HBV及其相關蛋白泛素化修飾研究進展

涂文輝， 劉 錦， 朱傳武

1 蘇州大學附屬傳染病醫院， 蘇州市第五人民醫院 肝病科， 江蘇 蘇州 215131；

2 浙江省臺州市立醫院 感染科, 浙江 臺州 318000

HBV是目前已知感染人類最小的DNA病毒，大小為42 nm，基因組全長為3.2 kb，包含S、C、P、X 4個開放讀碼框架。病毒以共價閉合環狀DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)為模板，采用宿主DNA依賴的RNA聚合酶，轉錄5種不同的mRNA，分別是3.5 kb的pgRNA、preC mRNA，2.4 kb、2.1 kb的preS/S mRNA和0.7 kb的HBx mRNA。pgRNA作為遺傳物質包裹入核心顆粒，逆轉錄合成部分雙鏈DNA基因組，并翻譯病毒聚合酶蛋白(Pol)；preC mRNA翻譯出前C/C蛋白，進一步修飾后形成HBeAg、HBcAg；preS/S mRNA使用不同的起始密碼子，翻譯出3種包膜蛋白，分別是大蛋白(preS1+preS2+S)、中蛋白(preS2+S)和小蛋白(S)；HBx mRNA翻譯乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)[1]。

蛋白質泛素化是蛋白翻譯后的一種修飾，在細胞內廣泛存在。細胞內80%～90%的蛋白質可以被泛素化系統識別和修飾[2]。蛋白質的泛素化由泛素蛋白酶體系統精密調控。泛素蛋白酶體系統由泛素、泛素活化酶(ubiquitin-activating enzyme, E1)、泛素結合酶(ubiquitin-conjugating enzyme, E2)、泛素連接酶(ubiquitin ligase, E3)，以及26S蛋白酶體組成。泛素化過程大致為：E1首先以ATP依賴的方式與泛素結合，接下來泛素被轉移到E2上；E3與蛋白底物相互作用，并將E2上的泛素轉移至蛋白底物上，最終泛素化的底物進入26S蛋白酶體中進行降解[3]。E3在抗病毒天然免疫信號的各個環節發揮重要的調節作用，過程詳見圖1[4]。

1 S基因編碼蛋白

1.1 HBsAg相互作用蛋白 HBsAg是HBV包膜蛋白的主要成分，包括L(大蛋白)、M(中蛋白)、S(小蛋白)3種蛋白，HBV依賴L蛋白中小肽段與靶細胞的鈉離子-牛磺酸共轉運多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide，NTCP)受體結合；L蛋白還具有病毒復制中的調節作用；M蛋白主要是裝配病毒顆粒。外膜蛋白攜帶B淋巴細胞和T淋巴細胞表位，給宿主提供保護性免疫的免疫源。目前，關于HBsAg與細胞蛋白之間的相互作用還知之甚少，Toh等[5]利用酵母分裂泛素系統，分離了很多細胞膜蛋白，其中包括內質網的駐留蛋白(硫氧化還原蛋白相關跨膜蛋白2)、參與網格蛋白介導的內吞和HIV介導的CD4下調的銜接蛋白、柯薩奇B病毒的共同受體等，這些蛋白均與HBsAg存在相互作用。

Hartmann-Stühler等[6]利用L蛋白-特異性前S1結構域作為誘餌，啟動了一個雙雜交篩選。通過這種方法，證實了γ2銜接蛋白是網格蛋白銜接蛋白的成員之一，負責蛋白質的分類和運輸，是L蛋白特異性的結合對象。親和層析和免疫共沉淀證實了L蛋白和γ2銜接蛋白之間存在相互作用的證據，并且確認了結合位點位于L蛋白特異的前S1結構域和γ2銜接蛋白特異的耳部結構域。有趣的是，兩者在轉染細胞中的共同表達，導致L蛋白和γ2銜接蛋白在高爾基體上聚集，因此研究強烈支持兩種蛋白存在生理上的關聯。

