y79細(xì)胞以2×105細(xì)胞/孔的密度接種在6孔板中，匯合至60%時(shí)，利用Lipofectamine 2000試劑進(jìn)行上述轉(zhuǎn)染。48h后，根據(jù)1.2.1中的qRT-PCR檢測(cè)步驟，測(cè)定circ_0000144和miR-502-5p表達(dá)，并進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。

1.2.3MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖將轉(zhuǎn)染48h后的Y79細(xì)胞接種到96孔板中，然后將細(xì)胞培養(yǎng)2d時(shí)，分別與100μL無(wú)菌MTT染料(0.5mg/mL)和150μL二甲基亞砜(dimethyl sulphoxide，DMSO)孵育，15min后，于Multiscan MK3酶標(biāo)儀測(cè)量490nm處的吸光度OD值。

1.2.4免疫印跡實(shí)驗(yàn)測(cè)定蛋白表達(dá)用含有蛋白酶抑制劑混合物的RIPA緩沖液裂解轉(zhuǎn)染的Y79細(xì)胞，并根據(jù)制造商的說(shuō)明使用二辛可寧酸蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。然后將20μg蛋白質(zhì)上樣到10%凝膠上，使用SDS-PAGE分離并轉(zhuǎn)膜。然后在室溫下將膜用5%無(wú)脂牛奶封閉2h。隨后，將膜與Ki-67、Bcl-2、Bax、MMP-2、MMP-9(均為1∶1 000)和GAPDH(參照，1∶2 500)的一抗一起孵育，在4℃過(guò)夜，與抗辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗(1∶2 000)室溫下孵育2h。通過(guò)ECL工作液觀察免疫反應(yīng)帶。

1.2.5流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡將轉(zhuǎn)染48h后的Y79細(xì)胞用磷酸鹽緩沖液洗滌，重懸于500μL結(jié)合緩沖液中，在黑暗中添加5μL FITC和5μL碘化丙啶，并孵育15min。之后，通過(guò)FACSCalbur流式細(xì)胞儀測(cè)量Y79細(xì)胞凋亡。

1.2.6Transwell測(cè)定細(xì)胞遷移和侵襲分別使用24孔8μm的Transwell和Matrigel包被的Transwell進(jìn)行遷移和侵襲分析。將約100μL Y79細(xì)胞溶液(包含5×105個(gè)細(xì)胞)鋪板到Transwell插入物的頂部腔室中，然后將600μL 10% FBS培養(yǎng)基添加到下部腔室中。24h后，將遷移或侵襲的細(xì)胞用70%乙醇固定，用1%結(jié)晶紫染色，并在光學(xué)顯微鏡(200×放大倍數(shù))下在5個(gè)視野中計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)。

采用 HPS、APP、SS、PCV2、B.subtilis、E.coli、Salmonella、S.aureu的DNA和CSFV的cDNA進(jìn)行ddPCR特異性驗(yàn)證。結(jié)果表明：除了HPS特異性擴(kuò)增，其他檢測(cè)均為陰性，說(shuō)明該方法特異性較好。

1.2.7生物信息學(xué)預(yù)測(cè)與雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)Circular RNA Interactome軟件預(yù)測(cè)circ_0000144與miR-502-5p存在互補(bǔ)配對(duì)的核苷酸序列。將circ_0000144和miR-502-5p的預(yù)測(cè)結(jié)合位點(diǎn)片段和突變片段分別插入各自的熒光素酶載體，即報(bào)告載體野生型(WT)-circ_0000144和突變型(MUT)-circ_0000144。為了確定二者的結(jié)合，將miR-NC、miR-502-5p mimic與WT-circ_0000144、MUT-circ_0000144一起轉(zhuǎn)染到Y(jié)79細(xì)胞中，48h后收集細(xì)胞并裂解，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)使用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒和分析系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定。

2結(jié)果

2.1circ_0000144和miR-502-5p在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)31例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中circ_0000144表達(dá)量高于瘤旁組織，miR-502-5p表達(dá)量低于瘤旁組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見(jiàn)表1。

