HER2、G-17與胃蛋白酶原C在胃癌中的表達(dá)及臨床意義*

李 洪,馮雪晶,秦 維,莊恢勇

瓊海市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，海南瓊海 222000

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率高，早期臨床癥狀特異度不高，多數(shù)患者首次就診時(shí)，病情已發(fā)展至晚期，死亡風(fēng)險(xiǎn)大[1]。尋找胃癌早期診斷及有效治療的新方法，是目前研究的重點(diǎn)。隨著臨床對(duì)胃癌不斷深入的研究及生物科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，胃癌被證實(shí)是一種基因疾病，表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)、胃泌素-17(G-17)、胃蛋白酶原C等逐漸被應(yīng)用于胃癌相關(guān)研究[2-3]。本研究旨在檢測(cè)胃癌組織內(nèi)HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率，并分析其與患者臨床病理特征間的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取瓊海市人民醫(yī)院2018年1月31日至2019年12月31日收治的89例胃癌患者和同期選取30例經(jīng)胃鏡活檢、病理檢查證實(shí)胃黏膜組織正常(正常胃黏膜組)患者作為研究對(duì)象，并將89例胃癌患者的胃癌組織作為胃癌組，其胃癌旁組織作為癌旁組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《胃癌規(guī)范化診療指南》[4]中對(duì)胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)患者病歷資料、病理資料完整；(3)患者意識(shí)清楚，符合手術(shù)適應(yīng)證。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)體質(zhì)過敏或凝血功能障礙；(2)合并嚴(yán)重基礎(chǔ)疾病或惡液質(zhì)；(3)合并全身嚴(yán)重感染；(4)既往上腹部手術(shù)及手術(shù)史行放療、化療及藥物治療、合并其他惡性腫瘤。

1.2儀器與試劑 石蠟自動(dòng)連續(xù)切片機(jī)(德國(guó)生產(chǎn))、臺(tái)式高速離心機(jī)(TGL-16型)、SZ-93自動(dòng)雙重純水蒸餾器(上海亞榮)、光學(xué)顯微鏡Olympus(日本)、西門子冰箱(德國(guó))、電熱恒溫干燥箱(上海森信)。兔抗人HER2單克隆抗體(北京中杉生物技術(shù)有限公司)；胃泌素抗體(福州邁新公司)；兔抗人胃蛋白酶原C多克隆抗體(上海活樂生物技術(shù)有限公司)；免疫組化SABC試劑盒(武漢博士德生物技術(shù)有限公司)；二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液、磷酸鹽緩沖液(PBS)、蘇木精等均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。

1.3方法 (1)石蠟切片：取存檔蠟片，4 μm連續(xù)切片后置于60 ℃恒溫箱中烤2 h，取出后室溫下冷卻。(2)采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)石蠟切片HR2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率。使用PBS代替一抗，作為空白對(duì)照。具體步驟：先將石蠟切片脫蠟，PBS沖洗3次，用封閉液封閉后滴加一抗工作液 37 ℃孵育6 min，PBS沖洗，滴加試劑1、2，再次PBS液沖洗，加DAB顯色，再用蘇木素復(fù)染，最后用自來水充分沖洗，復(fù)染，梯度乙醇脫水，封片。

1.4結(jié)果判定 (1)染色強(qiáng)度根據(jù)5個(gè)觀察視野中陽(yáng)性顆粒數(shù)量分為4個(gè)等級(jí)(Sulzers分級(jí)法)，無陽(yáng)性顆粒記為0分，弱陽(yáng)性顆粒記為1分，陽(yáng)性顆粒記為2分，強(qiáng)陽(yáng)性顆粒記為3分，最后求出染色強(qiáng)度評(píng)分平均值；(2)觀察5個(gè)高倍視野，計(jì)算100個(gè)細(xì)胞中陽(yáng)性百分率，按照陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)分為4級(jí)，分別為無陽(yáng)性細(xì)胞記0分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤25%記1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>25%～50%記2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%記3分，最后求出陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)分平均值。免疫組織化學(xué)標(biāo)本判定標(biāo)準(zhǔn)為染色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，乘積為0～<1分視為陰性，乘積≥1分視為陽(yáng)性[5]。

