淺談PCR技術在醫學檢驗中的應用

趙婧 程琦云 陳依銘

【摘要】在當下，PCR技術已成為一個最基本且應用十分廣泛的技術，廣泛應用于各大領域，如醫學診斷、環境監測、食品行業、流行病學、基因工程等。PCR技術因其靈敏度高、特異性強、快速簡便等優點而深受廣大醫學學者的喜愛。在醫學檢驗工作中，PCR技術在保證了樣品檢驗的準確性和可靠性的基礎上還節省了大量的人力、物力和財力。PCR技術也因其較高的應用價值被應用于細菌檢驗、寄生蟲檢驗、病毒檢驗等方面，在臨床檢驗診斷中作出了極大的貢獻。本文將簡單介紹一下PCR技術在醫學檢驗中的應用。

【關鍵詞】PCR技術;醫學檢驗;應用

1.PCR與醫學檢驗

PCR技術是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，兩個人工合成的引物序列決定了其特異性。一次變性、退火、延伸的過程為一個PCR的循環，經過25-30個循環之后，可使模板DNA片段的數量呈幾何級數倍增。PCR技術特異性強、敏感性高、快速、簡便、對起始材料質量要求低，但也存在一些問題，例如：可能會出現少許非擴增性異物和引物聚體，常規的PCR技術還可能有浪費成本、費時費力的現象、待檢樣品還易被污染，導致檢驗結果出現偏差。經眾多專家學者不斷探索與改進，如今已探究出多種先進的PCR技術檢驗模式，如實時定量PCR技術（RT-PCR）、PCR-酶聯免疫吸附試驗、巢式PCR 等。PCR技術作為一項臨床醫學實驗診斷方法，為臨床疾病的診斷從基因方面提供了更加準確的診斷依據，便于檢驗的進行。

2.PCR技術在細菌檢驗中的應用

人體很多疾病都與腸道菌群失調有關，一些與腸道感染性疾病有關的重要細菌，如志賀氏菌和沙門氏菌等，它們的發病率高、傳播速度快、耐藥發生率高;細菌傳統檢測方法是將其培養并用生化和血清學對其鑒定，此法檢測效率不高，因此，檢驗人員在改進過去傳統檢測方法的同時結合時代技術的發展，引進了更加先進、靈敏度更高的檢測方法，如PCR技術。即我們可以把腸道細菌特異性靶基因作為研究對象，設計并合成PCR引物，以臨床微生物樣本的基因組DNA為模板，用PCR技術對腸道細菌特異性靶基因快速檢測。傳統PCR有著可能出現假陽性、假陰性，只可以進行定性檢測的不足。如今更加完善的PCR技術已應用于細菌檢測當中，如實時熒光定量PCR，可進行實時檢測，用于絕對或相對定量分析，還解決了PCR的污染問題，常用于志賀菌、沙門菌、大腸埃希菌的檢測。

3.PCR技術在寄生蟲檢驗中的應用

瘧疾是由瘧原蟲引起的蟲媒傳染病，是世界上最常見和危害最重的熱帶病之一，其在紅細胞內進行增值，存在著輸血感染的危險。雖然我國即將消除本土感染的瘧疾，但輸入性病例逐年增多。因此，我們需要繼續重視對瘧原蟲的檢測。顯微鏡鏡檢是診斷瘧疾的金標準，但結果會受許多因素的影響，如血片質量、染色質量、鏡檢人員的檢驗習慣和能力。當瘧原蟲數量少、形態學不典型時，就易發生漏檢，因此，效率更高、精密度更好的PCR技術被運用于瘧原蟲的檢測。據文獻報道， 巢式PCR的陽性檢出率與鏡檢相同，熒光定量PCR法比巢式PCR靈敏性和特異性較高，利于輸入性患者的檢測以及對疑似瘧疾患者的快速瘧疾分型鑒定。因此，在瘧疾的復核診斷中，檢驗人員要結合患者病情及實驗室的具體情況選擇更為合適的檢測方法，在實驗室條件允許的情況下，可用熒光定量PCR代替巢氏PCR以提高瘧原蟲的陽性檢出率。由此可見，PCR技術在寄生蟲檢驗中有著重要作用。

4.PCR技術在病毒檢驗中的應用

乙型肝炎是一種嚴重危害人體健康的世界性傳染病，慢性乙肝是一種乙型肝炎病毒持續感染6個月以上，肝臟出現不同程度纖維化或炎癥壞死的慢性疾病，該病的病程較長、臨床癥狀反復發作，患者會出現食欲不振等癥狀，嚴重影響了患者生活質量，還增大了患抑郁的風險。ELISA方法測定乙肝五項是輔助診斷乙肝的常規方法，利于發現急性乙肝，但此法對于檢測慢性乙肝的靈敏度逐漸下降，乙肝病毒變異之后，此法更加不靈敏，需檢測HBV-DNA才可以確診，可用具極高特異性和敏感性的熒光定量PCR檢驗。但當標本出現溶血、脂血和標本處理不當的情況時，會使檢測結果不準確。而且它只能檢測血中游離的HBV-DNA，當病毒與肝細胞染色體整合在一起或者當患者的HBV-DNA突變的情況下，FQ-PCR不能檢出病毒，但ELISA可以，因此，在檢驗乙肝病毒感染的時候，我們要靈活選用適當的方法，提高檢出率。

小結

PCR技術是一種放大擴增特定的DNA片段的分子生物技術，其可將極微量的生物標本中的靶核酸在短時間內大量復制擴增至可檢測范圍，因此其具有高度靈敏性和特異性。當然，在面對原始PCR費時、成本高、無法定量等缺點時，廣大專家學者對傳統PCR技術進行改進升級，將實時熒光PCR等技術運用于檢驗之中，這些技術將更加高效、準確。隨著技術的不斷改進與快速發展，它在醫學檢驗中發揮著重要作用，我們需結合實際情況，選擇合適的方法，提高檢驗效率，相信未來PCR技術會在醫學檢驗方面發揮更大的作用。

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