1.2 HBsAg降解途徑 為了探索HBV包膜蛋白的降解途徑，有研究[7]觀察了內質網質量控制系統對M蛋白的監測和分泌功能。結果發現野生型M蛋白以及分泌功能不全的M蛋白突變體可以從內質網有效地逆向轉運，通過與泛素化無關的胞質蛋白酶體途徑降解。并且，該泛素非依賴途徑與抗原遞呈無關，因為無論是野生型還是突變型M蛋白，都難以通過MHC-Ⅰ遞呈。通過添加兩個賴氨酸殘基，可增加泛素化并導致抗原遞呈增加。Liu等[8]以HBV M蛋白為模型，發現了一種新的、不依賴泛素化的蛋白酶體依賴性內質網相關蛋白降解途徑。在HBV感染的過程中，病毒可能會利用該途徑限制抗原遞呈。

利用內質網葡萄糖苷酶的競爭性抑制劑，研究者發現在產生HBV包膜糖蛋白的組織培養中，L蛋白和M蛋白的糖基化和非糖基化形式的數量都大大減少；相反，S蛋白沒有受到影響。L蛋白和M蛋白分泌的減少可能是由蛋白酶體降解途徑介導的，而在具有功能性葡萄糖苷酶的細胞中沒有檢測到L蛋白和M蛋白的蛋白酶體降解[9]。

2 C基因編碼蛋白

2.1 HBcAg相關泛素連接酶 HBcAg是病毒核衣殼的主要成分，是參與包裝RNA、反轉錄、病毒裝配和釋放的多功能蛋白。HBV在感染細胞的出芽分泌過程中，可能使用細胞γ2-銜接蛋白和泛素連接酶Nedd4，通過與泛素結合以協調其組裝和釋放[10]。此前已有研究[6]發現γ2-銜接蛋白和HBV L蛋白之間存在相互作用。進一步研究還發現，同樣的γ2-銜接蛋白和病毒核衣殼也存在相互作用，可以通過破壞HBV/γ2-銜接蛋白的相互作用，抑制病毒的產生。突變分析揭示：γ2-銜接蛋白的泛素結合活性存在特定的泛素作用基序，可以與核衣殼發生相互作用。HBcAg含有兩個賴氨酸殘基(K7和K96)，K96位是一個潛在的泛素化靶點，對γ2-銜接蛋白的識別和病毒的產生是必不可少的。核衣殼通過其晚期結構域樣PPAY序列，與核內Nedd4相互作用，提示了細胞泛素系統參與HBV組裝。過表達無催化活性的Nedd4突變體可以降低HBV的釋放，表明蛋白質泛素化在功能上參與了HBV的產生[11]。另一項研究[12]表明，在轉染肝癌細胞系中，HBcAg泛素化主要發生在賴氨酸殘基K7上，通過K29位泛素化進行翻譯后修飾。

Np95/ICBP90樣環指蛋白(Np95/ICBP90-like RING finger protein，NIRF)具有自身泛素化活性，是泛素連接酶的標志。泛素連接酶NIRF與HBcAg結合，導致蛋白酶體介導的HBcAg降解。NIRF下調HBcAg蛋白水平，導致HepG2.2.15細胞上清液中HBV顆粒減少。敲除NIRF，則顯著增加內源性HBcAg蛋白水平，導致HBV釋放[13]。研究結果表明，NIRF與HBcAg的相互作用，促進HBcAg在體內的降解。NIRF介導的泛素-蛋白酶體途徑通過控制HBcAg水平，影響HBV顆粒的釋放，提示NIRF可能參與HBV的成熟。還有研究探討了NIRF對HBV復制的影響及其機制，證明NIRF抑制了轉染pAAV-HBV1.3的HepG2細胞中HBV DNA的復制和HBsAg、HBeAg的分泌。在表達HBV的小鼠模型中，NIRF也抑制HBV的復制和分泌。NIRF還降低了HBV cccDNA結合的H3組蛋白的乙酰化[14]，cccDNA的活性在體內和體外均受到組蛋白H3乙酰化狀態改變的調控，進而影響其轉錄和HBV的復制。表明NIRF不僅通過與HBcAg的直接作用參與HBV的復制，而且通過降低與HBV cccDNA結合的H3組蛋白的乙酰化而調控HBV的復制。

2.2 HBcAg的泛素化與免疫增強 泛素是一種高度保守的小分子調控蛋白，其介導的抗原處理快速且高效，并刺激細胞介導的免疫反應。因此，泛素介導的抗原處理已廣泛應用于慢性感染和癌癥研究，以提高免疫應答。重組pUb-HBcAg DNA疫苗誘導免疫BALB/c小鼠產生特異性抗-HBc反應和特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應，表明泛素可以作為一種分子佐劑來提高DNA疫苗的效力[15-16]。

