通宣理肺丸中鹽酸麻黃堿含量的方法優化

楊勇幫 施偉兵 許國棟

通宣理肺丸主要能夠解表驅寒，理肺止嗽。用于肺氣不宣所致的感冒咳嗽，鼻塞，流鼻涕，頭疼，無汗，肢體酸軟；主要材料有紫蘇葉、前胡、桔梗、苦杏仁、麻黃、甘草、陳皮、半夏（制）、茯苓、枳殼（炒）、黃芩[1]。主要成分是麻黃，它的化學成分主要含有生物堿、黃酮、鞣質、有機酸、揮發性成分等[2]。麻黃有發汗，平喘的效果，其中鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿是主要成分[3]，大約約占麻黃堿總量的70 %。藥典中采用高效液相色譜法測定其中鹽酸麻黃堿的含量來控制其藥品質量，因操作方法復雜，穩定性不好，甚至出現比較多的干擾峰[4]。鹽酸麻黃堿分子式為C10H15NO·HCl，白色細長狀結晶或者結晶性粉末，是麻黃堿的鹽酸鹽。麻黃堿又叫做麻黃素，沸點225℃，熔點33~39℃，易溶于氯仿，乙醚[5]。麻黃堿是制造毒品的主要原料[6]；正確的使用可用于由桿菌引起的急性呼吸道傳染病，支氣管哮喘，枯草熱及其他過敏性疾病，還能對抗脊椎麻醉引起的血壓降低，也用于重癥肌肉使不上力，痛經等疾患[7-10]，還可以作為中樞神經系統興奮劑。筆者選取多種方法提取通宣理肺丸中麻黃堿，其中有文獻方法[11-13]，最后選定一種方法來進行系統實驗，并與2020年版《中華人民共和國藥典》一部，通宣理肺丸提取實驗進行對比，得出結論選出方法，用選取的方法進行條件選取，樣品處理，線性，精密度，重復性，穩定性，回收率的實驗，并進行實驗數據處理。

1 材料和試藥

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀，色譜柱（Agilent ZORBAX SB.C184.6×150 mm 5 μm），超聲波清洗儀（CPX5800H.C）。

1.2 試藥

通宣理肺丸（市售），通宣理肺片（市售），通宣理肺顆粒（市售）（批號分別為：20191201、20200303、20200701），磷酸，三乙胺，磷酸二氫鉀，硅藻土，乙醚，二氯甲烷，鹽酸麻黃堿標準品（中國食品藥品檢定研究院，含量：99.8%）。

2 方法

2.1 實驗方法

取通宣理肺丸大蜜丸約2 g，精密稱定，加入硅藻土2 g，研勻。精密加入水50 mL，密塞，稱定重量，超聲處理1小時，放冷至室溫，補足重量，濾過，精密量取續濾液20 mL，加濃氨試液3 mL，用二氯甲烷振搖提取2次，每次30 mL，合并二氯甲烷液，加入5 %鹽酸甲醇溶液2 mL，放置30 min，揮發干，殘渣加50 %的甲醇溶液溶解并轉移至10 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，轉移至進樣瓶。

2.2 方法對比

2.2.1 按《中國藥典》2015年版方法對鹽酸麻黃堿對照品和樣品進行高效液相測定 結果見圖1、圖2。

2.2.2 按本實驗方法對鹽酸麻黃堿對照品和樣品進行高效液相測定 結果見圖3、圖4。

2.3 實驗結果

由以上圖1、2、3、4可知2015年版藥典方法與實驗方法對照品進高效液相兩圖的峰比較明顯，沒有其他雜峰的干擾，峰型也較好。但對比兩種方法樣品進高效液相2015年版藥典方法明顯比實驗方法要差，圖2中所需要的峰與其他雜峰連在一起沒有洗脫開。兩個方法可以看出實驗方法的峰面積比2015年版藥典方法的峰面積大，在后面的實驗中使用的方法是實驗方法。

圖 1鹽酸麻黃堿對照品高效液相色譜圖

圖 2 樣品高效液相色譜圖

2.4 色譜條件與系統適用性實驗

色譜柱：Agilent ZORBAX SB.C18 4.6×150 mm 5μm

流動相：乙腈.0.2%磷酸（含0.2%三乙胺）（3：97）

檢測波長：UV210 nm

流速：1 mL/min

此條件下分離度大于2.0，理論塔板數按鹽酸麻黃堿峰計算不低于5 000。

2.5 對照品溶液的制備

精密稱量鹽酸麻黃堿對照品12.12 mg，置于20 mL容量瓶中，加50 %甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液（0.604 8 mg/mL）。精密量取儲備液5 mL置50 mL容量瓶中，加50 %甲醇溶解并稀釋至刻度，即得60.48 μg/mL對照品溶液。

2.6 線性范圍考察

2.6.1 濃度梯度 分別精密量取60.48 μg/mL對照品溶液各1，2，3，5，10，25 mL置于25 mL容量瓶，精密量取儲備液（0.604 8 mg/mL）2 mL置于10 mL容量瓶，加入50 %甲醇溶液至刻度，配制成不同濃度的鹽酸麻黃堿對照品溶液，分別精密量取上述七種不同濃度的對照品溶液各10 μL進樣，注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品濃度（μg/ml）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，結果見表1。

