熒光定量PCR檢測HBV核酸診斷的臨床價值研究

邵長年

【摘要】目的：探析熒光定量PCR檢測HBV核酸診斷的臨床價值。方法：選取2020年1月至12月期間本站就診的200例體檢者，均需要采集HBV血清樣本，并進行熒光定量PCR核酸檢測及免疫標志物檢測。觀察熒光定量PCR檢測及免疫標志物檢測相關結果結果：200例HBV血清樣本中，102例HBV-DNA樣本呈陰性，98例為陽性，陽性最低定量為1.87*103/mL，陽性最高定量為9.47*103/mL，HBV免疫標志物檢出陽性率104例（52.00%）；其中大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）組樣本48例（46.15%），小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）樣本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量檢測，大三陽陽性檢出率（46.08%）；小三陽性檢出率（53.92%）；兩組樣本陽性檢出率無統計學差異（P>0.05）。結論：熒光定量PCR檢測HBV核酸診斷臨床效果顯著，可診斷結果較為精準，可有效反映出HBV在體內的復制結果，相較于免疫標志物檢測具有更好的靈敏度及特異性，值得臨床推廣。

【關鍵詞】熒光定量PCR；HBV；核酸診斷；臨床價值

[中圖分類號]R450 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）07-0151-02

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus， HBV）是通過肝細胞膜上鈉離子-牛磺膽酸一協同轉運蛋白受體侵入肝細胞，引起病毒性免疫應答，導致肝細胞出現炎癥、損害或壞死。主要經由母嬰、血液、性接觸途徑進行傳播，傳播率較廣，若不及時干預控制將可能導致病毒感染率明顯增加，感染者近戰位肝硬化或肝癌。因此為了降低HBV感染風險，保證我國國民安全，我們有必要采取積極預防措施[1]。目前臨床采用保護易感人群、管理傳染源、切斷傳播途徑方法，而精確檢測HBV確診患者及潛在高危人群可以有利于疫情防控人員管理的高效率及高質量。HBV核酸診斷檢測可以直接反映機體內HBV復制情況，進而獲得更為精確的診斷結果，更適用于臨床診斷[2]。隨著乙型肝炎流行病學的變化，臨床對HBV核酸診斷提出了更高標準，而熒光定量PCR具有較高的靈敏度、操作簡便等優勢，在HBV核酸檢測中應用越來越廣泛。基于此，本研究將對熒光定量PCR檢測HBV核酸診斷的臨床價值進行分析，試驗結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年1月至12月期間本站就診的200體檢者，采集HBV血清樣本并進行熒光定量PCR核酸檢測及免疫標志物檢測。體檢者資料如下：男123例、女77例，年齡21～57歲，平均年齡（39.45±2.73）歲。

納入標準：年齡為18-75歲；體檢者均簽署知情同意書。排除標準：合并肝硬化、肝功能不全等相關疾病者；存在精神意識障礙或認知障礙者。

1.2方法 所有體檢者均需要采集HBV血液樣本，并進行熒光定量PCR核酸檢測及免疫標志物檢測。免疫標志物檢測操作如下：采用FAME全自動酶分析儀（來源：瑞士HAMILTON）及HBV-M試劑盒（ELISA）（來源：廈門新創科技有限公司）進行檢測，按照說明書進行嚴格操作，依據檢測結果將乙肝患者分為四類：大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）、小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）、HBsAg單獨+、HBsAb單獨+（注：+表明為陽性）。

熒光定量PCR檢測方法操作如下：采用熒光定量 PCR儀（來源：羅氏Cobas-z480）及HBV DNA熒光定量PCR試劑盒（來源：上海科華生物工程股份有限公司），提取HBV-DNA，直接在PCR反應管中加入5 μL 核酸釋放劑，并加入同等劑量標本（血清、血漿、標準品、對照品及質控品），運用移液槍反復吹打混勻后，靜置10 min再加入40 μL 配置好的反應液，再放置于熒光定量 PCR 儀上進行PCR擴增及核酸檢測，熱循環條件為：93℃預變性2 min，94℃5 s，60℃35 s，循環40次，再60℃時收集熒光信號，再進行自動分析計算定量結果。