慢性HBV感染的特點是輔助性T淋巴細胞(Th)1型細胞免疫和特異性T淋巴細胞應答的功能受損。轉染了泛素-HBcAg的慢病毒能夠有效誘導樹突狀細胞的成熟，成熟的樹突狀細胞有效誘導T淋巴細胞轉化為Th1，并產生HBcAg特異性CTL，增加抗原特異性CD8+/IFNγ+T淋巴細胞的數量[17]。胞質轉導肽(cytoplasmic transduction peptide，CTP)源自人類免疫缺陷病毒1轉錄蛋白反式激活體的蛋白轉導域，能夠有效地將生物分子傳遞到細胞質中。利用CTP的細胞穿透特性，泛素-HBcAg-CTP融合蛋白能夠直接滲透到樹突狀細胞的細胞質中。融合蛋白不僅增加了樹突狀細胞表面分子的表達和T淋巴細胞的細胞因子分泌，而且誘導T淋巴細胞分化為特異性CTL，增強了抗病毒能力[18]。融合蛋白引起特異性CTL活性增強，降低了HBsAg和HBV DNA血清水平，降低了HBsAg和HBcAg在HBV轉基因小鼠肝臟組織中的表達，提示具有治療方面的價值[19]。泛素-HBcAg-CTP融合蛋白還能上調T淋巴細胞中Jak2、Tyk2、STAT1和STAT4的表達[20]。

2.3 HBeAg與泛素連接酶的相互作用 HBeAg是調節免疫的功能蛋白，也是病毒高水平復制的標志。HBeAg可干擾NF-κB活性，進而導致高病毒載量。Wang等[21]研究了HBeAg抑制IL-1β刺激的NF-κB活性，結果表明，HBeAg可以與NF-κB必須調節蛋白(NF-κB essential modulator，NEMO)作用。NEMO是一種與IκB激酶相關的調節亞基，調節NF-κB的激活。HBeAg抑制IL-1β誘導的腫瘤壞死因子受體相關因子6(tumor necrosis factor associated factor 6，TRAF6)依賴性K63相關泛素化的NEMO，從而下調NF-κB活性，促進病毒復制及持續性感染。研究者通過原代人肝細胞，HBV感染的HepG2-NTCP細胞和臨床肝臟樣本研究，進一步證明了HBeAg對NF-κB信號通路的抑制作用。

3 P基因編碼蛋白

3.1 Pol蛋白相關泛素連接酶 Pol蛋白是一種決定病毒復制活性的聚合酶蛋白：末端蛋白是反轉錄負鏈DNA的引物；聚合酶激活pgRNA反轉錄DNA鏈；RNA酶H清除RNA-DNA雜交鏈中的RNA，合成正鏈DNA。在接受伊馬替尼(imatinib)(一種Abl激酶抑制劑)或硼替佐米(bortezomib)(一種蛋白酶體抑制劑)治療的患者中，經常有HBV再激活的報道，但這種重新激活的潛在機制尚不清楚。Hou等[22]報道Pol蛋白經Cdt2招募到Cullin-RING連接酶4(Cullin-RING ligase 4，CRL4)，從而進行泛素化和蛋白酶體降解，這一過程是由c-Abl非受體酪氨酸激酶激發的。伊馬替尼和硼替佐米可穩定病毒Pol蛋白，增加HBV感染細胞中的病毒載量，因此，這可以從機制上解釋以上兩種藥物激活患者的HBV復制。

細胞凋亡抑制蛋白2(cellular inhibitor of apoptosis protein 2，cIAP2)屬于凋亡抑制劑(IAP)家族，是一種有效的細胞死亡抑制劑，cIAP2具有羧基末端的RING指結構域，該結構域具有介導蛋白質泛素化的泛素連接酶活性。使用cDNA微陣列篩選腫瘤壞死因子誘導的細胞基因，具有強烈上調cIAP2抗HBV的活性[23]。進一步研究[24]證明，cIAP2可以顯著降低HBV DNA復制中間體的水平，但不能降低總病毒RNA或核心蛋白的水平。Pol蛋白是cIAP2的靶標，過表達cIAP2可以降低Pol蛋白水平，而過表達cIAP2的E3連接酶缺陷型突變體(稱為cIAP2*)則不能。進一步研究表明，cIAP2可以與Pol蛋白結合，促進其多聚泛素化，通過蛋白酶體途徑進行降解。