表1 circ_0000144和miR-502-5p在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)

2.2抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖的影響如表2、圖1所示，si-circ_0000144組較si-NC組Y79細(xì)胞中circ_0000144表達(dá)量減少，OD值、Ki-67蛋白表達(dá)量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

圖1 Ki-67蛋白表達(dá)。

表2 抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖的影響

2.3抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞凋亡的影響如表3、圖2所示，si-circ_0000144組Y79細(xì)胞凋亡率高于si-NC組，Bcl-2蛋白表達(dá)量低于si-NC組，Bax蛋白表達(dá)量高于si-NC組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

表3 抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞凋亡的影響

圖2 抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞凋亡的影響 A：凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)；B：細(xì)胞凋亡流式圖。

2.4抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞遷移和侵襲的影響如表4、圖3所示，si-circ_0000144組Y79細(xì)胞的遷移、侵襲細(xì)胞數(shù)比si-NC組少，并且MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量比si-NC組低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖3 抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞遷移和侵襲的影響 A：遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)；B：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞的遷移、侵襲(結(jié)晶紫染色)。

表4 抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞遷移和侵襲的影響

2.5circ_0000144靶向調(diào)控miR-502-5p的表達(dá)Circular RNA Interactome軟件預(yù)測(cè)出circ_0000144與miR-502-5p的靶向結(jié)合位點(diǎn)(圖4)。miR-502-5p組WT-circ_0000144熒光活性低于miR-NC組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，miR-502-5p組MUT-circ_0000144熒光活性與miR-NC組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表5)。pcDNA-circ_0000144組(0.39±0.03)比pcDNA組(1.00±0.08)減少miR-502-5p表達(dá)量，si-circ_0000144組(3.01±0.22)比si-NC組(1.02±0.06)增加miR-502-5p表達(dá)量，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖4 circ_0000144的序列中含有與miR-502-5p互補(bǔ)的核苷酸序列。

表5 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)

2.6miR-502-5p過(guò)表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響如表6、7，圖5、6所示，miR-502-5p組較miR-NC組增加Y79細(xì)胞miR-502-5p表達(dá)量、凋亡率，減少OD值、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)，以及降低Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量，提高Bax蛋白表達(dá)量，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

圖5 miR-502-5p過(guò)表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞凋亡、遷移和侵襲的影響 A：細(xì)胞凋亡流式圖；B：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞的遷移和侵襲(結(jié)晶紫染色)。

表6 miR-502-5p過(guò)表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響

表7 miR-502-5p過(guò)表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

圖6 增殖、凋亡、遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)。

2.7干擾miR-502-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的作用如表8、9，圖7、8所示，與si-circ_0000144+anti-miR-NC組比較，si-circ_0000144+anti-miR-502-5p組Y79細(xì)胞miR-502-5p表達(dá)量、凋亡率減少，OD值、遷移及侵襲細(xì)胞數(shù)增加，Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量升高，Bax蛋白表達(dá)量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

圖7 干擾miR-502-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞凋亡、遷移和侵襲的作用 A：細(xì)胞凋亡流式圖；B：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞的遷移和侵襲(結(jié)晶紫染色)。

表8 干擾miR-502-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的作用

表9 干擾miR-502-5p表達(dá)逆轉(zhuǎn)了抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)的作用

