表面增強(qiáng)拉曼光譜法 快速測定藥酒中烏頭堿

談銘 張潔

烏頭堿是一種雙酯類生物堿，也是存在于川烏、草烏、附子等植物中的主要有毒成份，口服純?yōu)躅^堿0.2mg即可中毒，3-5mg可致死。川烏、草烏、附子是中醫(yī)臨床常用的中藥，具有治療關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕等功效。某些不法商販、餐飲單位及民眾會用草烏、川烏等植物來自制藥酒，但由于不能正確掌握藥酒的藥物配伍、用量，以及不能正確炮制藥物，因此時(shí)有烏頭堿中毒甚至死亡事件發(fā)生。由于烏頭堿易溶于乙醇，所以特別容易中毒，誤服外用的草烏藥酒，只需要一小口（10mL）就能使人中毒甚至死亡。

近年來，針對烏頭堿的檢測方法主要有高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、薄層色譜法等。不過，上述方法前處理復(fù)雜，對設(shè)備和人員要求較高，不能滿足現(xiàn)場快速檢測的需求。目前，檢測藥酒中烏頭堿的快檢方法尚未有文獻(xiàn)報(bào)道，因此建立表面增強(qiáng)拉曼光譜法快速測定藥酒中烏頭堿的方法，對于現(xiàn)場檢測藥酒有著重要意義。

本研究以中國勁酒、海王酒、竹葉青酒、椰島鹿龜酒、寧夏紅枸杞酒等藥酒為研究對象，通過QuEChERS前處理技術(shù)對樣品進(jìn)行提取、凈化，結(jié)合表面增強(qiáng)試劑與便攜式拉曼光譜儀對提取液進(jìn)行測定，建立了表面增強(qiáng)拉曼技術(shù)快速檢測藥酒中烏頭堿的方法。

一、儀器與試劑

1.儀器。ZPR-1201便攜式拉曼光譜儀，江蘇中朗宏泰科學(xué)儀器有限公司;TG16-WS高速離心機(jī)，湘儀離心機(jī)儀器有限公司;IKA漩渦振蕩器，德國IKA集團(tuán)。

2.試劑。乙腈，色譜純，百靈威科技有限公司;表面增強(qiáng)試劑、匹配劑，中朗宏泰科學(xué)儀器有限公司;無水硫酸鎂、無水乙酸鈉、氯化鈉，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;PSA、C18、石墨化炭黑，深圳逗點(diǎn)生物技術(shù)有限公司;烏頭堿，Sigma-Aldrich公司。所有化學(xué)試劑溶液用Milli-Q超純水（Millipore，Inc.，Bedford，USA）配制。

二、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及樣品制備

1.標(biāo)準(zhǔn)儲備液配制。準(zhǔn)確稱取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品各10mg，用乙腈溶解并定容至10mL，搖勻制成濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，并于4℃避光環(huán)境中保存，使用時(shí)用乙腈稀釋至所需濃度。

2.標(biāo)準(zhǔn)中間液A配制。精密移取上述濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液100μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻制成濃度為10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

3.標(biāo)準(zhǔn)中間液B配制。精密移取上述濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液200μL，置于10mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻制成濃度為20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。

三、樣品制備

1.樣品來源。樣品1：中國勁酒，勁牌有限公司;樣品2：海王酒，海南椰島酒業(yè)發(fā)展有限公司;樣品3：竹葉青酒，山西杏花村汾酒廠;樣品4：椰島鹿龜酒，海南椰島酒業(yè)發(fā)展有限公司;樣品5：寧夏紅枸杞酒，寧夏紅枸杞產(chǎn)業(yè)集團(tuán)有限公司。

2.陰性樣本制備。取5支50mL離心管，分別加入1mL藥酒樣本，備用。

3.陽性樣本制備。取5支50mL離心管，分別加入1mL藥酒樣本，每支離心管中分別加入濃度為1mg/mL的烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，混勻備用。

四、樣品測試

1.標(biāo)準(zhǔn)中間液的測定。向玻璃比色皿中依次加入1mL表面增強(qiáng)試劑、100μL待測液、100μL匹配劑，混勻后用激光拉曼光譜儀檢測。

2.樣品處理。參照文獻(xiàn)方法并優(yōu)化，在裝有樣品的離心管中依次加入2mL乙腈和由無水硫酸鎂、氯化鈉組成的萃取填料，渦旋混合1min。萃取完畢后，取1mL上清液，置于裝有無水硫酸鎂、PSA和C18組成的凈化填料的15mL離心管中，渦旋混合1min后，14000r/min離心2min，所得上清液待測。

3.樣品測試。向光學(xué)玻璃進(jìn)樣瓶中依次加入1mL表面增強(qiáng)試劑、100μL待測液、100μL匹配劑，混勻后用激光拉曼光譜儀檢測。陽性樣本、陰性樣本提取液同時(shí)進(jìn)行HPLC測試。

4.儀器條件。激光波長設(shè)定為785nm，激光功率設(shè)定為500mW，掃描時(shí)間設(shè)定為5000ms。

五、結(jié)果與討論

1.特征峰的判斷。在激光拉曼光譜儀檢測條件下，對標(biāo)準(zhǔn)中間液A、標(biāo)準(zhǔn)中間液B進(jìn)行測定，得到烏頭堿的表面增強(qiáng)拉曼譜圖（圖1），其特征峰為621cm-1（±3cm-1）。

2.樣品檢出限測試。先對陰性樣本、陽性樣本進(jìn)行前處理，再對樣本提取液進(jìn)行測定，得到烏頭堿的表面增強(qiáng)拉曼譜圖（圖2、圖3、圖4、圖5、圖6）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在陽性樣本提取液中分別添加濃度達(dá)到10mg/kg的烏頭堿藥酒樣品，其拉曼圖譜中均出現(xiàn)了621cm-1（±3cm-1）位置的特征峰信號，而在陰性樣本提取液中，同樣位置并未出現(xiàn)該處信號;同時(shí)，5組陽性樣本、陰性樣本提取液的HPLC測試結(jié)果與拉曼檢測結(jié)果一致，證明通過表面增強(qiáng)拉曼檢測系統(tǒng)對烏頭堿的檢測限可達(dá)到10mg/kg。

本文通過對前處理方式的優(yōu)化，建立了表面增強(qiáng)拉曼檢測系統(tǒng)測定藥酒中烏頭堿的方法。該方法具有簡便、快速、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確、成本低等優(yōu)點(diǎn)，適用于現(xiàn)場以及實(shí)驗(yàn)室快速檢測藥酒中的烏頭堿。

作者簡介：談銘（1988-），碩士研究生，研究方向?yàn)槭称匪幤房焖贆z測。