表 1 對照品濃度與峰面積

表 2 精密度實驗峰面積

表 3 以峰面積計算含量

表 4 穩定性實驗時間與峰面積

表 5 回收率計算表

由圖5可知酸麻黃堿回歸方程為y=21.001 95×2.757 54，R2=0.999 99（n=6），鹽酸麻黃堿在該范圍內呈良好線性關系。

圖 3 鹽酸麻黃堿對照品高效液相色譜圖

圖 4樣品高效液相色譜圖

圖 5對照品濃度與峰面積關系圖

根據文獻方法按鹽酸麻黃堿對照品溶液1，5，10，15，20，25，30 μL分別注入液相色譜儀，測定峰面積繪制標準曲線。

2.6.2 精密度實驗 精密量取60.48 μg/mL對照品溶液以10 μL進樣量注入液相色譜儀，連續進樣6次測定精密度，結果見表2。以峰面積計算，求得RSD值為0.07%。

2.6.3 重復性試驗 取同一批號的通宣理肺丸樣品按所確定的樣品處理方法平行制備供試品溶液6份，以10 μL為進樣量注入液相色譜儀，測定鹽酸麻黃堿的峰面積，計算出含量，結果見表3。經計算樣品中鹽酸麻黃堿含量平均值（n=6）為0.248 3 mg/g；RSD為4.16 %。

2.6.4 穩定性試驗

取新配制的鹽酸麻黃堿對照品在室溫下分別在0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，12 h，24 h進樣，以10 μL為進樣量注入液相色譜儀，測定鹽酸麻黃堿對照品的峰面積；經計算RSD為1.28 %，結果見表4。結果表明鹽酸麻黃堿在24小時內穩定。

2.6.5 回收率試驗

精密稱取上述計算出含量的樣品0.5 g，取6份，分別精密加入0.2 mL鹽酸麻黃堿對照品，按所選定的實驗方法制備供試品溶液，測定，計算，結果見表5。由表5可知計算出0.5 g樣品與0.2 mL鹽酸麻黃堿對照品含有的鹽酸麻黃堿平均測得量為0.240 2 mg，平均回收率為95.88 %。

3 討論

在預實驗中，筆者選用多種方法來進行比較試驗，最后選定2020年版藥典方法與實驗方法來對比，總體上來說藥典方法比較繁瑣，穩定性差，色譜測定時出現較多的干擾峰；而本試驗優化方法提取更加簡單，容易控制。在2020年版藥典方法中，使用的乙醚屬于易制毒，易揮發，在實驗過程中乙醚的使用不當，與二氯甲烷相比，乙醚毒性更強、更加容易揮發；提取時乙醚處于上層不方便提取。相較本實驗方法而言，2020年版藥典方法更加復雜，在加熱過程中極易讓鹽酸麻黃堿損失。而實驗方法中二氯甲烷不屬于易制毒，避免了加熱，減少了鹽酸麻黃堿的損失，同時又加入了5%鹽酸甲醇，使其生成了鹽酸麻黃堿，沸點也隨之提升，提高了提取效率，而且使實驗方法更加簡單方便。預實驗前選取了兩種流動相，一種是乙腈.0.02 mol/L磷酸二氫鉀溶液（含0.2%三乙胺，磷酸調節PH至2.7）（3：97），另一種是乙腈.0.2%磷酸（含0.2%三乙胺）（3：97）；第一種流動相是一種鹽類，顯酸性，在進液相時色譜柱會出現堵塞的現象，會對色譜柱產生損壞，并且使峰沒有洗脫開，有較多的干擾峰，配制比較麻煩；第二種流動相配制比較簡單，能夠使峰洗脫開，并且沒有雜峰的干擾。還選取兩個不同批號的通宣理肺丸進樣實驗后的平均峰面積分別為190.87，204.30，計算后濃度為0.228 4 mg/g，0.245 7 mg/g。通宣理肺顆粒，通宣理肺片也分別進樣實驗，通宣理肺顆粒的平均峰面積為221.98，計算后濃度為0.266 3 mg/g，通宣理肺片的平均峰面積為1 029.88，計算后的濃度為1.237 9 mg/g。

通過優化并對建立的方法進行考察：從實驗條件進樣考察，得到回歸方程為y=21.001 95×2.757 54，R2=0.999 99（n=6），說明鹽酸麻黃堿濃度在2.42 μg/mL~120.96 μg/mL范圍內成線性關系良好。精密度試驗中鹽酸麻黃堿峰面積的RSD值為0.07%，表明儀器精密性良好。穩定性試驗中鹽酸麻黃堿的峰面積RSD值為1.28%，表明供試品溶液在24 h內基本穩定。重復性試驗中鹽酸麻黃堿峰面積的RSD值為 4.16%，表明試驗方法的重復性良好。加樣回收試驗中可知鹽酸麻黃堿的回收率為95.88%，最終確定優化的試驗方法準確、可靠、安全、實用強，可為通宣理肺相關劑型系列產品優化和完善質量標準提供參考依據。