落新婦根藥材中巖白菜素定性定量方法研究

周麗麗 徐 皓

（長春市食品藥品檢驗中心，吉林 長春 130000）

近年來，中醫學在臨床治療中得到越來越多的應用，傳統中藥、中成藥相關質控工作越來越受重視。落新婦根為虎耳草科植物落新婦的根莖，味辛、性溫。中醫理論中本品有散瘀鎮痛、清熱解毒之效，常用于治療跌打損傷、蛇毒咬傷、風熱感冒等[1]。現代藥理學分析指出，落新婦根藥材中主要有效成分為巖白菜素，對此落新婦根藥材質控主要圍繞巖白菜素開展[2]。目前，常規中藥材質控方法包括薄層色譜鑒別、高效液相色譜法等，通過定性定量分析對藥材質量進行有效把控[3]。但臨床關于落新婦根藥材內巖白菜素質控研究尚少。本文為進一步探索相關質控方法，使用薄層色譜法及高效液相色譜法對落新婦根完成質控研究，以期為相關質控工作提供理論指導，具體如下。

1 材料及設備

美國Agilent 1260高效液相色譜儀，梅特勒電子分析天平，精度為0.1 mg，型號MS105DU；上海超聲波儀器廠生產的CQ-250超聲清洗器；蘇州南光電子科技有效公司提供的XP-213型顯微鏡；對照品巖白菜素為中國食品藥品檢測研究院提供；硅膠為青島海洋化工廠提供；水為實驗室自備蒸餾水。以甲醇作為色譜純，其他各種試劑作為分析純。落新婦根藥材為吉林省地區范圍內采集。

2 方法及結果

2.1 落新婦根的薄層色譜鑒別 取10批落新婦根各1 g，研磨至粉末狀各置于有塞試管內，每個試管中加入甲醇10 mL，浸泡≥12 h后完成過濾，取適量濾液作為樣品溶液，再取巖白菜素對照品，加入適量甲醇配制為0.5 mg/mL溶液，即得對照品溶液。后依照薄層色譜法將對照品溶液及樣品溶液各取5 μL，分開點在同一硅膠G薄板上，以三氯甲烷（CHCl3）-乙酸乙酯（C4H8O2）-甲醇（CH3OH）（5∶4∶2）作為展開劑，展開至11 cm后取出，靜置晾干后噴以濃度為1%混合溶液[濃度為1%鐵氰化鉀+濃度為1%三氧化鐵（比例1∶1）]進行顯色，于正常陽光下檢視，觀察本次供試品色譜與對照品色譜相同位置均呈現出同樣的藍色斑點。

2.2 供試品溶液制備方法 精密稱取樣品粉末（過三號篩）0.1 g，置于50 mL量瓶內，加入30%的甲醇適量，超聲0.5 h后常規室溫下放冷，再加入30%甲醇稀釋至刻度，搖勻后，棄去初濾液，收集續濾液，使用濾孔為0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件 使用日本島津公司所生產的色譜柱，規格為4.6 mm×150 mm，5 μm，二極管陣列檢測器，檢測波長設置為275 nm以甲醇-水，比例20∶80為流動相，流速控制為1.0 mL/min，控制柱溫30 ℃，進樣量控制在20 μL。

2.4 線性關系研究 精密量取巖白菜素對照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、8 mL、10 mL分別置入5個10 mL量瓶內，加30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5個量瓶中溶液各20 μL，逐次注入高效液相色譜儀，并逐次完成測定，設峰面積為縱坐標，設對照品濃度作為橫坐標完成曲線回歸，計算后所獲得回歸方程為：Y=28159x+50585，r=0.9999，表明在0.025～0.250 mg/mL濃度范圍內巖白菜素對照平與峰面積有良好的線性關系。

2.5 精密度實驗 精密吸取同一供試品溶液，進樣次數控制為6次，每次進樣量保持10 μL，完成測定后求得其峰面積積分值的相對標準偏差為0.43%，表明進樣精密度較高。

