酶聯免疫吸附法影響乙型肝炎五項檢測結果的因素

于 瀟

（沈陽金域醫學檢驗所有限公司實驗室診斷部，遼寧 沈陽 110164）

由乙型肝炎病毒感染引起的感染性肝炎稱為乙型肝炎。目前，常用五項乙型肝炎檢查來判斷患者病情的嚴重程度和傳染性[1]。五項血清臨床標志物分別為HBsAg血清標志物、HBeAb血清標志物、HBeAg血清標志物、HBcAb血清標志物和HBsAb血清標志物，檢測體內乙型肝炎病毒感染的標志物即“乙型肝炎五項”。在臨床實驗室大多采用酶聯免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測乙型肝炎五項，該方法的特異性及臨床靈敏度高，但操作步驟較復雜，存在許多臨床問題[2]。采用ELISA分析不同血清狀態和水浴時間對臨床乙型肝炎五項檢測結果的影響，有助于提高臨床檢驗質量。本研究旨在探討酶聯免疫吸附法與臨床間接免疫熒光法檢測抗核抗體的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年1月至2019年1月在沈陽金域醫學檢驗所有限公司實驗室診斷部的200例乙型肝炎五項臨床檢測樣本，并應用酶聯免疫吸附法檢測臨床血清中的HBsAg濃度、血清中抗-HBs濃度、血清中HBeAg濃度、血清中抗-HBe濃度和血清中抗-HBc濃度五項標志物。200例乙型肝炎五項檢測樣本男性109例，女性91例；年齡32～62歲，平均年齡（39.00±1.90）歲。

1.2 方法 晨起取患者空腹狀態下的肘靜脈血12 mL，并其分為5等份，每等份2.4 mL，依次注入5根玻璃管。1個樣本未經抗凝劑處理，1個樣本經臨床抗凝劑處理，另外3個樣本分別在37.5 ℃水浴加熱20 min。所有標本離心4000 r/min 30 min和40 min，并用ELISA法檢測血清HBsAg濃度、血清HBsAb濃度、血清HBeAg濃度、血清HBeAb濃度和血清HBcAb標志物。選用北京普贊生物技術有限公司生產的5種臨床乙型肝炎檢測診斷試劑盒，型號為PZ-KJ-HDA324DD，并嚴格遵守臨床操作規范。

1.3 觀察指標 觀察并記錄不同水浴狀態下5種乙型肝炎病毒的陽性檢出率和不同水浴時間的乙型肝炎陽性檢出率。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計學軟件對數據進行分析。計量資料采用（±s）表示，組間比較行t檢驗；計數資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗；P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

抗凝劑處理過的標本陽性率與未經抗凝劑處理過的標本陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；標本水浴加熱20 min的陽性率檢測結果與標本水浴加熱30 min的陽性率及標本水浴加熱40 min的陽性率檢測結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同血清狀態乙型肝炎五項檢測結果比較

3 討論

乙型肝炎是一種常見的臨床傳染病，如果不及時治療將發展為肝硬化、肝細胞癌，嚴重影響臨床患者的生活和健康[3]。ELISA快速、可靠，在我國臨床上得到了廣泛的應用[4]。因此，常用于5種臨床乙型肝炎項目的檢測中，但在檢測過程中有許多影響因素會導致檢測結果出現誤差[5]。使用抗凝劑會導致假陽性率增加，這是因為抗凝劑在ELISA中起到促進或抑制過氧化物酶的作用而形成結合物。ELISA檢測不同水浴時間血液中乙型肝炎的結果不同[6]。水浴加熱時間越長，陽性率越低[6]。這是因為在不同時間水浴加熱的離心血清樣本中纖維蛋白和過氧化物酶細胞成分不均等，黏附在96孔板反應孔上，最終導致假陽性[7]。除了上述2種情況會影響ELISA的檢測結果外，筆者在日常工作中還總結了以下原因[8]：①標本出現嚴重溶血，血紅蛋白中的亞鐵血紅素具有過氧化物酶樣活性，并能黏附在ELISA的反應孔上。如果不洗掉則可催化底物產生假陽性結果[9]。②標本被細菌污染，有些細菌有內源性酶或分泌能催化底物著色的酶并導致結果錯誤。③抗體或抗原的免疫活性隨儲存時間的延長而降低，導致假陰性結果[10]。④當樣本中的HBsAg或（和）HBeAg濃度過高時會發生鉤子效應，使強陽性變弱陽性或陰性。為了使ELISA結果更加準確可采取以下措施：在檢測過程中使用新鮮的血清樣本，適當延長離心時間、增加離心速度；在血液樣本自然凝固后將血清分離以確保血液樣本中的活性物質完全失活，在樣本采集和臨床處理過程中應盡量避免溶血的發生；在采集和臨床操作過程中應避免細菌的污染；應立即分離血清并低溫保存，高抗原濃度的樣本可適當稀釋后再進行后續操作[11-13]。不同的血清狀態和水浴加熱時間可以影響乙型肝炎病毒的ELISA檢測，且在檢測過程中還存在其他臨床影響因素。乙型肝炎五項指標被認為是一項重要指標，要求檢測人員要認真負責，并按臨床規范操作，以減少誤差，同時做好室內質量控制，保證結果準確、可信[14-16]。檢測乙型肝炎五項結果的影響因素可提高臨床檢查質量。本研究發現，抗凝劑處理過的標本陽性率與未經抗凝劑處理過的標本陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；標本水浴加熱20 min的陽性率檢測結果與標本水浴加熱30 min的陽性率及標本水浴加熱40 min的陽性率檢測結果比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。

綜上所述，不同的血清狀態和水浴加熱時間可影響ELISA檢測五項乙型肝炎的結果，但在ELISA檢測過程中還存在其他影響因素。臨床試驗單位應分析ELISA檢測乙型肝炎五項指標的臨床影響因素，以提高臨床檢測水平。