1.5觀察指標(biāo) (1)觀察正常胃黏膜組、癌旁組及胃癌組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率；(2)胃癌組不同臨床病理特征間HER2、G-17、胃蛋白酶原C表達(dá)率比較。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率檢驗(yàn)，對(duì)1<理論頻數(shù)<5的4個(gè)表計(jì)數(shù)資料進(jìn)行連續(xù)矯正χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1各組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率比較 正常胃黏膜組、癌旁組及胃癌組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；正常胃黏膜組及癌旁組HER2陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于胃癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

2.2胃癌組不同臨床病理特征間HER2、G-17、胃蛋白酶原C表達(dá)率比較 胃癌組不同Lauren分型、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移患者間HER2陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胃癌組不同分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期患者間G-17陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。胃癌組不同分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期患者間胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 胃癌組不同臨床病理特征間HER2、G-17、胃蛋白酶原C表達(dá)率比較[n(%)]

3 討 論

HER2是表皮生長(zhǎng)因子受體家族中的一員，具有促進(jìn)細(xì)胞分化、抑制細(xì)胞凋亡的功效[6]。通常情況下，HER2主要表達(dá)于胚胎時(shí)期，成年后HER2一般不表達(dá)，但在某些不良因素的刺激下，HER2構(gòu)象及表達(dá)失控，處于激活狀態(tài)，并具備惡性轉(zhuǎn)化活性，可通過某些特殊通路，誘導(dǎo)鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖、黏附及轉(zhuǎn)移，參與惡性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7]。黎美仁等[8]研究發(fā)現(xiàn)，膀胱尿路上皮癌組織內(nèi)HER2陽(yáng)性表達(dá)量明顯高于膀胱炎及低度惡性潛能的乳頭狀尿路上皮腫瘤組織，且HER2陽(yáng)性表達(dá)量還與上皮癌患者腫瘤直徑、基層浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)等臨床因素相關(guān)，提示HER2參與上皮癌的發(fā)生與發(fā)展。梁宇等[9]研究提示HER2基因突變可能與肺癌患病年輕化有關(guān)。劉雅坤等[10]研究發(fā)現(xiàn)，HER2在上皮性卵巢癌中呈高度表達(dá)，且其表達(dá)量與腫瘤分期、細(xì)胞分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況等病理特征相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，正常胃黏膜組及癌旁組HER2陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于胃癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；胃癌組不同Lauren分型、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移患者間HER2陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示胃癌組患者胃癌組織中HER2陽(yáng)性表達(dá)率異常升高。姜雷等[11]研究報(bào)道與本文研究結(jié)果相似。

G-17是一種重要的胃腸道肽類激素，主要生理功能是促進(jìn)黏膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)，幫助受損胃黏膜修復(fù)并參與胃黏膜炎性反應(yīng)[12]。有研究明確指出，胃泌素可通過加速細(xì)胞增殖與分化、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡、協(xié)同環(huán)氧化酶-2促癌等形式參與胃黏膜癌變[13]。本文研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組不同分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期患者間G-17陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

胃蛋白酶原C是具有消化功能的內(nèi)切酶，是胃蛋白酶的前體，胃蛋白酶原C廣泛分布于胃及近端十二指腸，是胃黏膜細(xì)胞分化的終末產(chǎn)物，胃蛋白酶原C變化能反映胃分泌功能及分化程度[14]。本研究結(jié)果顯示，正常胃黏膜組胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率為100.0%，癌旁組胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率為44.9%，而胃癌組胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率為18.0%。這與胃癌組織內(nèi)多半有黏膜萎縮，大量細(xì)胞的功能被破壞，胃黏膜分泌功能下降，且組織內(nèi)惡性轉(zhuǎn)化的細(xì)胞存在分化障礙，致使胚胎細(xì)胞內(nèi)的胃蛋白酶原C基因突變，最終導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞終末分化產(chǎn)物胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率降低有關(guān)[15]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，胃癌組不同分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移、TNM分期患者間胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

綜上所述，胃癌患者HER2、G-17及胃蛋白酶原C陽(yáng)性表達(dá)率可作為胃癌篩查指標(biāo)，為胃癌的早診斷、早治療提供可靠的臨床依據(jù)。