1.3觀察指標 觀察HBV-DNA定量檢測結果情況。分析HBV免疫標志物及DNA定量陽性結果之間的關系：熒光定量PCR檢測陽性判斷標準為：與陽性模板進行對照，另取10μLPCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，與紫外燈下觀察，該擴增產物出現與陽性模板位置相同的特異性條帶，HBV-DNA定量拷貝數<1*103/ mL判讀為陰性。

1.4統計學方法 將HBV檢測結果數據納入SPSS23.0軟件中分析，計數資料（檢測結果）采用c2檢驗，并以率（%）表示件處理，P<0.05為差異顯著，有統計學意義。

2 結果

2.1觀察HBV-DNA定量檢測結果情況 200例HBV血清樣本中，102例HBV-DNA樣本呈陰性，98例為陽性，陽性最低定量為1.87*103，陽性最高定量為9.47*103，詳見表1。

2.2分析HBV免疫標志物及DNA定量陽性結果之間的關系 HBV免疫標志物檢出陽性率104例（52.00%）；其中大三陽（HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+）組樣本48例（46.15%），小三陽（HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+）樣本56例（53.85%）；采用HBV-DNA定量檢測，大三陽陽性檢出率（46.08%）；小三陽性檢出率（53.92%）；兩組樣本陽性檢出率無統計學差異（P>0.05）。詳見表2。

3 討論

HBV感染呈現世界性流行趨勢，各地區HBV感染流行強度差異較大，據我國疾控預防控制中心（Centers for Disease Control， CDC）研究調查顯示，慢性HBV感染者約7000萬例，因此我國防治HBV形勢嚴峻，需要加強HBV診斷、預防工作，積極檢測HBV感染標志物，做到早診斷早治療，降低疾病危害，進而推動世界衛生組織（World Health Organization， WHO）提出的消除病毒性肝炎目標實現。臨床主要采用HBV血清標志物進行診斷，通過了解機體免疫狀態，間接性反映出病毒復制情況，但該檢查手段存在一定局限性，當病毒處于變異狀態或窗口期時，出現假陰性結果的概率極高[3]。因此有必要尋找診斷更精確，適用范圍更廣的診斷技術。

本研究結果顯示，HBV免疫標志物檢出陽性率與采用HBV-DNA定量檢測陽性檢出率無統計學差異（P>0.05）。熒光定量PCR屬于有效定量檢測方法，其工作原理是通過，操作較為簡便，可以降低核酸交叉感染風險，且檢測性能較高可以滿足臨床檢測需求[4]。且HBV-DNA定量檢測可以準確反映出HBV復制具體情況[5]。血清標志物檢測（HBV-M）主要是通過反映人體對HBV的免疫反映狀態，間接反映出HBV復制情況；而HBV核酸診斷可以直接定量檢測，對于臨床診斷感染情況及療效評估有著更好的指導意義。熒光定量PCR檢測可以縮短HBV感染后的窗口期，同時對于突變株來說，DNA診斷為監測的唯一可靠指標，同時該技術具有較好的靈敏度及重復性，可以實時監測目的基因擴增數量，定量評估并區分乙肝病毒。

綜上所述，熒光定量PCR檢測HBV核酸診斷臨床效果顯著，可診斷結果較為精準，可有效反映出HBV在體內的復制結果，相較于免疫標志物檢測具有更好的靈敏度及特異性，值得臨床推廣。

參考文獻

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[2] 王可可， 楊柯， 趙俊， 等. 基于微流控芯片的熒光定量PCR法快速檢測乙肝病毒核酸[J]. 分析科學學報， 2018， 34（4）： 450-454.

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[4] 周丹， 何進才， 李惠貞， 等. 熒光定量PCR儀檢測乙型肝炎病毒核酸的性能驗證及評價[J]. 檢驗醫學與臨床， 2019， 16（1）： 80-84.

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[6] 李育敏， 闞麗娟， 張水蘭， 等. 熒光定量P CR測定HBV DNA的抗干擾能力評價[J]. 臨床檢驗雜志， 2020， 38（2）： 142-144.