三結構域(tripartite motif，TRIM)家族是一個新的E3連接酶家族，研究表明，某些TRIM蛋白具有抗HBV復制的活性，例如TRIM14，一種Ⅰ型干擾素(IFN)刺激基因，通過靶向HBx來控制HBV的復制；TRIM22，可抑制HBV核心啟動子的活性而影響HBV復制；以及TRIM25，可通過IL-27抑制HBV復制。Mu等[25]發現，SPRY域負責TRIM21與HBV Pol蛋白之間的相互作用，Pol蛋白的TP域與TRIM21相互作用。研究者使用在線工具預測了潛在的Pol蛋白泛素化位點，通過對Pol蛋白間隔區中的K260和K283點突變，證實是Pol蛋白泛素化的賴氨酸位點。TRIM21介導了Pol蛋白K48位多聚泛素化，導致其通過泛素蛋白酶體途徑降解。

3.2 Pol蛋白通過泛素化途徑影響其他蛋白的穩定性 視黃酸誘導基因Ⅰ(retinoic acid inducible gene Ⅰ，RIG Ⅰ)介導產生的IFN能夠被HBV抑制。HBV明顯干擾IFNβ的產生和STING介導的抗病毒免疫，STING已被證實為外源DNA識別和抗病毒天然免疫的核心因素。篩選分析表明，HBV Pol蛋白能夠抑制STING激活干擾素調節因子3(interferon regulatory factor 3，IRF3)和誘導IFNβ。在不改變STING表達水平的情況下，Pol蛋白被證明與STING存在物理聯系，其逆轉錄酶區域可以顯著降低STING的K63位多聚泛素化，在抑制IFNβ的產生方面發揮作用，這可能是HBV對抗天然免疫的一種新機制[26]。

4 X基因編碼蛋白

4.1 HBx與蛋白酶體相互作用 HBx是一種多功能的調節因子，已知能激活轉錄、影響DNA修復、調節細胞的生長和死亡。HBx蛋白在病毒復制、肝細胞癌變和激活某些信號轉導途徑方面十分重要。研究表明HBx是蛋白酶體的抑制劑。通過免疫共沉淀和蔗糖梯度離心共定位研究，發現HBx與26S蛋白酶體復合物存在關聯[27]。HBx在HepG2細胞中的表達導致蛋白酶體的糜蛋白酶和類胰蛋白酶活性降低，泛素化溶菌酶水解也減少。通過雜交和免疫沉淀法，檢測到HBx與蛋白酶體的PSMC1(S4 ATP酶)和PSMA7(α1/C2)亞基存在相互作用，并在蔗糖梯度離心時與蛋白酶體共沉積。另有研究[28]證實染色質重構因子BAF155是HBx的綁定伙伴之一。BAF155通過與20S蛋白酶體亞基PSMA7競爭結合HBx，使HBx免受泛素非依賴性蛋白酶體降解。

4.2 HBx降解相關泛素連接酶 Zhang等[29]開發了一種針對HBx的細胞穿透性全分子抗體(9D11-Tat)。內化的9D11-Tat抗體可通過Fc結合受體TRIM21介導蛋白質降解，顯著降低細胞內HBx，促進了宿主細胞的抗病毒狀態。泛素連接酶Siah-1可以靶向HBx進行多泛素化和蛋白酶體降解，并減弱HBx的轉錄活性[30]。在HepG2細胞中，敲除p53基因可以下調Siah-1水平，隨后可見HBx水平上調[31]。而在Hep3B細胞中，異常表達的p53基因上調了Siah-1水平，同時可見HBx水平下調。HBx通過一個涉及p53和Siah-1的負反饋回路調節自身的蛋白水平，以控制HBV的復制。MARCH5是一種線粒體泛素連接酶，其高表達與肝癌患者生存率的提高有關[32]。MARCH5與在線粒體中聚集的HBx蛋白相互作用，并將其靶向降解。在MARCH5高表達的情況下，HBx誘導的活性氧自由基、線粒體自噬和環氧合酶-2基因表達受到抑制。