圖8 增殖、凋亡、遷移侵襲相關(guān)蛋白表達(dá)。

3討論

在目前的研究中，我們確定circ_0000144在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中上調(diào)。功能研究表明，siRNA對(duì)circ_0000144的下調(diào)減弱了視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲特性，并加速細(xì)胞的凋亡。而增殖蛋白Ki-67、抗凋亡蛋白Bcl-2、轉(zhuǎn)移蛋白MMP-2、MMP-9的上調(diào)，以及促凋亡蛋白Bax的下調(diào)也證明了這一結(jié)果。在既往的報(bào)道中，hsa_circ_0000144的表達(dá)在胃癌細(xì)胞系中上調(diào)，可促進(jìn)胃癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲[11]。circ_0000144在甲狀腺癌組織和甲狀腺癌細(xì)胞系中的表達(dá)顯著升高，其高表達(dá)與患者的腫瘤大小、患者的腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。敲除circ_0000144可抑制甲狀腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲[12]。這些與本研究的結(jié)果相吻合，證實(shí)了circ_0000144在體外可促進(jìn)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，以及減少細(xì)胞凋亡，這為circ_0000144作為視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤致癌性circRNA提供了新的證據(jù)。

本研究qRT-PCR分析表明，miR-502-5p在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中顯著下調(diào)，表明其可能具有抑癌作用。然而miR-502-5p是否在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中起作用仍然未知。先前的研究表明，miR-502-5p與腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有關(guān)，例如You等[13]報(bào)道，與鄰近的正常組織相比，胃癌腫瘤組織中的miR-502-5p明顯下調(diào)，miR-502-5p的過(guò)表達(dá)在體外減弱了胃癌細(xì)胞的增殖，遷移/侵襲并誘導(dǎo)了G1期阻滯，并且抑制了體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。Ying等[14]揭示miR-502-5p在膀胱癌中被下調(diào)，miR-502-5p的過(guò)表達(dá)在體外抑制膀胱癌細(xì)胞增殖和遷移。Peng等[15]鑒定了胃癌組織和細(xì)胞中低表達(dá)的miR-502-5p，發(fā)現(xiàn)miR-502-5p通過(guò)靶向SP1來(lái)調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲而充當(dāng)抑癌基因。本研究觀察到，miR-502-5p過(guò)表達(dá)時(shí)，Y79細(xì)胞凋亡率、Bax蛋白表達(dá)量顯著增加，細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)量則顯著減少。說(shuō)明與既往報(bào)道[13-15]一致，miR-502-5p是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的腫瘤抑制劑，可以有效抑制視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展。

越來(lái)越多的證據(jù)表明，某些circRNA可以通過(guò)充當(dāng)miRNA海綿來(lái)調(diào)節(jié)miRNA，并在轉(zhuǎn)錄控制中發(fā)揮重要作用[16]。例如，胃癌中circ_0032627可以充當(dāng)miR-502-5p的海綿[17]。肝細(xì)胞癌中circ-ZNF652可以海綿化miR-203[18]。本實(shí)驗(yàn)中，Circular RNA Interactome軟件預(yù)測(cè)到circ_0000144與miR-502-5p的靶向結(jié)合，隨后的雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)證實(shí)circ_0000144靶向調(diào)控miR-502-5p的表達(dá)。且上調(diào)circ_0000144時(shí)，miR-502-5p表達(dá)被抑制，下調(diào)circ_0000144時(shí)，miR-502-5p表達(dá)被促進(jìn)，說(shuō)明circ_0000144可以負(fù)調(diào)控miR-502-5p的表達(dá)。干擾miR-502-5p表達(dá)后，抑制circ_0000144表達(dá)對(duì)Y79細(xì)胞增殖、遷移和侵襲、Ki-67、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)的抑制作用被逆轉(zhuǎn)，其對(duì)細(xì)胞凋亡、Bax蛋白表達(dá)的促進(jìn)作用也被逆轉(zhuǎn)。這些結(jié)果提示，circ_0000144通過(guò)負(fù)調(diào)控miR-502-5p參與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞惡性進(jìn)展。

總之，本研究表明，circ_0000144在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中高表達(dá)，circ_0000144的抑制通過(guò)調(diào)節(jié)miR-502-5p來(lái)減輕視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的進(jìn)展。當(dāng)前的研究強(qiáng)調(diào)了circ_0000144作為腫瘤啟動(dòng)子在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的潛在作用，因此circ_0000144是視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤治療的潛在靶點(diǎn)。