2.6 穩定性實驗 取同一供試品溶液，選取0 h、3 h、6 h、9 h、12 h時間取樣10 μL，注入液相色譜分析儀完成含量測定，計算得相對標準偏差為2.1%，表明供試品溶液與在12 h內相對穩定。

2.7 重復性實驗 取同一批樣品，依照此前2.2中記錄供試品制備方法制備6份供試品溶液，測得溶液巖白菜素含量為7.991 mg/g，相對標準偏差為1.8%，表明重復良好。

2.8 加樣完成回收率實驗 精密稱取已確定巖白菜素含量的藥材樣品10份，各加入巖白菜素對照品1 mg，依照前文2.2中供試品相關制作方法制備所需回收率供試品溶液，其測定結果見表1。2.910批樣品含量測定 取10批落新婦根樣本以上述2.2所述供試品溶液制作方法制備，測定其巖白菜素含量，具體結果見表2。

表1 本次加樣回收試驗結果

表2 10批樣品含量測定結果

3 討 論

醫藥質控作為臨床醫藥質量監督的重中之中，質控環節明確受檢藥物的有效成分含量是確保該批藥材具有臨床使用價值，保障患者入院可獲得有效治療的前提。近年來，我國中醫藥被廣泛用于臨床，相關中藥質控工作越來越受重視[4]。落新婦根作為臨床常用中藥材，在多種疾病治療中可起到良好的治療效果。本藥的主要成為巖白菜素，關于本藥材的質控活動即需圍繞巖白菜素檢測開展定性定量研究[5]。

目前，各類藥品質控活動中定性定量研究方法較多。如紙層析技術具有快速、簡便等優點，在多種中藥成分的分離中具良好應用效果；柱層析為去除提取物中糖、礦物質等成分的有效方法；薄層分析則是質控活動中常用于分離藥材之中有效成分的傳統且普遍的方法之一，也是目前定性分析中主要方法；高效液相色譜法在多種中藥有效成分定量分析中有著分析時間短、分辨率高且無熱分解的優點；高速逆流色譜法作為一種無載體液液分配色譜，在分離柱內無須加入固態載體，可有效排除載體對分離過程的影響；光譜分析法具有鑒別速度快等優點[6-8]。

落新婦根內有效成分巖白菜素的定性定量研究較少，在如何確定定性定量方法上依然需要深入摸索[9-12]。對此本文以薄層色譜法與高效液相色譜法作為定性定量方法，對巖白菜素進行定性定量分析，結果提示薄層色譜法在落新婦根定性分析中，供試品與對照品均呈現藍色斑點。本文所采取的展開劑及其他薄層色譜條件較為合理，而薄層色譜法在落新婦根藥材巖白菜素的定性分析中具有精準定性效果。

高效液相色譜法是目前應用最廣的定量分析方法。相關文獻在關于巖白菜素的高效液相色譜法的研究中指出，對比30%乙醇、95%乙醇、60%甲醇，濃度在30%的甲醇作為提取溶劑可獲得最佳檢測效果，在此條件下檢測的巖白菜素含量較其他提取溶劑顯著更高。本次研究遂采用30%甲醇作為提取溶劑進行定量分析，而在檢測波長的選取環節，巖白菜素藥典內推薦波長為275 nm，經研究驗證在此波長處巖白菜素達到最大吸收，遂選取275 nm為本次檢測波長。后續實驗環節依次進行精密度實驗、穩定性實驗、重復性實驗、回收率實驗，實驗結果提示為本次所用定性定量分析法具有較高準確性、可重復性、回收率高的優點。

綜上所述，在落新婦根巖白菜素的定性定量分析中，采用薄層色法及高效液相色譜法具有多重優點，具體操作方案可以本次操作方法為指導，用于落新婦根藥品質量監控。