4.3 HBx通過E3泛素連接酶影響其他蛋白質 在HBx的凋亡與泛素化研究[33]中，發現HBx能夠增強肝細胞對腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體的敏感性，其敏感性的增加與HBx誘導miR-125a上調有關，而miR-125a又抑制了其靶基因A20泛素連接酶的表達。在肝細胞中拮抗miR-125a或外源性表達A20，可消除HBx的促凋亡作用。原癌基因垂體腫瘤轉化基因1(pituitary tumor transforming gene1，PTTG1)在肝細胞癌中呈高表達。體外實驗[34]表明，HBx誘導PTTG1蛋白顯著積累。HBx與PTTG1和/或Skp1-Cul1-F-box泛素連接酶復合物(Skp1-Cul1-F-box protein，SCF)的蛋白-蛋白相互作用，導致PTTG1與SCF之間的作用被部分破壞，阻礙其經蛋白酶體的降解。HBx介導Myc的穩定表達在病毒致癌中起著重要作用。Myc癌蛋白的穩定性受SCF泛素連接酶的調控，特別是其中的SCFSkp2或SCFFbw7泛素連接酶。通過免疫共沉淀和免疫熒光實驗，揭示了HBx與Myc蛋白存在相互作用，進一步分析表明，HBx通過阻斷Skp2穩定Myc癌蛋白[35]。

4.4 HBx的多重功能 HBx通過與宿主細胞胞質和胞核中的多種蛋白質相互作用以執行多方面的功能。HBx與損傷特異性DNA損傷結合蛋白1(DNA damage-binding protein 1，DDB1)的結合對于HBx激活HBV轉錄是至關重要的。DDB1與CUL4形成泛素連接酶，并與DDB1 cullin相關因子的銜接子亞基結合，靶向泛素化底物，在DNA修復、復制和轉錄中發揮重要作用。HBx被稱為HBV復制的中樞調節因子，通過H-box基序與CUL4-DDB1泛素連接酶相互作用[36]。HBx在不同的CUL4-DDB1復合物背景中，以正向和負向的方式調節DDB1的功能，在HBV復制周期中起著不同的作用。

除TANK結合激酶1(TANK-binding kinase 1，TBK1)以外，HBx作為一種去泛素化酶能夠從多種蛋白質中切割賴氨酸63連接的多泛素鏈，結合和解偶聯RIG Ⅰ及TRAF3，導致它們從下游的銜接蛋白CARDIF或TBK1激酶上分離。除RIG Ⅰ和TRAF3外，HBx還與CARDIF、TRIF、NEMO、TBK1、B淋巴細胞kappa輕鏈多肽基因增強子抑制劑、epsilon激酶(IKKi)和IRF3相互作用。HBx可以靶向多個信號通路點，負調控Ⅰ型IFN的產生。MAVS是病毒激活信號通路的重要組成部分，激活NF-κB和IRF3誘導Ⅰ型IFN的產生[37]。HBx與MAVS相互作用，通過MAVS蛋白中的136位賴氨酸泛素化促進MAVS的降解，從而阻止誘導IFNβ[38]。HBx介導的發病機理中與泛素蛋白酶體系統有關的機制詳見圖2[39]。

5 與HBV cccDNA相關的泛素化研究

5.1 UBE2L3誘導降解載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽3A(APOBEC3A)維持cccDNA的穩定 HBV cccDNA是編碼所有HBV RNA的唯一模板，是導致病毒持續感染和復發的主要原因，清除HBV cccDNA是根治HBV持續感染的關鍵[40]。SNP rs59391722位于UBE2L3基因的啟動子區域，該基因編碼E2泛素結合酶，也稱為UbcH7。全基因組關聯研究證實，UBE2L3基因與成人慢性HBV感染的易感性增加有關。在兒童HBV感染者中，血清UBE2L3蛋白水平與HBV載量和HBeAg水平呈正相關。在HBV感染的HepG2-NTCP和人原代肝細胞中，UBE2L3基因敲低顯著降低總HBV RNA、3.5 kb RNA以及cccDNA的水平。研究其機制發現，UBE2L3通過誘導蛋白酶體依賴性途徑降解APOBEC3A以維持HBV cccDNA的穩定，而APOBEC3A主要負責HBV cccDNA的降解。此外，IFNα治療后明顯降低UBE2L3的表達，而沉默UBE2L3基因則增強了IFNα對HBV RNA、cccDNA和DNA的抗病毒活性[41]。

5.2 ITCH-NUMB通過負調控Notch信號通路抑制cccDNA Notch信號通路活化后，通過兩次蛋白水解切割(α/γ分泌酶)釋放跨膜受體的細胞內結構域(Notch intracellular domain，NICD)，隨后將NICD轉運至細胞核以調節下游基因表達。ITCH是一種屬于HECT(homologous to E6-AP carboxyl terminus)家族的泛素連接酶，通過特異性激活Notch1信號傳導的泛素，并促進NICD的泛素依賴性蛋白酶體降解而對Notch1信號進行負調節。阻斷ITCH和銜接蛋白NUMB后，HBV cccDNA增加。cAMP反應元件結合蛋白(cAMP response element-binding protein，CREB)介導HBV cccDNA的轉錄，Notch激活CREB/CBP(CREB-binding protein)對HBV cccDNA的產生起關鍵作用，進而觸發了HBV轉錄的激活，上調泛素連接酶ITCH-NUMB，以泛素依賴性蛋白酶體介導的方式阻斷該途徑，可明顯抑制HBV cccDNA[42]。

5.3 HBx與HBV cccDNA轉錄 肝細胞核內HBV cccDNA的持續存在，是HBV感染慢性化、抗病毒治療無法獲得根治，以及停藥后肝炎復發的主要原因。因此，HBV cccDNA持續沉默是慢性乙型肝炎“功能性治愈”的目標。病毒蛋白HBx對HBV cccDNA的轉錄過程發揮了關鍵作用。Cheng等[43]以HBx為靶標，通過HiBiT-tagged HBx蛋白檢測系統，尋找到一個靶向作用于HBx的小分子化合物——雙香豆素。在HBV感染細胞模型和人源化肝臟小鼠模型中，雙香豆素均可顯著促進HBx蛋白降解，進而顯著抑制cccDNA的轉錄。進一步研究發現，雙香豆素可作為細胞煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸磷酸鹽(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate，NADPH)醌氧化還原酶抑制劑，解除NADPH醌氧化還原酶對HBx蛋白的保護作用，從而促進HBx蛋白經泛素非依賴的20S蛋白酶體途徑降解。

HBx與CRL4的相互作用對激活cccDNA基因組的表達起重要的作用。利用底物捕獲蛋白質組學方法，證實染色體結構維持復合物(structural maintenance of chromosome，SMC)蛋白SMC5和SMC6是CRL4HBx的作用底物。在人肝細胞和人源化小鼠體內，HBx表達和HBV感染對SMC5/6復合物有降解作用，后者通過抑制HBV的基因表達以限制HBV復制[44]。HBx靶向SMC5/6是通過CRL4HBx連接酶泛素化及其后的蛋白酶體降解完成的。SMC5/6基因敲除可以恢復HBx缺陷型人肝細胞中HBV的復制[45]。泛素蛋白酶體系統在HBV生命周期中的更多調節作用詳見圖3[39]。

6 總結與展望

總之，HBV及其相關蛋白的泛素化研究越來越受到重視。HBsAg、HBeAg或HBV顆粒已被證明能夠抑制Toll樣受體誘導的抗病毒活性，降低IFNβ及IFN刺激基因的表達。病毒蛋白的降解伴隨著體液和細胞免疫功能的恢復，對于控制和清除HBV感染具有重要意義。HBsAg的泛素化研究大多局限于蛋白相互作用及蛋白酶體降解，深層次的研究還相當缺乏。C基因相關蛋白的泛素化研究大多集中在構建泛素相關融合蛋白，以此增強體液和細胞免疫應答，達到抗病毒治療的目的。P基因相關蛋白泛素化研究鑒定了多個與Pol蛋白降解有關的泛素連接酶。HBx是目前泛素化研究最多的一種HBV編碼蛋白，它是蛋白酶體抑制劑，也是一種去泛素化酶，因此具有多重身份和功能。近年來，與HBV cccDNA相關的泛素化研究也逐漸增加，表明為了治愈慢性HBV感染，研究的領域在不斷地拓展。相信為了實現世界衛生組織2030年消除HBV感染的目標，HBV及其相關蛋白質泛素化研究將成為今后關注和研究的一個熱點。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。

作者貢獻聲明：涂文輝、劉錦負責文獻查找，資料分析，撰寫論文；朱傳武擬定寫作思路，指導撰寫文章并最后定稿。